粉防己碱对增生性瘢痕组织结缔组织生长因子表达的影响

粉防己碱对增生性瘢痕组织结缔组织生长因子表达的影响

杨军姚建季建峰项铁龚振华李冬娟

杨军姚建季建峰项铁龚振华李冬娟

江苏省南通市第一人民医院烧伤整形美容科江苏南通226000

【关键词】粉防己碱；瘢痕组织；结缔组织；生长因子

【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0041-01

困扰烧伤和整形界的难题之一是对增生性瘢痕的防治和治疗，增生性瘢痕的主要临床特点是细胞外间质的过多沉积。外科手术治疗虽然是目前最常见的方法，但有时效果欠佳，有研究表明，粉防己碱可以有效地治疗矽肺等纤维增生性疾病，也可以抑制成纤维细胞的增殖及活力［1］。我们以体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞作为实验研究对象，来探讨粉防己碱对瘢痕组织结缔组织生长因子（CTGF）的影响。

1材料和方法

11标本收集：35例增生性瘢痕组织均取自南通市第一人民医院烧伤整形美容科住院病人，年龄18~54，平均为372岁，病人在取材前未使用激素或免疫抑制剂治疗，局部未进行放射治疗，不伴基础性疾病。

12主要试剂：粉防己碱粉剂（纯度9999%，浙江金华制药厂）；DMEM培养基及FCS（上海华美生物技术有限公司），小牛血清（杭州四季青生物制品研究所），细胞粘附仪（日本），羊抗人CTGF抗体（SantaCruz公司），SP试剂盒（中衫金桥公司）。

13成纤维细胞培养：将手术切取的瘢痕组织去除表皮及皮下组织，无菌条件下剪碎，用含20%小牛血清的DMEM培养基在CO2孵箱中培养，取实验中第4~7代生长良好的细胞做研究。

14实验分组：实验分粉防己碱组和对照组，对照组培养液为5%FCS-DMEM;粉防己碱组培养液中加入10mg/L粉防己碱，余均同于对照组。

15实验方法：将成纤维细胞悬液接种于24孔板中的盖玻片上，待细胞完全贴壁后更换为含粉防己碱的培养基，置培养箱中孵育48h后，8%多聚甲醛固定。按SP试剂盒说明操作：3%过氧化氢液阻断内源性过氧化氢酶；封闭液封闭非特异性抗原；CTGF多克隆抗体（1:500）孵育过夜；加生物素标记的二抗室温孵育1h；加标记过氧化物酶的链霉亲和素孵育40min。DAB显色，苏木精复染，脱水，封片，观察结果［2］。

16结果判定：在高倍镜下每张片子同一方向连续选择5个视野，随即计数每100个成纤维细胞中阳性细胞的个数，胞质内显示棕褐色颗粒的为阳性细胞。阳性细胞率以（-）至（+++）四个等级表示。（—）几乎未见阳性细胞；（+）为阳性率<30%；（++）为阳性率30~59%；（+++）为阳性率≥60%。

2结果分析

对照组中细胞生长无抑制，而粉防己碱组中细胞生长受到明显抑制；粉防己碱组中阳性细胞率明显低于对照组。粉防己碱组和对照组阳性率比较见表1

3讨论

结缔组织生长因子（CTGF）是由成纤维细胞在TGF-β1的选择性刺激下而产生，具有强烈的促成纤维细胞增殖和胶原沉积的作用［3］。在间质细胞中CTGF可以快速选择性地被转化生长因子β1（TGF-β1）诱导。是一种在纤维化病程中发挥重要作用的生长因子，其过度表达与某些纤维化疾病的发生、发展密切相关。

粉防己碱，系千金藤属防己科植物粉防己的主要生物活性成分，具有广泛的生物学作用，可以降低血压，拮抗心率失常，同时抑制血小板和多形核白细胞合成血栓素［4］。

本实验表明粉防己碱能抑制成纤维细胞增殖和趋化，从而抑制瘢痕组织的形成。我们的研究证实，粉防己碱可以有效应用于增生性瘢痕组织都治疗，但相关临床应用还有待进一步研究。

参考文献

［1］］赵连魁,谷廷敏,刘建春,等.维芎瘢痕霜对增生性瘢痕影响的临床研究［J］.实用美容整形外科杂志,2004,14(7):211212

［2］戴丽冰,潘姝,沈雁.积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子及RhoA/ROCK-Ⅰ调控信号的影响［J］.中国药学杂志,2010,57（14）：5859

［3］TakeharaK.Growthregulationofskinfibroblusts［J］.JDermatolSci,2000,24(Suppl1):S7077

［4］李竞先.汉防己甲素对钙通道阻滞剂受体的作用［J］.北京医科大学学报，1987,19（3）：177