荔枝多糖对小鼠免疫功能的影响

【摘要】 　　目的研究荔枝多糖对小鼠免疫功能的影响。方法测定胸腺、脾脏重量并计算脏器系数；小鼠碳粒廓清法；溶血素法；迟发型超敏反应；PHA刺激淋巴细胞转化实验。结果在环磷酰胺（Cy）造成免疫抑制状态下，10 d内腹腔注射50 mg/（kg·d）荔枝多糖可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素及溶血空斑形成,促进淋巴细胞转化。结论荔枝多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。

【关键词】 荔枝多糖 免疫功能

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of litchi polysaccharides on immunological function of mice.MethodsThe weight of immunological organs, the clearance rate of charcoal particles, hemolysin production,the delay type hypersensitive response，and the spleen lymphocyte transformation induced by PHA of wice were mouitored.ResultsThe low immunological model of rats was established by the cyclophosphamide. Litchi polysaccharides could improve the clearance rate and the index of the mouse abdominal cavity macrophage, promote the production of hemolysin and hemolysis spot and the transformation of lymphocyte in 10 days.ConclusionLitchi po1ysaccharide can enhance immunological functions of mice．

　　Key words：Litchi polysaccharides； Immunological function
　　
　　荔枝Litchi chinnensis Sonn.为无患子科（Sapindaceae）常绿乔木，主要分布于我国西南及南部沿海各省区。荔枝果肉是岭南佳果之一，适量食用，有补脾、益肝、养血、悦颜之功效［1］。近年来，荔枝的经济和药用价值逐渐受到关注。据报道荔枝核有类似双胍类降糖药的降糖作用［2］，并能调节内、外源性血脂代谢紊乱,还具有抗氧化作用［3］，如用荔枝制成的荔枝口服液具有较好的降血糖作用［4］；荔枝皮也含有多种不同活性的有效成分，具有抗氧化作用［5］。但有关荔枝的免疫活性研究还未见报道。鉴于荔枝的药用价值及在广西具有巨大的产量，应加快对荔枝多糖的提取及其免疫活性的进一步研究，有助于更好地开发和利用荔枝食用和药用价值。本实验研究荔枝多糖对小鼠免疫功能的影响。

　　1 材料与仪器

　　1.1 材料荔枝多糖,取新鲜荔枝肉（购于广西南宁市交易场，产地：灵山，经广西医科大学副主任药剂师黄其春鉴定为灵山黑叶荔枝Lichi chinensis Sonn.），采用热水浸提法，95%乙醇沉淀，Savege法除蛋白，过氧化氢法除色素，经Saphadex G-25 和Saphadex G-100葡聚糖凝胶色谱柱分离提纯，收集浓缩得荔枝多糖均一体。 分别精确称取荔枝多糖20 mg和100 mg，加双蒸水配置成0.5 mg/ml荔枝多糖溶液40 ml和2.5 mg/ml荔枝多糖溶液40 ml。

　　1.2 动物昆明种小鼠，18~22 g，共40只，雌雄各半；豚鼠，取新鲜血清，1：10稀释，作补体用（小鼠、豚鼠均来自广西医科大学动物实验中心）。

　　1.3 仪器与试剂台式中低速离心机、722型分光光度计、Olympus倒置显微镜、印度墨汁、绵羊红细胞（SRBC）、环磷酰胺（cyclophsphamide，CY）、植物凝血素（PHA）等。

　　2 方法［6，7］

　　2.1 分组及剂量选择动物随机分成4组(每组雌雄各半)，分别为①空白组：以生理盐水作对照；②小剂量组：按0.5 mg/ml荔枝多糖溶液给药；③大剂量组：按2.5 mg/ml荔枝多糖溶液给药；④免疫抑制组。①～③组动物组按每只0.2 ml/d连续腹腔注射相应药物10 d，④组倒数第3天开始每只连续给环磷酰胺0.2 ml/d，给药共10 d。

　　2.2 碳廓清吞噬能力的测定末次给药30 min 后，按0.05~0.1 ml/10 g 从小鼠尾部静脉注入印度墨汁，分别于1 min和5 min后，从内眦静脉丛取血20 μl，立即加到2 ml 0.1％Na2CO3溶液中。用722分光光度计在波长600~680 nm处测定光密度值(A)。将小鼠处死后取出肝脏、脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，计算吞噬指数α。按下式计算廓清指数K或吞噬指数α。

　　K=logOD1-logOD2t2-t1

　　α=体重肝重+脾重×3K

　　2.3 溶血素测定每鼠腹腔注射5％(V/V)SRBC悬液0.2 ml进行免疫，5 d后，眼球取血做血清溶血素检测。

　　2.4 迟发型超敏反应(DTH) 足跖称重法。倒数给药第4天开始每天连续腹腔注射无菌的20%绵羊红细胞生理盐水悬液0.2 ml致敏，最后1次于一侧足皮下注射20%绵羊红细胞20 μl， 24 h后处死小鼠，将对称两足剪下称重，计算攻击前后足重量差值。

　　2.5 PHA刺激淋巴细胞转化实验（小鼠体内诱导法）每鼠均每天注射PHA 6~10 mg/kg，共3 d，待试药及对照药可在给PHA的同日或前1天给予。第10天将小鼠剪尾，取血推片，瑞氏染色，油镜下计数100个淋巴细胞、淋巴母细胞及过度细胞数，分别计算它们的百分率和淋巴细胞转化率。公式如下：

