高效液相色谱法与酶比色法测糖化血红蛋白的方法学比较

高效液相色谱法与酶比色法测糖化血红蛋白的方法学比较

王聪慧陈杰杨晓波刘平平

（解放军第253医院检验科内蒙古呼和浩特010051）

【摘要】目的：为了提高检验科糖化血红蛋白（HbAlc）结果的准确度；为了增强与临床之间的互认；为了流行病学调查的研究，本文对高效液相色谱法（HPLC）和酶比色法测HbAlC两种方法的检测结果进行比对。贝克曼AU5800全自动生化分析仪采用酶比色法测定HbAlC，普门H9糖化血红蛋白分析仪采用高效液相色谱法测定HbAlC，对两种仪器两种方法所检测出的结果进行比对分析。结论：酶法与HPLC法具有良好的相关性，HPLC更适合本科室的检测环境，精密度较高，线性范围较宽，使用专门的仪器检测，减少项目间的交叉污染，更适用于流行病学的研究，方便快捷，具有很大的市场前景。

【关键词】糖化血红蛋白；酶比色法；高效液相色谱法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）26-0146-02

Comparisonofthemethodsforthedeterminationofglycosylatedhemoglobinbyhighperformanceliquidchromatographyandenzymecolorimetry

WangConghui,ChenJie,YangXiaobo,LiuPingping,

Departmentofclinicallaboratory;the253rdHospitalofPLA,010051,China

【Abstract】ObjectiveToimprovetheinspectionofglycosylatedhemoglobin(HbAlc)inordertoenhancetheaccuracyoftheresults;andbetweenclinicalrecognition;inordertostudytheepidemiologicalinvestigation,basedonhighperformanceliquidchromatography(HPLC)andenzymecolorimetryHbAlCtwomethodsdetectionresultswerecompared.BackmanAU5800automaticbiochemicalanalyzerusingenzymaticcolorimetricmethodfordeterminationofHbAlC,H9oftheglycosylatedhemoglobinanalyzerwasdeterminedbyhighperformanceliquidchromatographyHbAlC,detectedbythetwoinstruments,theresultsofthetwomethodswerecomparedandanalyzed.ConclusionTheenzymemethodandHPLCmethodhaveagoodcorrelation,HPLCismoresuitableforthedetectionofenvironmentaldepartment,highprecision,widelinearrange,detectionofspecializedequipment,reducethecrosscontaminationbetweenprojects,research,moresuitableforepidemiologicalconvenientandhasgoodmarketprospect.

【Keywords】Glycosylatedhemoglobinenzymecolorimetricmethodhighperformanceliquidchromatography

近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率也越来越高，且死亡率也在逐年递增，目前糖尿病在全世界的主要发病病因中占第3位，已成为仅次于心血管疾病和癌症的第三大死亡原因[1]。

糖化血红蛋白（HbA1c）是血红蛋白与糖类经非酶促反应结合而成的，其合成过程缓慢且相对不可逆．因此可反映机体2～3个月的平均血糖水平，在糖尿病的监测、治疗方面具有重要意义。2002年美国糖尿病协会（ADA）将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准，2010年ADA发布的糖尿病诊疗指南中以HbA1c≥6.5％作为糖尿病的诊断标准[2]。

目前各大临床实验室分析仪器种类较多，检测HbAlc的测定方法也很多，方法学有高效液相色谱法（HPLC）、免疫浊度法、酶比色法，电泳法，亲和色谱法，快速检测法等。由于我科室新采购一台普门H9糖化血红蛋白分析仪，现就我科室原来使用的酶比色法与高效液相色谱法（HPLC）进行结果的对比分析。

1.材料与方法

1.1仪器与试剂

1.1.1全自动生化分析仪贝克曼AU5800全自动生化分析仪；试剂、校准品及质控品均为宁波美康公司配套提供；方法学：酶比色法；

1.1.2糖化血红蛋白分析仪普门H9糖化血红蛋白分析仪；试剂、校准品及质控品均由深圳普门科技有限公司与仪器配套提供。方法学：高效液相色谱法

1.2样本

连续一个星期收集内蒙古呼市解放军第253医院住院及门诊病人的新鲜EDTA-2K抗凝的全血样本44份。所有标本均是当天的新鲜血液并且均在4小时内检测完成。

1.3方法

以贝克曼全自动生化分析仪AU5800采用的酶比色法为比对方法（X），普门H9糖化血红蛋白分析仪采用高效液相色谱法为实验方法（Y）；检测前对两个仪器及试剂均进行了校准及质控品的检测，每天均测定两个浓度的质控品，结果均在控，连续五天共检测44份标本，记录测定结果。

2.结果

3.讨论

现在临床对于糖尿病诊断与治疗观察的实验室检测方法为随机血糖、空腹FPG、糖耐量OGTT、糖化血红蛋白HbA1c，因血糖检测结果具有波动性和瞬间性的特点，与抽血时间、饮食、使用药物、身体状况等都有关系，并且不能反映出被检测者长时间的血糖情况。而HbA1c反映的是检测前2～3个月的平均血糖水平，并且不需要空腹。HbA1c作为糖尿病的诊断、血糖控制、评价疗效方案、以及筛选的有效检测指标已被临床上广泛使用，这对检验科的糖化血红蛋白的检测方法及质量控制也提出了更高要求。现在糖化血红蛋白测定的方法有很多，不同仪器与方法学也会造成结果的差异，各实验室多根据自身条件选择适合的检测方法。我科室现使用全自动生化分析仪贝克曼AU5800采用的酶比色法进行标本检测，虽然酶比色法测定HbAlc是GHb测定的一个突破，它提供了一个像生化反应一样快速、均一的反应系统，有很好的精密度，变异系数可以为1%。[3]但由于溶血剂稀释标本时人员及试剂枪加样时可能出现的偏差导致结果时常出现随机误差。HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准，是临床实验室HbA1c首选的检测方法，可根据总面积、A1c和A0峰是否出现在正确的窗口处、观察Hb的变异体、HbF的含量、基线的平稳、LA1c-1、LA1c-2、A1c的含量是否在线型范围内等，对检测结果进行评估，确认结果的准确性后报告。[4]根据以上分析我认为酶法与HPLC法的结果比较虽存在差异，但在可接受范围，但是酶比色法外界影响因素较多，任何大生化分析仪均可检测，也会出现仪器中多个项目之间试剂的交叉污染，而HPLC法是使用专用仪器进行检测该方法结果精准，变异小，不受异常血红蛋白及其衍生物的影响，具有优良的精密度。HPLC的HbA1c在DCCT中，用于所有患者样本的检测，被推荐为参考方法。我国国家参考实验室也使用HPLC法作为参考方法。[5]

【参考文献】

[1]吴炯，潘柏申.糖化血红蛋白--糖尿病诊断和疗效观察的标志物[J].

[2]AmericanDiabetesAssociation.StandandsofMedicalCareinDiabetes-2010[J].DiabetesCare，2010，33(1):sll-s61.

[3]孙虹，苏敏，把丽美，周超.高效液相色谱法与酶法检测糖化血红蛋白结果一致性的比较[J].昆明医科大学学报，2014(1):116-117.

[4]滕敏.三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分[J].维吾尔医药，2013，06.

[5]张中华，苏锦良，卢秀霞.免疫比浊法盒高效液相色谱法测定血红蛋白的价值比较[J].现代医院，2011，8（11）：65-66.