盐酸丁卡因含量测定方法的对比研究

盐酸丁卡因含量测定方法的对比研究

王超

王超(安徽医科大学第三附属医院暨合肥市第一人民医院药学部230032)

【摘要】目的：采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、酸碱滴定法和永停滴定法测定盐酸丁卡因溶液中盐酸丁卡因的含量。选择一种快速简便测定盐酸丁卡因溶液的含量的方法。方法：分别用上述四种方法测定盐酸丁卡因的含量。结果：四种测定方法结果均符合质量标准。结论：紫外分光光度法操作简便，结果可靠。可用于盐酸丁卡因溶液的最终含量测定。

【关键词】分光光度法酸碱滴定法永停滴定法高效液相色谱法盐酸丁卡因

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）05-0007-02

盐酸丁卡因溶液是安徽医科大学第一附属医院院内制剂，其处方来源于《安徽医院制剂规范》（99版），规格为2%局部麻醉药，本品主要成分为盐酸丁卡因。制剂规范其含量测定采用永停滴定法[1]，由于该方法所用仪器永停滴定仪医院药检部门一般都不配备，检验工作很难开展，故不适合医院对该制剂的含量测定。我们根据丁卡因的紫外吸收等特点，比较了HPLC法、紫外分光光度法、酸碱滴定法以及永停滴定法四种不同方法测定其含量，其中紫外分光光度法测定盐酸丁卡因的含量，方法简便、快捷、准确可靠，适合医院对该制剂质量控制的要求。

1仪器和试剂

1.1仪器

TU-1800spc型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），Agilent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），ZYD-1型自动永停滴定仪（上海分析仪器厂无锡分厂），FA2004电子天平（上海天平仪器厂），B3200S-T超声清洗器（必能信超声有限公司）。

1.2试药与试剂

盐酸丁卡因对照品（中国药品生物制剂研究所，批号：090505），盐酸丁卡因溶液（安医大一附院制备，批号：100706、101201-1、101012-2），其他溶剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1紫外分光光度法测定盐酸丁卡因溶液含量[2～4]

2.1.1测定波长的选择

准确称取105℃下干燥至恒重的盐酸丁卡因对照品适量，加水配制成含盐酸丁卡因5μg.ml-1的对照品溶液，按处方比例，配制除盐酸丁卡因以外的相应浓度的空白辅料溶液，以4.7%氯化钠为空白，分别在200～400nm的波长范围内进行扫描，结果为盐酸丁卡因在311nm波长处有最大吸收，而空白辅料在此波长处无吸收，故可选择311nm作为检测波长。

2.1.2标准曲线和线性范围

精密称取105℃下干燥至恒重的盐酸丁卡因对照品20.6mg，置100ml量瓶中，加适量水溶解，再以水定容至刻度，摇匀，精密量取上述溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置50ml量瓶中，以水稀释并定容至刻度，摇匀，以水为空白，在311nm波长处测定吸收度，并以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程y=0.0761x+0.0051，R=1。结果表明，盐酸丁卡因在浓度2.0-10.5μg.ml-1范围内有良好的线性关系。

2.1.3精密度实验

取上述标准曲线项下的中间浓度，日内连续进样6次测定，结果分别为：0.647，0.643，0.647，0.643，0.645，0.646，平均值为0.645，RSD为0.25%。结果表明，本法的精密度良好。

2.1.4回收率实验

精密称取盐酸丁卡因对照品约10mg、20mg、30mg各两份置100ml量瓶中，分别加入已知含量的盐酸丁卡因溶液1ml，加水溶解，并定容至刻度，再分别取1ml置50ml量瓶中，加水定容至刻度，在311nm波长处测定吸收度。计算6次回收率（%）分别为101.7,102.5，103.9,102.7,100.4,100.0。结果表明，回收率为100～103.9%,RSD为1.5%。

2.1.5样品含量测定

取3批盐酸丁卡因溶液，分别精密量取各批号溶液1ml，每批取3份，置100ml量瓶中，加水定容至刻度，再精密量取上述溶液各2ml，置50ml量瓶中，加水定容至刻度，在311nm波长处测定吸光度。三批样品平均标示量为101.88%,101.82%,101.99%，RSD分别为0.19%，0.45%,0.32%。

2.2HPLC法测定盐酸丁卡因溶液含量[5～7]

2.2.1色谱条件

色谱柱：KromasilC18柱（5μm，4.6×200mmm）；流动相：甲醇-无水乙醇-水-三乙胺（70:10:20:0.05）；流速：1.0ml.min-1；柱温：30℃；进样量：20μl

