HPLC检验头孢克洛颗粒的有关物质分析

HPLC检验头孢克洛颗粒的有关物质分析

吕兆琳

哈尔滨医大药业股份有限公司

摘要：目的：构建完善的头孢克洛颗粒有关物质检验体系。方法：通过HPLC高效液相色谱法测定物质浓度，并结合色谱柱条件分析，确定流动相和监测波长等数据后，再落实线性梯度洗脱措施，以便检验工作具备参照。结果：试验精密度、稳定性、回收率、专属性、检出限等条件均满足精准需求，且可以针对性测定颗粒物质状况。结论：方法检测精密度高，稳定性好，并且浓度检测效果明显，能够为后续头孢克洛颗粒有关物质的分析提供深入检测平台。

关键词：HPLC高效液相色谱法；头孢克洛颗粒；有关物质；试验分析

头孢克洛颗粒在当前医药市场环境中具备较为广泛的受众，并且在临床疗效和销售方面具备优势，但基于内部元素成分的复杂性，在实际药品生产工程中，并未具备相对完善的检测流程，所以在药品销售过程中，也不可避免的存在了风险。所以，在分析头孢克洛颗粒安全性和有效性时，应当从有关物质的药性展开分析，并针对内部浓度和检出方法深入分析，才能确保药品制备工作具备保障。

一、试验仪器与试剂

高效液相色谱仪、电子分析天平、头孢克洛颗粒、头孢克洛δ-3-异构体对照品、头孢克洛对照品、蔗糖、桔子香精、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。磷酸二氢钠作为分析纯、乙腈作为色谱纯。

二、试验方法分析

1.色谱条件分析

色谱柱选用C18（4.5X250mm，5μm）；流动相分为A、B两种，其中流动相A为磷酸二氢钾，PH值为4.0。流动相B为磷酸二氢钾-乙腈混合溶液，混合比例55：45，流速1.0ml/min，检测波长215nm，进样标准体积为20μL，线性梯度洗脱表详见表1。

表1梯度洗脱表

2.溶液配制分析

（1）对照品溶液制备

取单位计量的头孢克洛对照品置于精准量瓶内，并通过PH2.5的磷酸二氢钾溶液进行溶解，制备成500μg/ml的溶液，如此制备成头孢克洛对照品溶液。

其次，取单位计量的头孢克洛δ-3-异构体对照品置于精准量瓶内，通过PH2.5的磷酸二氢钾溶液进行溶解，制备成1000μg/ml的溶液，制备成头孢克洛δ-3-异构体对照溶液。

在对照溶液制备结束后，精密称取两种对照溶液各5ml，再同时置于精准量瓶中，以溶剂成分25μg/ml与50μg/ml为标准，制备混合对照品溶液。

（2）供试品溶液制备

取头孢克洛颗粒适量，置于精准量瓶内，以PH2.5的磷酸二氢钾溶液进行溶解，并将溶剂稀释至标准刻度，摇匀且取续滤液作为供试品溶液。或者，采取精密计量措施取1mL至精密量瓶内，再利用PH2.5的磷酸二氢钾溶液进行溶解至标准刻度，再摇匀制备成供试品溶液。

（3）空白辅料溶液制备

取空白辅料适量置于精准量瓶内，通过以PH2.5的磷酸二氢钾溶液稀释并溶解，待摇匀后制备成空白辅料溶液。

三、试验结果与结论分析

1.专属性试验分析

（1）系统适应性

依照上述试验方法，能够有效得出空白辅料、混合对照和供试品溶液的HPLC色谱图。其中头孢克洛保留时间24.6min，头孢克洛与头孢克洛δ-3-异构体峰分离度9.7，头孢克洛峰拖尾因子0.98，理论板数按头孢克洛峰计算为89695。已获得的辅料峰不干扰主峰，同时与杂质峰完全分离，各杂质峰与主峰完全分离，本方法系统适应性符合检测要求。

（2）破坏试验结论

破坏试验结果表明，在强酸、强碱中主成分全部降解破坏，氧化后在6.8min，、10.8min处有较大破坏产物，热破坏也增加了几个小的杂质峰，光照对峰影响较小。综上所述，强酸、强碱和强氧化对头孢克洛颗粒的性质影响很大，同时表明本色谱系统破坏产物与主成分峰完全分离。

2.精密度试验分析

根据以上制备原理与分析条件，在精密度的试验中，需定量取供试品溶液至精准量瓶中，连续进样六次后，可知峰面积测得结果稳定，且RSD为0.44%。根据以上试验可知，本试验方法在进样精密度方面具备良好优势，且能够为药品检验提供保障。

3.检出限试验分析

取对照溶液，用溶剂逐级稀释制成系列浓度进样检测，当信噪比为3：1时，头孢克洛的最低检测限度为0.25ng左右，头孢克洛δ-3-异构体的最低检测限度为1ng左右。

4.稳定性试验分析

对供试品溶液与对照溶液提取，在可观测环境中分别于0、2、4、6、12、24与36h进样，在时间节点处分别进行记录，并提供色谱图条件，可知主峰峰面积并无明显降解状况，如此也说明了以上两种溶液不会在室温环境下出现性状不稳定的情况。但若是有明显温度差异，为避免试验结果受到影响，可在室温进行检测同时，另外提供一批在冰箱环境中，每隔20h进样，并确定溶液稳定性的变化。

5.线性试验分析

精密称取头孢克洛对照品12.5mg，置50mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL，置10mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为头孢克洛对照品系列浓度溶液。取上述溶液进样。以峰面积A为纵坐标，浓度C（μg/mL）为横坐标，进行线性回归。头孢克洛在25~75μg/mL内，与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程：

A=31999C+21142，相关系数r=0.9999

精密称取δ-3头孢克洛对照品20mg，置20mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.5，1.0，1.5，2.0，3.0mL，置20mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为δ-3头孢克洛对照品系列浓度溶液。取上述溶液进样。以峰面积A为纵坐标，浓度C（ug/mL）为横坐标，按最小二乘法进行线性回归。δ-3头孢克洛浓度在25~150μg/mL内，与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程：

A=35782C+36433，相关系数r=0.9999

6.准确度试验分析

精密称取企业样品适量，置10mL量瓶中，加入δ-3头孢克洛对照品0.8，1.0，1.2mL，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。根据分析结果可见该方法的准确度良好。

四、结语

头孢克洛颗粒内有关物质的有效测定，一方面能够帮助当前药品企业认识到内部药品成分潜在的风险，以便在后续药品制备过程中，具备更加完善的药品审查制度；另一方面更能够凭借药品质量的优化，确保药品食用风险能够被有效降低，充分维护消费者权益。故而，在论述HPLC检验头孢克洛颗粒的有关物质过程中，必须针对检测方法与审核标准深入分析，如此才能提升头孢克洛颗粒实验准确性，并为后续药品销售平台提供保障。

参考文献：

[1]顾晓红.HPLC考察头孢克洛颗粒的有关物质[J].中国执业药师，2017，14（4）：29-32.

[2]齐敬敬，孙春艳，褚岩凤，等.HPLC法测定吉非替尼原料药有关物质[J].药物分析杂志，2016（4）：704-710.

[3]郝文静，张涛，黄华，等.HPLC法测定恩格列净片的有关物质[J].药物分析杂志，2016（5）：902-910.