益宫胶囊的药理实验研究

【摘要】 　　目的 研究益宫胶囊的抗疲劳、免疫调节、止血、促凝血作用。方法采用小鼠游泳法和耐常压缺氧模型观察益宫胶囊抗疲劳及耐缺氧作用；观察益宫胶囊对正常小鼠和环磷酰胺所致免疫抑制小鼠脾、胸腺重量指数和血清IgG水平的影响。以断尾法和毛细玻管法研究益宫胶囊止血、促凝血作用。结果正常及免疫抑制小鼠游泳、耐常压缺氧时间明显延长，胸腺、脾脏重量指数及血清IgG含量显著升高(P<0.05)；正常小鼠出血、凝血时间缩短(P<0.05)。结论益宫胶囊有抗疲劳和抗缺氧的作用，对免疫功能有明显的促进作用，并且有止血、促凝血的功效。

【关键词】 益宫胶囊； 抗疲劳； 抗缺氧； 免疫调节； 止血； 凝血

　　Abstract:ObjectiveTo study anti-fatique, immunoregulative, hemostasis and blood coagulation promotive effects of Yigong capsules.MethodsOne time maximum swimming time of mice and their subsisting time in an airtight container under normal pressure were recorded. The weight indices of spleen and thymus were taken and serum IgG concentrations were measured. Bleeding time and in vitro coagulation time were recorded. ResultsYigong capsule was found to significantly prolong the swimming time of normal and immunosuppressed mice, as well as their subsisting time in an airtight container under normal pressure (P<0.05). Yigong capsule raised thymus and splenic indices and serum IgG level in both normal and immunosuppressed mice. Bleeding time and in vitro coagulation time in mouse were also prolonged (P<0.05). ConclusionYigong capsules have anti-fatigue, anti-hypoxia, immunoregulative, hemostasis and blood coagulation effects.

　　Key words：Yigong capsules； Anti-fatique； Anti- hypoxia； Immunoregulation； Hemostasis； Blood coagulation

益宫胶囊(Yigong Capsules, YC)由补骨脂、麦冬、甘草等多味药组成，具有补气养阴、固肾止血之功。此胶囊为复方制剂，方中单味药的药理作用有相关文献报道，而复方作用未见文献研究。本文进行了抗应激、免疫调节、止血、促凝血等与益宫胶囊功能主治有关的药效学研究。现报道如下。

　　1 器材

　　1.1 动物

　　昆明小鼠，18～22 g，雌雄各半；BALB/c小鼠，14～16 g，雌雄兼用，均为清洁级，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

　　1. 2 仪器

　　电子天平（TYPE AY220，Shimadazu Corporation, Made in Japan），酶标仪（Microplate Reader RT-2100C），秒表，毛细玻璃管（内径1 mm，长10 cm）。

　　1.3 药品

　　生理盐水,女贞子煎剂2 g·ml-1，白及水煎液0.2 g·ml-1，人参水煎液0.2 g·ml-1（均为折成生药量算，自制），环磷酰胺(CTX)（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号007425）,益宫胶囊（自制成不同浓度的水溶液，至4℃下保存备用）。

　　2 方法

　　2.1 小鼠抗疲劳实验［1］

　　2.1.1 对正常小鼠的影响

　　取雌雄各半的昆明种小鼠48只，随机分为生理盐水组、人参组、YC低剂量组、YC高剂量组,每组12只。生理盐水组和CTX组每天给生理盐水0.3 ml, 人参组给予人参水煎液1 g·kg-1, YC低剂量组给予益宫胶囊1.6 g·kg-1, YC高剂量组给予益宫胶囊5 g·kg-1, 连续灌胃给药7 d。末次给药1 h后在小鼠尾部负重（体重的5%），放入水深20 cm，水温（20±0.5）℃的玻璃缸内游泳。记录小鼠从入水到沉入水底不能再游出水面的时间。

