龙眼叶抗氧化活性部位的血清药物化学初步研究

龙眼叶抗氧化活性部位的血清药物化学初步研究

邓晓秋

大庆市卫生局职工中等专业学校，黑龙江 大庆 163311

摘要：龙眼也被叫做是桂圆，龙眼叶指的主要是龙眼树当中的一些嫩芽和叶子，龙眼叶具有发表清热、利湿解毒等一系列功效，可以对感冒发热等疾病进行治疗，并且可以抑制葡萄糖普酶活性。从龙眼叶当中可以获得很多有效物质，比如说黄酮，属于一种具有较好效果的体外抗氧化活性。本文对龙眼叶抗氧化活性部位的血清药物化学初步研究，以供参考。

关键词：龙眼叶；抗氧化；活性部位；血清药物；化学研究

1材料及仪器

2 方法

2.1龙眼叶不同极性部位提取物的制备

清洗药材，并且进行烘干处理，称取其中的640g，通过6倍量95%,50%乙醇进行加热回流处理，每次处理的时间控制在2h，并且对获得的滤液进行合并，最后获得总提取8.56g，剩余的滤液通过回收乙醇后添加一定的纯水，接着加入乙酸乙酷、石油醚、正丁醇等完成萃取的工作，石油醚当中萃取获得5.28g墨绿色浸膏，乙酸乙酷萃取获得22.52g淡黄色粉末，正丁醇萃取获得27.72g橙黄色粉末，水部位萃取获得30.78g橘黄色胶质，另外获得药材粗粉lOg，经过浓缩挥干后获取水煎液提取物。

2.2龙眼叶体外抗氧化活性研究

2.2.1 FRAP法测定龙眼叶不同极性部位总抗氧化能力

对FeS0₄·7H₂0标准品的进行配置，保证及浓度符合要求，并且进行标准曲线的绘制，依照总抗压能力测试和当中的相关要求进行测试，并且利用酶标仪在593纳米位置对吸光度值进行读取，并且对各样本的总抗氧化能力进行分析和计算。

2.2.2含药血清的制备

对大鼠进行4天的适应性喂养之后，对10只大鼠进行分类，分为两组，一组为EFD给药组，另外一组为空白组，每组设置5只大鼠，依照相关试验要求对总抗氧化能力最强的EDF进行筛选，并且做出后续的实验操作，对EDF进行称量，获得4克EFD并且加入适量的水配制成大鼠灌胃液。其中给药组依照107(生药量)·kg^-1ip(1/3MTD)的给药量，连续服用三天，每天服用的次数为两次，空白组也通过相应的给药量进行蒸馏水的供应。而后对血清进行混合收集，并且通过微孔滤膜进行过滤，让他们保存在零下20度的环境当中备用。

2.2.3 Fenton-邻二氮菲法测定EFD及含药血清对·OH的清除率

利用fenton反应获得相应的·OH，依照相关的标准研究发现对于各种不同邻二氮菲-Fe²⁺体系影响清除·OH的效果进行分析和研究。在离心管当中进行0.75mmol·L^-1、邻二氮菲溶液的滴加，滴加量为一毫升。然后，滴入一毫升不同浓度的样品，接着滴入一毫升0.75mmol·L^-1硫酸亚铁，接着进行震荡，然后进行一小时的75摄氏度水浴温浴，对其吸光度进行检测，通过蒸馏水代替双氧水进行操作，对比试验，获得吸光度A_样品。通过蒸馏水对样品进行代替测得A_损伤，并且对·OH的清除率进行分析和研究。

·OH清除率(%)=[(A_样品-A_损伤)/（A_未损伤-A_损伤）]x100%

2.2.4邻苯三酚自氧化法测定EFD及含药血清对0₂^-·的清除率

对配制的0.5Smol·L^-1Tris-HC1缓冲液以及2.5mmolL^-1邻苯三酚溶液，在水域环境下进行30分钟的水浴温育。在干燥试管当中放入一定量的样品以及缓冲液、邻苯三酚溶液的进行摇匀震荡，并且进行5分钟30摄氏度的水浴反应，利用盐酸溶液对其进行调理，对其吸光度A₁进行测量，并且通过蒸馏水对邻苯三酚溶液进行替代，通过相同的方式获得吸光度A₂。通过蒸馏水代替原有样本，将A₀测算出来,对0₂^-·的清除率进行计算。