2.2.2对照品溶液的制备

精密称取盐酸丁卡因对照品约50mg，置100ml量瓶中，加水适量超声溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液5ml置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，再精密量取2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备

取供试品1ml（约相当于盐酸丁卡因20mg）置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

2.2.4空白溶液的制备

按处方取氯化钠0.47g置100ml量瓶中，加水适量溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.5系统适应性试验

分别精密量取盐酸丁卡因对照品、供试品溶液和空白溶液各20μl，按上述色谱条件进样分析，记录色谱图。结果在该色谱条件下，盐酸丁卡因可完全分离，处方中其它组分和基质对盐酸丁卡因的测定无干扰，专属性良好。

2.2.6标准曲线和线性范围

盐酸丁卡因对照品50.0mg，加适量水，超声溶解，再以水定容至100ml，精密吸取5ml，用水定容到50ml，得对照品贮备液。精密吸取贮备液1ml，2ml，4ml，6ml，8ml，10ml至100ml量瓶中，加水定容至刻度，分别进样20μl，于311nm处测定峰面积，并以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程：A=112583C+1530.1，R=1。结果表明盐酸丁卡因浓度在0.5～5.0μg.ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7精密度实验

取“2.2.2”项下的对照品溶液20μl，日内连续进样6次测定，RSD为0.25%。结果表明，本法的精密度良好。

2.2.8回收率实验

分别精密称取盐酸丁卡因对照品约10mg、20mg、30mg各两份，置200ml量瓶中，再分别加入已知含量的供试品1ml，加适量水溶解并稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，进样20μl于311nm波长处测定峰面积，将峰面积代入回归方程计算，每一浓度测量3次取其平均值，回收率（%）结果为102.9,102.4,103.4,102.7,103.0，102.8，RSD为0.60%。

2.2.9样品含量测定

精密量取1ml供试品溶液，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再取上述溶液1ml置于100ml量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，进样20μl，在311nm波长处测定峰面积，计算含量。三批样品平均标示量为101.81%，102.06%，102.12%，RSD分别为0.46%，0.75%，0.69%。

3.3酸碱滴定法测定盐酸丁卡因含量[8]

3.3.1含量测定

分别精密量取3批供试品5ml，各加中性乙醇和中性氯仿（各对酚酞指示液显中性）各10ml，酚酞指示液2滴，用氢氧化钠液（0.02mol.L-1）滴至水层显微红色。每批滴定3次，取平均含量，记录并计算溶液含量。每1ml氢氧化钠（0.02mol.L-1）相当于6.017mg的盐酸丁卡因（C15H24N2O2.HCl）。结果(F=0.9921)为三批样品平均标示量为102.52%，102.41%，102.44%，RSD分别为0.45%，0.18%，0.12%。

3.4永停滴定法测定盐酸丁卡因含量[9～10]

3.4.1含量测定

为《安徽省制剂规范》中规定的含量测定方法。分别精密量取3批供试品2ml，每批3份，在15～20℃下用0.1mol.L-1NaNO2液滴定。插入电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol.L-1）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。滴定时，调极化电压为50mV，门限值为60%，灵敏度为10-9A。含量测定结果为三批样品平均标示量为102.03%，102.15%，101.78%，RSD分别为0.20%，0.34%，0.46%。

3讨论

试验结果表明采用紫外分光光度法测定盐酸丁卡因溶液中盐酸丁卡因的含量操作简单，快速，分析成本低，具有一定的准确性，且其线性关系良好。

用HPLC法测定组分含量，流动相选择是关键，试验证明选用乙腈：水（70:30）作为流动相时，拖尾现象严重，最后通过试验摸索确定用甲醇-无水乙醇-水-三乙胺（70:20:10:0.05）作为流动相，组分分离完全，且基本无拖尾现象。

本试验所测溶液中只含有盐酸丁卡因、氯化钠和水三种成分，根据盐酸丁卡因的紫外吸收特点，用紫外分光光度法测定其含量，其他的两种组分对盐酸丁卡因的测定无干扰，且此方法简便，准确，快速，适合医院制剂的快速检测。HPLC法测定含量，虽然结果准确可靠，重现性也很好，但是溶液配制复杂，成本高而且耗时较长；酸碱滴定法测定含量，溶液配制虽简单快捷，但是滴定终点不容易掌握，操作误差较大；《安徽省医院制剂规范》中规定永停滴定法测定含量，虽然方法准确可靠，但是所需仪器永停滴定仪医院很少配备，因此测定工作无法开展。

参考文献

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