泰山四叶参多糖的提取及含量测定

【摘要】  目的从泰山四叶参中提取多糖并测定多糖含量。方法经脱脂、醇提后，用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法测定其含量。结果泰山四叶参中多糖含量为12.45%，平均回收率为99.12%，RSD=1.49%（n=4）。结论泰山四叶参多糖含量较高，具有开发利用价值。

【关键词】  四叶参； 多糖； 提取

    Abstract：ObjectiveTo extract the polysaccharide and measure the content in Radix Codonopsis Lanceolatae from Mountain Taishan.MethodsThe polysaccharide was obtained with the water extraction and alcohol precipitation method, and the polysaccharide content was measured with the phenol-sulphuric acid method.ResultsThe polysaccharide content in Radix Codonopsis Lanceolatae was 12.45%, the rate of recovery was 99.12%, and RSD was 1.49%(n=4). ConclusionRadix Codonopsis Lanceolatae from Mountain Taishan contains plentiful polysaccharide, and it has much economic value.

    Key words：Radix Codonopsis Lanceolatae;  Polysaccharide;  Extracion;  Content determination

    四叶参Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.F.又名轮叶党参、羊乳、山胡萝卜等，系桔梗科党参属多年生草质缠绕藤本植物，在我国主要分布于东北地区，在泰山山系也有分布。四叶参为药食两用植物，在民间采其春季幼苗或根作山珍食用，美味可口。传统上其根入药，具清热解毒、止咳祛痰、补虚通乳、健身补气等功效，用于肺痈咳嗽、病后虚弱、产后缺乳等症，系泰山四大名药之一［1］。泰山四叶参的块根中含丰富的糖类化合物，但缺乏研究。本实验参考文献方法［2，3］，提取泰山四叶参多糖并测定其生药中多糖含量，以期为泰山四叶参的进一步开发利用及其多糖生物学活性研究奠定基础。

    1  材料与仪器

    1.1  药材四叶参采自泰山东麓，秋季挖取，洗净，切片，50℃烘干，粉碎成粗粉备用。经本院中药学教研室鉴定为四叶参的干燥根。

    1.2  试剂与仪器石油醚、乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇、浓硫酸、苯酚、葡萄糖等均为国产分析纯。中药粉碎机、RE-52A旋转蒸发仪、S-54紫外可见分光光度计、离心机、干燥箱等均为国产仪器设备。

    2  方法与结果

    2.1  泰山四叶参多糖的提取与精制称取泰山四叶参粗粉150 g，加4倍量石油醚回流脱脂2次，2 h/次；滤渣加4倍量80％乙醇回流提取2次，2 h/次。经脱脂、醇提后的滤渣在60℃烘干，分别加6，5，4倍量蒸馏水在95℃水浴中浸提3次，2 h/次，合并滤液，减压浓缩至200 ml左右。以每100 ml浓缩液加20 ml氯仿正丁醇（4：1）液，剧烈振荡30 min，以4 000 r·min-1离心15 min，去除下层氯仿及中层变性蛋白，取上部水层再重复去蛋白操作，至无明显中层为止。收集去蛋白后的上部水层，加无水乙醇至溶液含醇量达80％，静置过夜，以4 000 r·min-1离心15 min，收集沉淀物，再依次用95％乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤各2次，得多糖粗品。再以水－乙醇重结晶纯化2次，60℃烘干，得白色粉末状精制泰山四叶参多糖8.26 g，得率5.51％。

    2.2  标准曲线的制备

    2.2.1  葡萄糖标准溶液的配制  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品100 mg，加适量水溶解，转移至100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，配成1 mg·ml-1葡萄糖标准液备用。

    2.2.2  5％苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05 g，常压蒸馏，收集182℃馏分10 g，加蒸馏水200 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

    2.2.3  标准曲线的制作分别吸取葡萄糖标准液10，20，40，60，80，100 μl置于大试管中，各补加蒸馏水至2.0 ml，葡萄糖浓度分别为5，10，20，30，40，50 μg·ml-1，然后各加入5％苯酚溶液1 ml，缓慢沿壁加浓硫酸5 ml，混匀，放置5 min后，再沸水浴加热15 min，流水冷却至室温，在波长490 nm处测定吸光度。以蒸馏水代替葡萄糖溶液作空白对照。

