二代测序技术在救治重症监护病房重症下呼吸道感染中的实践效果

二代测序技术在救治重症监护病房重症下呼吸道感染中的实践效果

邢士刚

（临沂市中心医院山东临沂276400）

【摘要】目的：探讨抗菌药物降阶梯治疗和二代测序技术(NGS)在重症监护室病房重症下呼吸道感染中的应用效果。方法：将我院2017年6月—2018年6月收治的120例重症下呼吸道感染患者进行分析，将患者分成实验组和常规组，两组各60例患者，常规组采用美罗培南降阶梯经验性广谱抗菌治疗，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。对比两组治疗效果、不良反应发生情况。结果：实验组治疗效果明显好于常规组，实验组不良反应发生率低于常规组，两组差异显著（P＜0.05）。结论：在重症下呼吸道感染治疗中采用二代测序技术，可以指导抗菌药物应用，做到精准治疗，从而降低耐药菌株的耐药性，提升治疗效果，具有较高推广价值。

【关键词】光谱抗菌药物降阶梯治疗；NGS技术；重症监护；重症下呼吸道感染

【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）31-0026-02

Practicaleffectofsecond-generationsequencingtechnologyinthetreatmentofseverelowerrespiratorytractinfectioninintensivecareunitXingShigang.

LinyiCentralhospital,Yishui,ShandongProvince276400

【Abstract】ObjectiveToexploretheapplicationeffectofantibioticsstep-downtreatmentandsecond-generationsequencingtechnology(NGS)inseverelowerrespiratorytractinfectioninintensivecareunit.Methods120patientswithseverelowerrespiratorytractinfectionadmittedtoourhospitalfromJune2017toJune1818wereanalyzed.Thepatientswerepidedintoexperimentalgroupandroutinegroup.60patientsineachgroup.Theroutinegroupusedtheexperienceofmeropenem.Broad-spectrumantibacterialtherapy,theexperimentalgroupusedNGStechnologytodeterminetheBALFandsputumtoidentifypathogenicmicroorganismsandthenusethecorrespondingantibacterialdrugsfortreatment.Comparethetreatmenteffectsandadversereactionsbetweenthetwogroups.ResultsThetherapeuticeffectoftheexperimentalgroupwassignificantlybetterthanthatoftheconventionalgroup.Theincidenceofadversereactionsintheexperimentalgroupwaslowerthanthatintheconventionalgroup,andthedifferencebetweenthetwogroupswassignificant(P<0.05).ConclusionThesecond-generationsequencingtechnologyinthetreatmentofseverelowerrespiratorytractinfectioncanguidetheapplicationofantibacterialdrugsandachieveprecisetreatment,thusreducingthedrugresistanceofdrug-resistantstrainsandimprovingthetherapeuticeffect,whichhashighpromotionvalue.

【Keywords】Spectralantibacterialdrugstep-downtreatment;NGStechnology;Intensivecare;Severelowerrespiratorytractinfection

近年来，随着临床器官移植、肿瘤化疗患者的增多，广谱抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤药物和化疗等临床治疗手段的广泛开展，以及我国人口老龄化进程加快，免疫受损病人数量日益增多，重症下呼吸道感染的比例呈明显上升趋势；与此同时，感染的病原微生物呈现多样化和复杂化，细菌耐药问题日益突出，重症下呼吸道感染的临床救治业已成为研究焦点。重症下呼吸道感染病原体通常不明确，当前主要采用抗原/抗体免疫学方法、传统微生物培养技术进行诊断，但这些方法多存在培养周期长、培养阳性率低的问题，同时非培养技术基于医务人员对疾病的倾向性诊断，复杂疑难感染性疾病对病原普全面检测需要通常无法得到满足。二代测序技术是新型DNA/RNA测序方法，一方面具有更高通量和测速速度，另一方面理论上能够将所有潜在病原体无偏倚检测出来，所以在重症下呼吸道感染诊断中该技术具有重要应用价值。本研究选择我院收治重症下呼吸道感染患者120例，随机分为实验组和常规组，常规组采用美罗培南降阶梯经验性广谱抗菌治疗，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。

1.资料与方法

1.1一般资料

本次研究分析我院收治的120例重症下呼吸道感染患者，男性患者75例，女性患者55例，患者最小年龄28岁，最大年龄67岁，平均年龄（48.14±4.84）岁。将患者分成实验组和常规组，两组各60例，两组患者临床资料差异无统计学意义，具备可比性（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1常规组治疗