　　2.1.2 对免疫抑制小鼠的影响

　　取雌雄各半的昆明种小鼠60只，随机分为生理盐水组、人参组、CTX组、YC低剂量组、YC高剂量组,每组12只。除生理盐水组外，其余各组小鼠于给药后第4天腹腔注射CTX 100 mg·kg-1，连续给药2 d，1次/d，制成免疫器官减重模型。生理盐水组和CTX组每天给生理盐水0.3 ml, 人参组给予人参水煎液1 g·kg-1，YC低剂量组给予益宫胶囊1.6 g·kg-1, YC高剂量组给予益宫胶囊5 g·kg-1，连续灌胃给药7 d。重复上述游泳实验。

　　2.2 小鼠耐缺氧实验［1］

　　2.2.1 对正常小鼠的影响

　　取雌雄各半的昆明种小鼠48只、分组和给药同“2.1.1”项，末次给药1 h后将小鼠放人容积为250 ml的广口瓶中，塞紧瓶盖，用凡士林封口，不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠存活时间。

　　2.2.2 对免疫抑制小鼠的影响

　　另取小鼠60只，以CTX复制免疫抑制模型，分组和给药同“2.1.2”项。重复上述缺氧实验。

　　2.3 YC对小鼠免疫器官重量的影响［1］

　　2.3.1 对正常小鼠的影响

　　取雌雄各半的昆明种小鼠48只, 随机分为生理盐水组、女贞子组、YC低剂量组、YC高剂量组,每组12只。生理盐水组每天给生理盐水0.3 ml, 女贞子组给予女贞子水煎液1 g·kg-1， YC低剂量组给予益宫胶囊1.6 g·kg-1, YC高剂量组给予益宫胶囊5 g·kg-1, 连续灌胃给药7 d。于末次给药24 h后，称量各组小鼠体重，摘眼球取血（收集备用），脱颈椎处死小鼠，迅速取出完整脾脏和胸腺，修去脂肪、系膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脏器指数［胸腺（脾）指数＝胸腺（脾）重 (mg)/ 体重(g)］。　2.3.2 对免疫抑制小鼠的影响

　　另取小鼠60只，以CTX复制免疫抑制模型，分组和给药同“2.3.1”项，重复“2.3.1”项中实验。

　　2.4 YC对小鼠血清IgG含量的影响

　　取“2.3”中收集的全血，在4℃下放4h后取出离心，分离血清，用酶联免疫吸附法（ELISA），测定IgG含量［2］ 。测定波长450 nm，分设血清空白与抗体空白管。

　　2.5 断尾法出血实验［3］

　　取雌雄各半的昆明种小鼠48只，18～22 g，随机分为生理盐水组、白及组、YC低剂量组、YC高剂量组，每组12只。白及组给予白及水煎液4 g·kg-1, 低剂量组给予益宫胶囊1.6 g·kg-1，高剂量组给予益宫胶囊5 g·kg-1，灌胃给药7 d，末次给药1h后分别将各组鼠尾(距尾尖5mm处)横断，待血液自行溢出后用秒表开始计时，并每隔30s用滤纸吸去血滴1次。以鼠尾断面血液溢出并开始计时至用滤纸吸断面时无血时间作为出血时间，记录各组动物出血时间。

　　2.6 体外毛细管法凝血实验［4］

　　取雌雄各半的昆明种小鼠48只，18～22 g，分组和给药同“2.5”项,于末次给药1h后用玻璃毛细管插入小鼠眼内眦球后静脉丛，深约4～5 mm，轻轻转动再缩回。自血液流入管内开始计时，血液注满后取出毛细管平放于桌上，每隔30 s折断两端毛细管约0.5 cm,并缓慢向左右拉开，观察折断处至凝血丝出现为止，所历时间即为血凝时间，毛细管两端数据的平均值即为该鼠的血凝时间。

