越鞠保和软胶囊薄层鉴别与定量测定研究

【摘要】 　　目的为制定越鞠保和软胶囊的质量控制方法。方法采用薄层色谱法（TLC）鉴别木香、川芎、苍术，采用高效液相色谱法（HPLC）测定栀子苷的含量。结果通过方法学考察，栀子苷进样量在20～320ng范围内呈良好的线性关系。栀子苷的平均回收率为98.37％（n＝9），RSD为1.88%。结论该方法简便、准确，重复性好，可用于越鞠保和软胶囊的质量控制。

【关键词】 越鞠保和软胶囊 薄层色谱法 栀子苷 高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for the quality control of Yueju Baohe Soft Capsules.MethodsRadix Aucklandiae, Rhizoma Chuanxiong,Rhizoma Atractylodis were identified by TLC. The jasminoidin content was determinated by HPLC.ResultsThe methodological study showed that a good linear correlation existed in the range of 20~320ng for jasminoidin .The average recovery of jasminoidin was 98.37%(n=9) and RSD was 1.88%.ConclusionThe determination methods are simple ,accurate ,and reproducible.The methods can be used for quality control of Yueju Baohe Soft Capsules .

　　Key words：Yueju Baohe Soft Capsules; TLC ; Jasminoidin； HPLC

　　越鞠保和软胶囊为我公司开发的中药8类新药，由栀子、苍术、川芎、木香、香附、槟榔、神曲等7种中药经提取、加工而成，具有理气解郁、宽中除满等功效。在临床上用于胸脘痞闷，腹中胀满，饮食停滞，嗳气吞酸等症有明显的疗效。为了有效地控制本产品的质量，本实验对方中苍术、川芎、木香进行了TLC研究，采用HPLC法对栀子中栀子苷进行定量研究，建立了越鞠保和软胶囊的质量控制方法。

　　1 器材

　　1.1 材料越鞠保和软胶囊，由河北以岭医药研究院提供（批号：031204）；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110749-200309）；去氢木香内酯（中国药品生物制品检定所，批号1525-200102）；川芎药材（中国药品生物制品检定所，批号：0919-200004）；苍术药材（中国药品生物制品检定所，批号：0932-200204）。

　　1.2 仪器 美国安捷伦高效液相色谱仪；紫外检测器；梅特勒-托利多电子天平。

　　1.3 试剂 乙腈（色谱纯）；水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 薄层鉴别

　　2.1.1 木香 取本品10粒，倾出内容物，置具塞锥形瓶中，加盐酸－甲醇（1∶100）25 ml，超声处理20 min，静置，滤过，滤液浓缩至约5 ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5~10 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-环己烷(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸乙醇试液，105 ℃烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

　　图1 木香薄层色谱图（略）

　　2.1.2 川芎 取本品10粒，倾出内容物，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取3次，乙醚用量为15 ml/次，合并乙醚层，用0.5%NaOH溶液洗涤两次，20 ml/次，乙醚层弃去，合并碱水层，用盐酸调pH 至1~2，用乙醚萃取两次，每次15 ml，合并乙醚层，蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取供试品溶液10~15 μl，对照品溶液10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶2∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%AlCl3乙醇溶液，热风吹干。置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显两个相同颜色的荧光斑点。见图2。

　　图2 川芎薄层色谱图（略）

　　2.1.3 苍术 取本品10粒，倾出内容物，置具塞锥形瓶中，加水25 ml，回流20 min，滤过，滤液置已处理好的D-101型大孔吸附树脂柱（内径1.2 cm，柱高10 cm，用前依次用乙醇、水预洗）上，先用水50 ml洗脱，弃去水洗液，继用70 %乙醇50 ml洗脱，收集醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加水25 ml溶解，转移至锥形瓶中，加盐酸1 ml，回流30 min，取出，放冷，转移至分液漏斗中，用二甲苯萃取两次，20 ml/次，合并二甲苯层，水浴蒸干，残渣加二甲苯1 ml溶解，作为供试品溶液，另取苍术对照药材3 g，按样品处理方法进行处理，得对照药材溶液。吸取对照药材溶液10μl，供试品溶液10~15 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以二甲苯-丙酮（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干,置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，至少显3个相同颜色的荧光斑点。见图3。图3 苍术对照药材（略）

　　2.2 定量测定

　　2.2.1 色谱条件色谱柱为日本岛津Shim-Pack VP-ODS C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相乙腈-水（13∶87）；流速1 ml·min-1；检测波长238 nm；柱温25 ℃。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1 500。

　　2.2.2 对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加70 %甲醇制成每毫升含有32 μg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2.3 供试品溶液与阴性对照溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研匀。取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml容量瓶中，用70 %甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取方中除栀子之外的其它药材，按照制备工艺制得阴性样品，采用供试品溶液的处理方法进行处理，制成阴性对照供试品溶液。精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定，结果阴性对照不干扰栀子苷的测定。色谱扫描图见图4。

　　图4 液相色谱图（略）

　　2.2.4 标准曲线 精密吸取对照品溶液（32 μg/ml），分别用70 %甲醇稀释成浓度为16，8，4，2 μg/ml的对照品溶液，精密吸取10 μl，依次注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线。得回归方程：Y=1.582 4X-2.860 6， r=0.999 99，结果表明：栀子苷进样量在20～320 ng范围内呈良好的线性关系。

　　2.2.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积。结果对照品的RSD值为0.14%，样品的RSD值为0.73%。

　　2.2.6 稳定性实验精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl，分别与0，2，6，10，15，24 h进样，测定峰面积，结果对照品RSD为0.39%，样品RSD为1.42%。说明栀子苷在24 h内检测稳定。

　　2.2.7 重复性实验取同一批样品9份，分别取高（0.24g）、中（0.20g）、低（0.16g）3个剂量，按供试品溶液的制备方法制备，测定。结果样品中栀子苷的平均含量为10.951mg/g，RSD为1.23%，说明方法重复性良好。

　　2.2.8 回收率实验采用加样回收实验。取同一批样品9份，分为3组，按高、中、低3个剂量，分别加入25 ml不同浓度的栀子苷对照品甲醇溶液，提取，测定，计算回收率。结果栀子苷的平均回收率为98.37%，RSD为1.88％（n=9）。结果见表1。

　　表1 回收率实验测定结果（略）

　　2.2.9 样品测定按上述色谱条件，对3批越鞠保和软胶囊进行了栀子苷含量测定，结果3批样品的平均含量为3.51mg/粒。

　　3 讨论

　　本制剂为软胶囊，软胶囊成型时采用油做辅料，给鉴别和测定带来一定的困难，本研究根据药材的成分选择极性较大的甲醇做溶剂，避免过多的油残留，使鉴别图谱清晰，分离度好。

　　本研究结果表明，鉴别方法专属，重复性好，含量测定样品处理方法简单，分离度好，精密度高。