    结果表明，葡萄糖浓度在5～50 μg·ml-1范围内，吸光度与浓度具有良好的线性关系。以浓度（C, μg·ml-1）为纵坐标，吸光度（A）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：C=3.3091＋71.4528A，r=0.996 4。

    2.3  换算因子的测定精密称取干燥至恒重的精制泰山四叶参多糖20 mg，置100 ml容量瓶中加蒸馏水，定容至刻度，作为多糖储备液。精密吸取多糖储备液0.2 ml 3份，按标准曲线制作方法测定其吸光度。经测定，3份多糖储备液平均吸光度为0.162，从回归方程中求出多糖液中折合葡萄糖的浓度为14.88 μg·ml-1。按下式计算换算因子：

    F=W/C·D

    其中W为多糖的重量（μg），C为多糖液中折合葡萄糖的浓度（μg·ml-1），D为稀释因素。测得F=1.344 1。

    2.4  泰山四叶参多糖含量的测定精密称取泰山四叶参粉末0.5 g 3份，分别置圆底烧瓶中加80％乙醇150 ml回流提取2 h，趁热抽滤，滤渣用80％乙醇洗涤3次。然后滤渣连同滤纸置烧瓶中，加蒸馏水150 ml，95℃水浴加热提取2 h，趁热抽滤，用热水洗涤烧瓶和滤渣，洗液并入提取液中，待冷后转移于250 ml容量瓶中，补加蒸馏水定容至刻度，如此制作样品溶液3份，置冰箱中备用。

    精密吸取样品溶液0.2 ml，按标准曲线制作方法测定其吸光度。每份样品溶液重复操作2次，取平均吸光度。3份样品溶液的平均吸光度分别为0.218，0.209，0.212，平均0.213。从回归方程中求出样品溶液中折合葡萄糖浓度为18.53 μg·ml-1。按下式计算四叶参中多糖的百分含量。

    多糖含量（％）＝C·D·F/W×100%

    其中W为四叶参样品的重量（μg），C为样品液中折合葡萄糖的浓度（μg·ml-1），D为稀释因素。计算泰山四叶参中多糖含量为12.45％。

    2.5  回收率测定采用加样回收法。取样品溶液0.2 ml 4份，分别加入葡萄糖标准液10，20，40，60 μl，按标准曲线制作方法测定其吸光度，根据葡萄糖的检出量，计算其回收率。

    回收率（％）＝（实验测值－供试品液多糖量）/葡萄糖加入量×100％。测得平均回收率为99.12％，RSD＝1.49％（n=4）。

    2.6  稳定性实验将供试品溶液完成显色后，每隔0.5 h测吸光度（A）1次，连测5次。结果表明2h内稳定性良好，以A值计算，RSD＝1.27％（n=5）。

    3  讨论

    多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子聚合物，是构成生命的分子基础之一，是自然界含量最丰富的生物聚合物。人们陆续发现，多糖不仅作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，还在抗肿瘤、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗辐射等方面具有广泛的药理作用［4］。研究表明，我国东北产四叶参提取物具有镇咳、镇痛抗炎、抗疲劳、抗氧化、抗衰老、降血脂等作用，其中不少药理作用与其多糖有密切关系［5］。多糖的测定方法很多，本实验通过脱脂，以80％乙醇提取以除去单糖、寡聚糖、苷类及生物碱等醇溶成分，再用水提醇沉法分离多糖成分，并以苯酚－硫酸法测其含量。通过回收率实验和稳定性实验可知，本法所测多糖含量，简便可靠、重复性好、显色稳定。实验结果表明泰山四叶参中多糖含量为12.45％，但其化学成分、理化性质及药理活性还有待于进一步研究。

【参考文献】
  ［1］ 王德才，李同德，康颂建. 泰山四大名药之一——四叶参［J］.食品与药品,2006,8(9):73.

［2］ 刘文生，薛霖莉，卫 萍，等. 潞党参多糖的提取及含量测定［J］.安徽中医学院学报，2005，24（1）：42.

［3］ 高丽君，王汉忠，崔建华，等. 苯酚-硫酸法测定白首乌中多糖含量［J］.山东农业大学学报（自然科学版），2004，35（2）：295.

［4］ 邓小云，丁登峰，戴美红，等. 植物多糖药理作用研究进展［J］.中医药导报，2006，12（9）：86.

［5］ 吴丽花，朴惠善，韩春姬. 轮叶党参化学与药理研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2005，12（10）：97.