　　2.7 统计学处理

　　所有实验数据均以均数±标准差来表示，进行t检验。

　　3 结果

　　3.1 小鼠抗疲劳实验及耐缺氧实验

　　由表1可知，给予1 g·kg-1人参、5 g·kg-1YC组小鼠游泳时间及常压耐缺氧时间均大于生理盐水组，差异有显著统计学意义（P<0.05）。由表2知CTX组小鼠游泳时间及常压耐缺氧时间均小于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.05）；1 g·kg-1人参、5 g·kg-1YC组、1.6 g·kg-1YC组小鼠游泳时间及常压耐缺氧时间均大于CTX组，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。表1 YC对正常小鼠游泳时间和常压耐缺氧时间的影响(略)表2 YC对免疫抑制小鼠游泳时间和常压耐缺氧时间的影响(略)

　　3.2 YC对小鼠胸腺、脾脏重量及血清IgG含量的影响

　　由表3可知与生理盐水组相比，给予25 g·kg-1·d-1女贞子和1.6，5 g·kg-1·d-1的YC后，小鼠胸腺、脾脏重量及血清IgG含量均明显增加，差异有显著性意义（P<0.01，P<0.05，P<0.01）。由表4可知CTX组小鼠胸腺、脾脏重量及血清IgG含量均小于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.05）；给予25 g·kg-1·d-1女贞子和1.6 ，5 g·kg-1·d-1的YC后，小鼠胸腺和脾脏及血清IgG含量均大于CTX组，差异有显著统计学意义（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。表3 YC对正常小鼠胸腺、脾脏重量及血清IgG含量的影响(略)表4 YC对免疫抑制小鼠胸腺、脾脏重量及血清IgG含量的影响(略)

由表5可知，给予4 g·kg-1·d-1白及和1.6，5 g·kg-1·d-1YC的小鼠出血和凝血时间均小于生理盐水组，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05，P＜0.01)。表5 YC对小鼠断尾出血时间及体外毛细管法凝血时间的影响(略)

　　4 讨论

在小鼠游泳及耐缺氧实验中胶囊高、低剂量组小鼠的游泳时间(16.79±3.18, 14.91±5.22) min及常压耐缺氧时间(23.76±4.43,21.65±5.41)min与生理盐水组(14.87±3.85, 20.42±4.74) min比较均有显著性差异（P<0.05和P<0.05），表明益宫胶囊可提高小鼠的抗疲劳能力及对缺氧的耐受力，且胶囊高、低剂量组(14.24±5.90）；（21.04±3.09）；（13.65±2.97）；（20.71±3.67) min均可对抗环磷酰胺引起的抗疲劳与耐缺氧能力下降(11.57±3.37），（18.08±3.62)。

在给BABL/c小鼠腹腔注射CTX后，发现小鼠胸腺、脾脏指数,血清Ig含量(4.01±10.35），（5.17±0.49），（68.44±12.56） mg·L-1较生理盐水组(4.42±0.51），（5.76±0.63），（81.31±22.23） m/g·L-1明显下降，同时阳性药女贞子组(4.45±0.47）,（5.92±0.56）, （82.41±15.52） mg·L-1的这些指标较CTX组均明显增高，说明本法所致免疫器官减重小鼠模型是可靠的。

　　从表5中可以看出，益宫胶囊可缩短小鼠断尾后的出血时间及体外凝血时间，有一定的止血、促凝血作用。

综上所述，经过实验验证，益宫胶囊有抗疲劳和抗缺氧的作用，对机体免疫功能有明显的促进作用，可对抗环磷酰胺引起的机体免疫力下降，以及止血、促凝血功效。

【参考文献】
　　［1］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社,1994：780.

　　［2］王钦富.免疫学及免疫学检验实验技术［M］.北京：中国医药科技出版社,1995：38.

　　［3］徐叔云，卞如濂,陈 修.药物实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社,2002：1270.

　　［4］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社,1991：286.