O₂^-·清除率(%)=[1-(A₁-A₂)/A₀]x100%

2.2.5 H₂O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血的实验

对小鼠眼球进行采血，并且通过肝素管对血液进行收集在40000r·min^-1离心5分钟,将血浆去除,获取红细胞，通过生理盐水进行洗涤，接着将1毫升红细胞放入到干净的锥形瓶当中，加入一定量的冰生理盐水，获得0.5%的红细胞混悬液,在混悬液当中放入一定量的双氧水进行混匀,接着在75摄氏度的水浴当中进行1小时。通过离心之后获取上层清液，测算其吸光度A1，并且通过蒸馏水代替样本进行相同方式的操作，获得吸光度A2，对不同样品在红细胞氧化溶血抑制度方面的数据进行分析和测算。

红细胞氧化溶血抑制率(%)=[（A₀-A₁）-(A₀-A₂)/A₀]x100%

3 结果

3.1龙眼叶体外抗氧化能力

3.1.1龙眼叶不同部位总抗氧化能力

绘制不同浓度FeS0₄·7H₂0的标准曲线，相比于空白组可以发现龙眼叶不同极性部位的提取物OD值和VitC的统计差异较为明显，在浓度相同的条件下，龙眼叶乙酸乙酷位置EFD相比于其他部位总抗氧化能力最强，其次为正丁醇位置、石油醚位置的总抗氧化能力最弱，需要合理的进行EFD的选择，作为给药部位进行后续的操作。

3.1.2 EFD及含药血清清除·OH的能力

相比于空白组各浓度给药组当中A₅₃₆进一步增大，在统计学方面具有一定的意义，在浓度相同的状态下，EFD组和VitC组在清除率方面更高，具有更强的·OH清除能力，然而含药血清组在清除率方面明显低于EFD组，这就说明含药血清清除能力无法达到EFD的水平。

3.1.3 EFD及含药血清清除O₂^-·的能力

相比于空白组，空白血清外各浓度给药组当中获得的A1有明显的减少，相比于空白血清组，如果V_空白血洁、V_含药血洁的比例为1:2的时候，唯一的具有明显的减少趋势，如果比例为1:1的时候，A1的差异不明显，这就说明EFD及含药血清可以对O₂^-·进行清除，其浓度和量效具有一定的关联。

3.1.4 对H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响

相比于空白组，给药组A₄₁₅的浓度有明显的下降趋势，差异在统计学方面具有意义，稀释倍数不同的含药血清在抑制率方面没有较大的差距，含药血清组抑制率相比于EFD组较低，这就说明EFD以及含药血清在抑制双氧水诱导大鼠红细胞氧化溶血方面能够起到抑制的效果，然而其效果不及EFD。

4 讨论

通过分析和研究发现，利用血清药物化学实验当中使用的大鼠合理的进行给药和采血的方式，这种方法可以有效的收集超过85%药物的含药血清，在收集含药血清的过程中判断是否要灭活，然而灭活并非常规操作，在本次研究的过程中使用了未灭活血清，大鼠空白血清本身具有一定的抗氧化活性，为了防止空白血清产生的影响，在实验的过程中加入空白血清进行对比，血清药理实验的时候与本体较为接近，可以对药物原形的成分在体内吸收、转化、灭活等具体情况进行有效的反应，在理论上可以获得较为科学、真实的实验结果。

通过分析发现龙眼叶乙酸乙酷位置获取的提取能够将羟自由基·OH，超氧阴离子自由基O₂^-·清除能，够对大鼠红细胞氧化溶血进行抑制，在对比实验的过程中发现实验的结果具有明显的差异，这就说明提取物在动物体内已经进行了代谢。但是因为实验条件有限，只能初步确认少数色谱峰，由于病理模型和健康动物模型在药物代谢方面还是有一定的差异，所以后续可以采用病理模型组动物来检测含药血清的具体效果，并且对龙眼叶抗二型糖尿病药效物质基础进行分析

参考文献

[1]周静.血清胆红素与2型糖尿病并发症的关系[J].西南军医，2015，17(3):324.

[2]梁洁，余靓，柳贤福，等.龙眼叶不同提取物降血糖的实验研究[J].时珍国医国药，2013,24(8):2057.