　　淋巴细胞转化率（%）=［转化细胞数/（转化细胞数+未转化细胞数）］×100%

　　2.6 统计学处理所有数据以±s表示，采用医学统计软件处理，两组间均数差异的比较采用t检验。

　　3 结果

　　3.1 荔枝多糖对小鼠肝脏和脾脏重量的影响荔枝多糖对小鼠肝脏和脾脏重量的影响见表1。由表1可知荔枝多糖大剂量组的脾脏和肝脏重量与空白对照组比较时有显著性差异，说明大剂量组的荔枝多糖能显著的增强小鼠脾脏和肝脏重量。3.2 荔枝多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响荔枝多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响见表2。由表2可知大剂量组与空白组吞噬指数比较时有显著性差异(P＜0.05)，说明大剂量荔枝多糖能显著增加小鼠吞噬细胞的吞噬能力，小剂量组有增高吞噬指数的趋势但无统计学意义。

　　表1 荔枝多糖对小鼠肝脏和脾脏重量的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P＜0.05；n =10

　　表2 荔枝多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P＜0.05；n =10

　　3.3 荔枝多糖对小鼠外周血T淋巴细胞数量的影响荔枝多糖对小鼠外周血T淋巴细胞数量的影响见表3。由表3可知大剂量组与正常对照组比较，具有显著性差异(P<0.05)，小剂量组也有提高的趋势，说明荔枝多糖能促进T淋巴细胞的转化率。

　　表3 荔枝多糖对小鼠外周血T淋巴细胞数量的影响（略）

　　与正常对照组比较，*P＜0.05；n =10

　　3.4 荔枝多糖对小鼠溶血素的影响荔枝多糖对小鼠溶血素的影响见表4。由表4可知大剂量组的溶血素测定的A值与正常对照组比较有显著性差异，说明大剂量的荔枝多糖能增加小鼠血液中抗体的数量从而增强免疫力。

　　表4 荔枝多糖对小鼠溶血素的影响（略）

　　3.5 荔枝多糖对小鼠迟发性超敏反应荔枝多糖对小鼠迟发性超敏反应见表5。由表5可知各组数据进行比较无显著性差异，但是大剂量组有增大的趋势。

　　表5 荔枝多糖对小鼠迟发性超敏反应（略）

　　4 小结

　　荔枝是岭南佳果之一。人们对它的化学成分和药理活性研究一直没间断过。荔枝果肉中活性成分之一多糖，是具有复杂的生物学活性的一类物质，其研究备受生命科学领域的关注。本课题组采用水提—醇沉，Savege法除蛋白，H2O2除色素，经Saphadex G-25和Saphadex G-100葡聚糖凝胶色谱柱分离提纯，得荔枝多糖。并对提取出的荔枝多糖展开了抗氧化作用研究［8］，研究结果表明荔枝多糖具有很好地抗氧化作用。在此基础上又对荔枝多糖进行了小鼠体内的免疫活性研究。实验后根据小鼠胸腺、脾脏重量，计算其脏器系数，并以小鼠碳粒廓清法、溶血素法、迟发型超敏反应、PHA刺激淋巴细胞转化实验观察荔枝多糖的免疫作用。结果显示，大剂量的荔枝多糖能明显增加小鼠肝脏和脾脏重量、促进小鼠巨噬细胞的吞噬功能、提高小鼠外周血T淋巴细胞数量的转化率，其对小鼠血液中抗体的数量的增加、增强小鼠迟发性超敏反应能力虽没有明显作用，但有增强的趋势。由实验表明荔枝多糖对小鼠特异性免疫和非特异性免疫有明显的促进作用，给小鼠每天腹腔注荔枝多糖50 mg/kg能激活巨噬细胞，增强其吞噬功能，能促进特异性抗体的产生，增加外周血T淋巴细胞数量，对T淋巴细胞和中枢免疫器官的肝脏和脾脏有显著的促进与改善作用，并具有抵抗CY所致体液免疫功能降低和免疫器官重量减少的作用。综上所述，荔枝多糖具有提高免疫活性作用。荔枝多糖的免疫活性作用与其他天然产物所提取出的多糖所具有的活性作用类似，显示了多糖的活性特点。

【参考文献】
　　［1］ 丁 岗.荔枝研究进展［J］.时珍国医国药,1999,10(2):145.

　　［2］ 楼忠明，田菊霞，王文香，等.荔枝核总皂甙提取物对糖尿病小鼠的降糖疗效观察［J］.浙江医学,2007,29(10)∶548.

　　［3］ 潘竞锵,刘惠纯,刘广南,等.荔枝核降血糖、调血脂和抗氧化的实验研究［J］.广东药学,1999,9(1):47.

　　［4］ 郭厚基，张树球，覃 艺，等.以荔枝为主要原料的复方口服液对糖尿病模型大鼠血糖和血脂的干预效应［J］.中国临床康复,2006,10（3）：87.

　　［5］ 郑公铭,义志忠.荔枝皮抗氧化性研究［J］.精细化工,2002,19（8）：471.

　　［6］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社,1991：6.

　　［7］ 薛 彬.免疫毒理学实验技术［M］.北京：北京医科大学·中国协和医科大学联合出版社,1995.

　　［8］ 吴华慧,李雪华,邱 莉.荔枝、龙眼果肉及荔枝、龙眼多糖清除活性氧自由基的研究［J］.食品科学,2004,25(5)：166.