免疫组织化学及 PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值

免疫组织化学及 PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值

吴友东

江油市人民医院 四川 江油 621700

【摘要】目的：探讨免疫组织化学（IHC）及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值。方法：选取我院收治的50例疑似淋巴结结合患者作为研究对象对象，石蜡包埋组织标本，并以分别行IHC及PCR检测，以临床最终诊断为金标准，比较两种方法的检测价值。结果：临床最终确诊淋巴结结核49例，确诊率为98%；以临床最终诊断结果为金标准，IHC、PCR诊断灵敏度、特异度及准确度比较无统计学意义（P>0.05）。结论：IHC及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中均有较高敏感度及准确度，可作为优先病理诊断方式使用。

【关键词】免疫组织化学（IHC）；PCR；淋巴结结核；病理诊断

淋巴结结核以颈部淋巴结结核最为常见，在肺外结核中占14.3%-57.3%，常规影像学无法明确诊断导致治疗延误，尤其是颈部淋巴结结核患者，若得不到早期诊断、治疗，可形成破溃、窦道等，对患者日常生活造成严重影响，因此近年来病理学诊断逐渐成为淋巴结结核的主要诊断方法。IHC及PCR为临床病理诊断常用检测方式，为进一步明确两种检测方式在淋巴结结核诊断中的应用价值，笔者选取我院收治的50例疑似淋巴结结核患者进行研究，报告如下。

资料与方法

1.1临床资料

选取我院自2017年1月至2018年1月收治的50例疑似淋巴结结核患者作为研究对象，男27例，女23例，年龄18-75岁，平均（53.36±2.22）岁。病变部位：颈部30例，腋窝10例，纵膈8例，腹股沟2例.

1.2方法

超声引导下取病理标本，经4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，并在显微镜下观察组织学形态。IHC检测：Max Vision—步法染色标本，一抗由病理实验室自制，稀释比例1:2000,。在染色前，切片经高压抗原进行热修复，具体染色严格按照说明书操作；二氨基联苯胺进行染色，苏木素对比染色。阳性信号特征：（1）簇状、小雪片状或者小斑片状着色；（2）着色部位中心颜色与周围颜色比较更深，且呈渐变色分布；（3）着色以多点状分布；（4）常在坏死组织、周围部位表达。PCR检测：石蜡切片，厚度4μm。依据组织大小切片5-10片，并放入1.5ml离心管内，DNA提取依据说明书进行。荧光定量CRP使用试剂盒由上海丹枫生物科技有限公司提供，具体操作严格按照说明书进行，PCR反应体系40μl，反应条件：37^oC、94^oC各2min，（93^oC15s、60^oC60s）×40个循环，并在60oC行荧光检测。Taqman荧光探针进行FAM标记。阳性标准：循环数（Ct值）≦38；Ct值在38-40之间则需要重新确定，若再次测定Ct值仍为38-40间，且扩增曲线呈S形则判定为阳性，若扩增曲线为非典型曲线则为阴性。

1.3统计学分析

用SPSS20.0软件分析数据。计算IHC染色、CPR检测诊断敏感度、特异度及准确度，并以 检验分析对比，P＜0.05为差异显著。

结果

2.1临床最终诊断结果

临床最终诊断结果显示:颈部淋巴结结核35例，腋窝淋巴结结核11例，纵隔淋巴结结核4例，颈部淋巴结1例，确诊率为98%（49/50）。

2.2IHC及PCR诊断价值分析

以临床最终诊断结果为金标准，IHC诊断真阳性48例，假阳性1例，真阴性1例，假阴性1例；PCR诊断真阳性48例，假阳性1例，真阴性1例，假阴性1例。则IHC及PCR诊断敏感度、特异度及准确度比较无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 IHC及PCR诊断价值分析

讨论

淋巴结结核为肺外结核，以往临床主要依赖细菌性培养、影像学诊断，然而准确率较低，仅为20%-30%，难以满足中临床需要，同时细菌培养诊断周期为4-6周，难以满足临床资料需求，因此探讨更为准确快速的诊断方式十分重要。病理学诊断近年来在肺外结核诊断中广泛使用，以往临床主要采用抗酸染色法、形态学检查，然而其敏感度较低，同时耗时耗力，效果欠佳。本次研究中采用IHC染色、PCR技术诊断。其中IHC检测物质为蛋白质，广泛应用于肿瘤诊断及分型中，然而关于其在结核病病理学诊断中的应用研究较少。本次研究中，以临床最终诊断结果为金标准，则IHC诊断敏感度、准确度均达到90%以上，证明IHC在淋巴结结核诊断中具有较高的应用价值。PCR技术近年来发展迅速，常见的巢式实时定量PCR、荧光定量PCR技术及免疫磁珠分离联合PCR等技术，随着不断改进、优化，PCR技术检测敏感度不断提高，本次研究中，PCR诊断灵敏度、准确度均达到90%以上，证明了其价值。然而需注意的是，两种检测技术特异度均为50%，相对较低，因此IHC及PCR技术均具有一定的提高空间，此外实验室技术人员要规范操作流程，减少诊断结果的不良干扰。

总之，IHC及PCR技术在淋巴结结核诊断中具有操作简单、敏感度高及准确度高等优势，可作为有效的病理诊断技术推广使用。