血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与冠心病的关系

胡福莉，伍严安，陈发文，马晓宁，陈坟雯，林培城

(福建省立医院，福州350001)

摘要　为了探讨血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因第16内含子插入/缺失(I/D)多态性与冠心病(CAD)的关系，应用聚合酶链反应测定了79例冠心病(CAD)及68名正常人ACE基因第16内含子I/D多态性。结果显示，CAD病人ACE基因II型、ID型和DD型频率分别为28%(22/79)、29%(23/79)和43%(34/79)，而正常人则分别为41%(28/68)、32%(22/68)和26%(18/68)。两组的DD基因型及D等位基因型均差异显著(P＜0.05)。提示DD基因型可能为CAD发生的危险因素之一。
关键词　冠心病；　血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性；　聚合酶链反应

　　血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)催化血管紧张素Ⅱ的生成，加速缓激肽的灭活，使冠状血管张力增加，平滑肌细胞增殖，因而在血管生理调节中起重要作用。循环ACE水平受ACE基因的影响〔1〕。ACE基因全长21 kb，位于17号染色体q23上，含26个外显子和25个内含子〔2〕。其中16内含子存在一个287 bp的Alu片段插入/缺失(insertion/deletion，I/D)多态性〔1〕。本研究用聚合酶链反应(PCR)检测ACE I/D多态性，并探讨其与冠心病(CAD)的关系。
1　对象与方法
1.1　对象
1.1.1　冠心病组　79例，其中男性40例，女性39例，平均年龄62.08±6.55岁。其中不稳定型心绞痛患者43例，均有典型心绞痛症状，经动态心电图及心脏ECT检查均有缺血性改变。心肌梗塞(MI)病人36例，其中陈旧性心肌梗塞者27例，急性心肌梗塞者9例，均有典型临床症状，并经心电图及酶学检查证实。
1.1.2　对照组　健康体检者68例，男性30例，女性38例，平均年龄56.33±6.64岁。
　　以上两组对象均经严格检查排除其他心脏病，肺、肝、肾疾病，糖尿病及结缔组织病等。
1.2　方法
1.2.1　ACE基因型检测　取2 ml静脉血，用淋巴细胞分离液常规分离白细胞，用酚/氯仿法提取DNA，用PCR法扩增ACE基因组的第16内含子。PCR引物正链：5'CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3'，负链：5'GATGTGGCCATCACATTCGTC
AGAT3'。25 μl反应体系中：以上引物各20 pmol/L，dNTP 0.8 mmol/L，2.5 μl 10×扩增缓冲液，Taq酶1 U。反应条件：94℃变性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸2 min，循环30次后，72℃延伸5 min。扩增产物10 μl在含500 μg/L溴乙啶的20 g/L琼脂糖凝胶内电泳后，紫外灯下观察结果。只有一条190 bp片段者为缺失型纯合子(DD)，只有一条490 bp片断的为插入型纯合子(II)，两种片段都有的为杂合子(ID)〔3〕。
1.2.2　统计方法　各组间不同基因型及等位基因频率比较采用卡方检验。
2　结　果
2.1　PCR扩增后电泳结果见附图。
2.2　CAD组基因型显著高于对照组(Χ2＝4.71，P＜0.05)，D等位基因型亦较对照组显著增高(Χ2＝6.53，P＜0.05)。结果详见附表。

　　注：M：标准分子量；DD：缺失型纯合子；ID：杂合子；II：插入型纯合子

附图　PCR扩增结果

附表　CAD组与对照组ACE基因型及等位基因频率比较
 

组别 n ACE基因型 等位基因
II ID DD I D
n % n % n % n % n %
对照组 68 28 41 22 32 18 26 78 57 58 43
CAD组 79 22 28 23 29 34 43* 67 42 91 58*

　　*与对照组比较，P＜0.05
3　讨　论
　　Cambien等〔4〕曾报道MI患者ACE基因DD型频率明显高于对照组，认为DD基因型是MI的独立危险因素。但Lindpaintner等〔5〕的研究结果却认为ACE基因多态性与MI无明显关联。在本组研究中，CAD患者中DD基因型与D等位基因频率均显著高于对照组(P＜0.05)。提示在我国福建地区，ACE基因I/D多态性与CAD的发生有关，DD基因型可能是CAD发生的危险因素之一。本结果与NaKai等〔6〕对日本人群的报道相一致。
　　ACE基因DD型促进CAD发生的作用机制尚不清楚。Rigat〔1〕曾报道ACE基因I/D多态性与血清ACE水平相关。DD型者ACE最高，是II型者的2倍，ID型者居中。是否是DD型者较高的血清ACE水平导致了循环或局部血管紧张素Ⅱ异常增高，从而促进CAD发生还有特进一步探讨。
　　PCR法检测ACE基因I/D多态性快捷、准确，可用于与ACE基因相关疾病的临床研究。
4　参考文献
1　Rigat B, Hubert C, Alhenc-Gelas F. et al. An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels. J Clin Invest，1990，86：1343

2　Soubrier F, Alhenc-Gelas F, Herbeth B, et al. Two putative active centers in human angiotensin I-converting enzyme revealed by molecular cloning.Proc Natl Acad Sci USA，1988，85：9386
3　Rigat B, Hubert C, Corrol P, et al. PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of human agiontensin converting enzyme gene(DP-1)(dipeptidyl carboxypeptidase 1). Nucleic Acids Res，1990，20：1443
4　Cambien F, Poirier O, Lecerf L, et al. Delection polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk for mycardial infarction. Nature，1992，359：641
5　Lindpaintner K, Pfeffer M A, Kreutz R, et al. Aprospective evaluation of an angiotensin converting enzyme gene polymorphism and the risk of ischemic heart disease. N Engl J Med，1995，332：706
6　Nakai K, Itoh C, Miura Y, et al. Delection polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene is associated with serum ACE concentration and increased risk for CAD in Japanese. Circulation，1994，90(5)：2199