简易石蜡细胞块制备方法及其应用价值

简易石蜡细胞块制备方法及其应用价值

刘钰君1吴共发1邱丽浈2黄绮亭1曾宇婷1

（1广州市增城区人民医院病理科广东广州511300）

（2广州市增城区人民医院内三科广东广州511300）

【摘要】目的：介绍一种简易石蜡包埋细胞块的制作方法及验证其在细胞病理中的应用价值。方法：40例临床送检胸腔积液细胞学病理标本，采用简易方法制作成石蜡包埋的细胞块，病理HE染色及免疫细胞化学染色验证其应用价值。结果：40例细胞学标本均成功制备石蜡细胞块，经HE染色及免疫细胞化学染色证实，染色效果好，结果可靠。结论：本方法制备的石蜡包埋细胞块成功率高，设备耗材简单，容易操作，细胞形态和抗原保持良好，值得推广应用。

【关键词】细胞块；石蜡包埋；免疫细胞化学

【中图分类号】R361【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）07-0351-02

石蜡细胞块能永久保存，可以连续切片和进行免疫细胞化学染色甚至分子病理检测，所以在细胞学病理诊断中具有临床应用价值。细胞块的制作方法已经有不少报道，包括利用凝血酶[1]、琼脂糖[2]或鸡蛋清[3,4]进行包埋，或离心沉淀法[2,5]，但这些方法均或多或少存在需要特殊材料或步骤繁琐或成功率不高等确定。本研究采用简易方法制作细胞块，经过应用，收到了满意的效果，本文就制作过程中的主要技术环节和应用体会介绍如下。

1.资料和方法

1.1材料

收集2014年9月—2017年12月广州市增城区人民医院临床各科室送检的胸腔积液细胞学标本40例，EP管、离心管、磷酸盐缓冲液（PBS）、各种即用型免疫组化抗体、即用型二步法免疫组化广谱检测试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新公司。其他耗材和仪器均为病理科日常工作所需。

1.2简易细胞块制作

细胞学标本直接移入50ml离心管，2000r/min离心10min，去掉液体，加入6～10ml醋酸消化液（消除粘液和红细胞），振动器震荡10min，2000r/min离心10min，去掉液体，如果细胞团块过大，可分装至其他EP管，调整细胞沉淀团块直径约4～5mm，加入95%乙醇，2000r/min离心10min，去掉上清，轻轻加入4%中性缓冲甲醛，2000r/min离心10min，用病理切片刀将EP管底部切开，小镊子轻轻将细胞块顶出，包在擦镜纸并染伊红，放入包埋盒中，进行常规冲洗、脱水、透明、浸蜡。

1.3常规HE染色和免疫细胞化学染色

石蜡细胞块4微米厚切片，行常规HE染色，染色方法与组织常规HE染色相同。免疫细胞化学检测方法操作与石蜡组织的免疫组化相同，操作按照试剂盒说明书进行。

2.结果

2.1石蜡细胞块制备成功情况

40例胸腔积液细胞学标本，全部成功制备成石蜡细胞块，制备成功率100%，细胞块最大径0.2cm～0.8cm。

2.2HE染色效果

HE染色显示细胞块中的各种细胞的细胞质和细胞核显示良好，红蓝颜色对比适中，背景干净，显微镜下的观察效果良好（图1）。

图1胸腔积液细胞学标本的细胞块HE染色显微镜下图像

2.3免疫细胞花学染色效果

免疫细胞化学染色检测细胞块中的广谱CK、CEA、E-cadherin、CK7、TTF-1、CK8/18、WT-1等抗体的表达，结果显示各种抗体在细胞中的表达位置正常，染色效良好（图2），对辅助病理诊断非常有帮助。

图2胸腔积液细胞学标本的细胞块免疫细胞化学染色显微镜下图像

3.讨论

细胞学病理检查已在临床上广泛开展，但免疫细胞化学在我国至今未普及，影响了细胞学检查的进一步发展，主要原因是相关技术问题没有很好地解决，例如直接细胞涂片做细胞免疫化学染色效果常不理想。细胞块的出现很大程度上改变了此局面[6]。石蜡细胞块可以和石蜡组织一样，能长久地保存并用于免疫细胞化学染色、分子病理检测等。对病理医师而言，细胞块结合免疫细胞化学对疑难病例能大大提高诊断准确率。有些病变特殊，难以二次获得的标本，制作细胞块能永久保存，提供给病人后续使用如肿瘤基因检测用于靶向肿瘤药物的选择等，所以细胞块具有重要临床价值与作用。

有鉴于此，我们摸索出一种简便的手工制备石蜡细胞块方法。该方法所需耗材、试剂、仪器均为日常病理科所具备，制作过程简单，制备成功率100%，制备出来的石蜡细胞块具有与石蜡组织一样能永久保存的特点。经过HE染色证实各细胞结构保存良好、染色细胞颜色鲜艳，染色效果良好，免疫细胞化学染色的各种抗体阳性表达效果好，背景清晰。经过我们要用，体会到此法有几个需要注意的环节。临床细胞学标本有粘液和红细胞，需要加入消化液消除，否则细胞难以成团。总之，本方法制备的石蜡包埋细胞块成功率高，设备耗材简单，容易操作，细胞形态和抗原保持良好，特别适用于一般病理科、基层单位或条件简陋的实验室，值得推广应用。

【参考文献】

[1]柳玮华,余小蒙,周小鸽.凝血酶细胞块简捷制备法[J].临床与实验病理学杂志,2007,23(6):721-722.

[2]张婉仪,罗丽花,刘惠娟,等.胸腹水细胞块制作技术及应用[J].临床医学工程,2014,21(1):44-45.

[3]郑晖,颜亚晖.介绍一种简单适用的胸腹水脱落细胞石蜡包埋法[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2003,12(4):445-446.

[4]彭先高,罗孟疌.浆膜腔积液脱落细胞学检查方法的改进[J].临床与实验病理学杂志,26(4):504-505.

[5]吴才良,龙琼先,刘欣雅,等.免疫组化染色在体液细胞块中的作用[J].成都医学院学报,2013,8(3):316-317.

[6]KhanS,OmarT,?MichelowP.Effectivenessofthe?cell?block?technique?indiagnosticcytopathology[J].JCytol,2012,29:177-182.