常规组患者采用美罗培南进行治疗，采用静脉注射的方式，将100ml5%的葡萄糖溶液与0.45g美罗培南混合，每天2～4次，连续治疗两周。

1.2.2实验组检测和治疗

（1）样本护理和DNA提取：取0.5～3ml痰夜，经玻璃珠混合震荡后依据TIANampMicroDNAKit试剂盒步骤提取DNA。（2）文库构建和测序：应用Agilent2100Bioanalyzer质控文库片段大小，应用QubitdsDNAHSAssayKit质控分析DNA文库浓度，环化形成单链环形结构。文库环化后经滚环复制生成DNB纳米球，将其加载到测序芯片，通过BGISEQ-500测序。（3）数据分析：将长度小于35bp和低质量数据去除，通过BWA对比，去除高质量数据中比对上人参考基因序列，剩下数据将低复杂度reads去除后，和专用微生物大数据比对，按照细菌、病毒、真菌、寄生虫将比对后数据进行分类和排列。依据检出毒力基因、耐药基因的信息应用抗菌药物治疗。

1.3观察指标

对两组患者的治疗效果和不良反应发生情况进行对照。

1.4疗效判定标准

患者下呼吸道感染症状完全消退，生命体征正常为有效；患者下呼吸道感染症状得到改善，生命体征正常为改善；患者下呼吸道感染症状没有任何改善，生命体征不正常为无效。

1.5统计学方法

本次研究采用SPSS22.0进行相关数据分析，采用标准差进行计量资料分析，采用（%）进行计数资料分析，结合χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1两组临床治疗效果对照

实验组的治疗有效率高于常规组，差异明显（P＜0.05）。结果见表1。

表1两组临床治疗效果对照

3.讨论

重症下呼吸道感染在重症监护病房具有较高发生率，该患者发病后需及时接受有效治疗，否则会严重威胁患者健康和安全。下呼吸道感染的症状包括呼吸短促、虚弱、发烧、咳嗽和疲劳[3]。有许多症状符合下呼吸道感染的特征，最常见的两种是支气管炎和水肿，流感也对上呼吸道和下呼吸道产生影响。具体治疗中医生应该在掌握导致感染的病原体的基础上，合理的采用抗菌药物[2]。临床治疗中一般都是采用抗生素治疗，但是医院内大量的使用头孢菌素，导致假单孢铜绿杆菌的耐药性增强，在治疗中更加困难。所以，在采用抗生素治疗前，首先应明确病原体，并依据毒力基因、耐药基因确定治疗方案。

重症下呼吸道感染病原体通常不明确，当前主要采用抗原/抗体免疫学方法、传统微生物培养技术进行诊断，但这些方法多存在培养周期长、培养阳性率低的问题。二代测序技术是新型DNA/RNA测序方法，该技术基于对核酸分子的检测，敏感性高，耗时短，不依赖于传统的病原学培养，前期抗生素应用对检测影响小；能够同时检测细菌、真菌、病毒、寄生虫等各类病原体，特异性高，同时可以检出毒力基因、耐药基因的信息；检测通量极大，一次可以检测出超过1千万条序列，理论上检测病原体通量可以达到1千万；不仅可以发现已知病原体，而且可以发现完全未知的病原体。

本研究中，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。实验组治疗效果明显好于常规组，实验组不良反应发生率低于常规组，两组差异显著（P＜0.05）。可见，在重症下呼吸道感染治疗中采用二代测序技术，可以指导抗菌药物应用，做到精准治疗，从而降低耐药菌株的耐药性，提升治疗效果，具有较高推广价值。

【参考文献】

[1]王海燕,王永秀.抗生素降阶梯治疗在救护重症监护病房重症下呼吸道感染中的应用[J].中国实用医药,2017,12(27):129-130.

[2]李勇.呼吸重症监护病房重症下呼吸道感染的抗生素降阶梯治疗[J].中国现代药物应用,2014,8(10):99-100.

[3]欧阳舟.呼吸重症监护病房重症下呼吸道感染抗生素降阶梯治疗效价研究[J].赣南医学院学报,2013,33(03):388-389.

[4]JainS,SelfWH,WunderinkRG,FakhranS,BalkR,BramleyAM,etal.Community-AcquiredPneumoniaRequiringHospitalizationamongU.S.Adults.TheNewEnglandjournalofmedicine.2015;373(5):415-27.

课题名称：基于二代测序技术的BALF病原学检测在重症下呼吸感染中的应用评价（课题编号：201818036）.

作者简介：邢士刚（1980.07-）,男，汉族，山东莒南人，硕士，科室：呼吸内科，职称：主治医生.