肾石消片提取工艺优选研究

作者：赵琳，童晓青，佟占柱，陈翠英

【摘要】 　　目的针对肾石消片的提取工艺进行研究。方法通过正交试验以处方中金钱草中所含总黄酮的提取量和出膏率为定量指标，确定合理的醇提取工艺。结果醇提取最佳工艺条件是：乙醇浓度为60%，加醇量为10，8，8倍，提取3次，第1次提取1.5 h，第2次、第3次分别提取1 h，出膏率及有效成分提取率均较高，且重现性较好。结论 优选得到的工艺稳定可行，适合工业大生产要求。

【关键词】 提取工艺 正交设计 紫外分光光度法 总黄酮

　　Abstract：ObjectiveTo study the optimum extracting process of Shenshixiao tablet.MethodsThe proper extracting condition was optimized by orthogonal tests with the amount of extracted total flavonoids and the ratio of poultice as index in Herba Lysimachiae.ResultsThe proper extracting condition with alcohol of which the concentration was 60 percent. The herbs were extracted with 10, 8 and 8 times alcohol for 3 times while 1.5 hours for the first time and 1 hour for the second and the third time respectively.As a result, the amount of extracted total flavonoids and the ratio of poultice were high and reoccurred well.ConclusionOptimized process condition is scientific, stable and practicable in manufacture.

　　Key words：Extracting processes; Orthogonal tests; UV-spectrophotometry; Total flavonoids

　　肾石消片为治疗肾结石的常用方剂，具有清热利尿、通淋排石的功效，用于湿热下注所致的热淋，石淋。方中金钱草清利湿热，通淋，消肿，用于热淋、砂淋，尿涩作痛，肝胆结石，尿路结石，为君药；海金沙清利湿热，通淋止痛，用于热淋，砂淋，血淋，膏淋，尿道涩痛，为臣药；车前草清热利尿，用于热淋涩痛，牛膝利尿通淋，用于尿血血淋，共为佐药；泽泻利小便，清湿热，用于小便不利，热淋涩痛，为使药。金钱草中主要含有槲皮素、槲皮素3O葡萄糖苷等黄酮类成分；海金沙中含有海金沙素、有机酸等成分；车前子中含有有机酸、多糖等成分；牛膝中含有三萜苷类等成分；泽泻中含有四环三萜类有效成分［1，2］。

　　为设计该新药的科学合理的提取工艺，采用正交设计实验，探索科学合理的提取工艺。从中最后确定出一条优良的提取工艺流程路线，然后对此工艺流程进行扩大实验，不断完善，从而开发出一种适用于药厂生产的新药。

　　1 器材

　　1.1 仪器722W-紫外可见分光光度计；KQ3200超声波清洗器（江苏昆山），分析天平（上海第二天平仪器厂），HH-4数显恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司），SHB-3循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）。

　　1.2 试剂乙醇（中国医药公司），亚硝酸钠（沈阳试剂一厂），硝酸铝（上海试剂总厂第四分厂），氢氧化钠（沈阳医药股份有限公司）。

　　1.3 原料药材金钱草，海金沙，牛膝，车前草，泽泻。由辽宁中医药大学统一购买，经鉴定均为正品。

　　2 方法与结果

　　2.1 紫外分光光度法测定总黄酮含量［3，4］

　　2.1.1 对照品制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品0.014 53 g置100 ml 量瓶中，加乙醇适量超声使溶解，放冷，用乙醇稀释到刻度，摇匀，即得。

　　2.1.2 标准曲线制备精密量取芦丁对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml,分别置于25 ml量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠1 ml，使混匀，放置6 min。加10%硝酸铝1 ml，摇匀，放置6 min。加氢氧化钠10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以相应的试剂为空白溶液，按照紫外-可见分光光度法在500 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。见图1。

　　标准曲线为A=9.551 518C-0.000 142，相关系数r=0.999 5，线性范围为0.0145 3～0.087 18。

　　2.1.3 测定法取浸膏0.15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，摇匀，超声处理5 min，放置3 h以上，滤过，精密量取续滤液6 ml，置25 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品2 ml，置25 ml量瓶中，自“加水至6 ml”起，依法测定吸光度。同法精密量取供试品2 ml，置25 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为空白溶液。从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得。2.2 正交实验设计和实验结果肾石消片的提取工艺为醇提工艺，我们称取处方量药材，运用L9(34)正交实验设计法进行实验，以出膏率和总黄酮的提取效率为指标，各称取提取所得干膏0.15 g，按上述检测方法计算出干膏中总黄酮含量，正交实验的因素水平安排见表1，“综合得分=( 出膏率/最大值×0.5+总黄酮含量/最大值×0.5)×100%”计算综合得分。结果见表2及图2，方差分析见表3。表1 因素水平（略）表2 正交实验设计及结果分析（略）表3 方差分析（略）

　　从实验结果可看出，最佳条件为A2B1C2D3，即以60%乙醇为溶媒，提取3次，溶媒为10，8，8倍量，第1次1.5 h，第2次、第3次均为1.0 h。

　　2.3 出膏率的考察取1倍处方的药材，按制备工艺进行提取，考察出膏率。通过实验考察。结果见表4。表4 出膏率考察（略）

　　根据考察结果，确定干燥后的出膏率平均为17.33%，实际生产中出膏率应不低于15.0%。

　　3 讨论

　　多数考察以处方中君药为考查指标,由于金钱草中含有总黄酮测定方法为分光光度法，因此在醇提正交实验中以总黄酮作为指标性成分，海金沙为处方中臣药，用总黄酮为测定指标亦有一定的科学依据。

　　提取工艺正交考察中结果分析时，很多人考虑单纯用有效成分含量为指标不全面，故以有效成分含量与出膏率综合评价得分为评定标准。

　　确定本次实验的最佳提取工艺条件是：乙醇浓度为60%，加醇量为10，8，8倍，提取3次，第1次提取1.5 h，第2次、第3次均提取1 h，出膏率及有效成分提取率均较高，且重现性较好。优选得到的工艺稳定可行，适合工业大生产要求。

【参考文献】
　　［1］张集盘.RP-HPLC法测定金钱草中槲皮素和山柰素两种黄酮成分的含量［J］.江苏药学与临床研究，2005,13(1).31.

　　［2］郑虎占，董泽宏，佘靖，等.中药现代研究与应用［M］. 北京：学苑出版社，1997：3693.

　　［3］国家药典委员会.中国药典，第Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：576.

　　［4］戈升荣，安富荣，袁静，等.排石合剂质量标准研究［J］.中草药，2000，31（12）：904.