重氮法测定胆红素在全自动生化分析仪上的应用与研究

重氮法测定胆红素在全自动生化分析仪上的应用与研究

卢玖世

卢玖世（广西宾阳县妇幼保健院检验科530400）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）38-0133-01

【摘要】目的探讨重氮法测定胆红素在全自动生化分析仪上的应用与研究。方法采用全自动化分析仪行重氮法对胆红素进行检测的结果（观察组）与多层膜片法检测结果比较（对照组）。结果两组对总胆红素检测的结果无明显差异，观察组直接胆红素与对照组检测的结合胆红素差异明显（P<0.05）。间接胆红素两组间有较好相关性。结论实验室在对高胆红素标本进行检测试，应对参考范围进行明确界定，应用相关性曲线加以较正，以获得更准确的检测结果。

【关键词】重氮法胆红素全自动生化分析仪应用研究

临床肝功能分析中，胆红素是较常用的指标，通常采用重氮法对胆红素的肌项指标实施检测。此方法具有轻度溶血对结果未构成影响、有较高的实验灵敏度、试剂价格便宜、检测操作方法简单的优势，在临床上广泛应用[1]。本次研究就采用全自动化分析仪行重氮法对胆红素进行检测的结果（观察组）与多层膜片法检测结果比较（对照组），旨在为临床对检测方法的选择提供理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料本次研究选择高胆红素标本38份，多选自感染科病发各型肝炎的患者，血液科及产科的标本较少。采用日本东芝TBA-40FR全自动生化分析仪行理氮法检测（观察组），并应用干化学设备行多层膜片法测量（对照组）。

1.2方法对高胆红素患者行静脉新鲜血采集，为2-3ml，于一次性塑料试管内放置，高胆红素标本采用重氮法行筛选操作，再应用多层膜片法实施复检。日本东芝TBA-40FR全自动生化分析仪是用样品和反容器中液态试剂混合后有不同程度的化学反应出现，依据免疫反应浊度的大小和显色反应颜色深浅，对吸光度加以测定。

1.3统计学分析统计学软件采用SPSS13.0版，组间计量数据采用（x±s）表示，计量资料行t检验，计数资料行x2检验，P<0.05差异有统计学意义。

2结果

两组对总胆红素检测的结果无明显差异，观察组直接胆红素与对照组检测的结合胆红素差异明显（P<0.05）。间接胆红素两组间有较好相关性。见表1。

表1两组胆红素检测结果比较（x±s）

组别总胆红素直接胆红素间接胆红素δ-胆红素

观察组134.8±102.591.8±64.142.2±42.6--

对照组134.9±103.722.2±30.5*33.9±24.877.8±55.4

注：*P<0.05。

3讨论

重氮试剂由Ehrlich于1983年发明，并在检测尿中胆红素中应用，VandenBergh在1916年将重氮试剂用于测定血清中胆红素，故按着重氮试试反应模式，胆红素被命名为间接反应胆红素、直接反应复胆红素，其和为总胆红素[2]。对待测物的浓度依据Lambe-Beer定律加以检查，把胆红素实施测量的方法被定义为重氮法，其作用原理为：重氮试剂可直接与血清中的结合胆红素发生反应，促使偶氮胆红素产生，测定非结合胆红素时需以苯甲酸钠、咖啡因为加速剂对胆红素氢键造成破坏，再与重氮试剂发生反应，抗坏血酸对剩余的重氮试剂造成破坏，在将为碱性特征的酒石酸钠加入，使其由530nm的最大吸光度向598nm转变，棕色色素或红色色素产生的吸光度及非胆红素黄色色素可降至忽略不计，升高其特异性和灵敏性。后形成的绿色为咖啡因和蓝色的碱性偶氮胆红素与对氨基苯磺酸间的黄色色素发生混合形成。临床采用的多层膜片法属于一种固相化学，是将一项测定中所需的部分或全部试剂于载体上固定，膜片由三层组成，传递层在上面一层，含有蛋白层分的为第二层，第三层为反应层，对两组胆红素的反应前克分子的反应强度和光反射密度在400nm、460nm间分别检测，并采用统一公式实施计算[3]。

临床医学中重氮法被应用于多种疾病的研究，形成了较为传统的观念，Lauff在1981年用HPLC法对一新的胆红素成分进行分析，并以δ-胆红素定义。因应用HPLC方法后，临床对胆红素成分的认识出现了系列的转变，未结合胆红素+结合胆红素+δ-胆红素为总胆红素[4]。在此种状况下，结合胆红素的水平无法应用直接胆红素来代替，即在病情怀况下，结合胆红素采用重氮法无法测出其真实的水平，而本次研究结果显示，直接胆红素和结合胆红素间存在明显差异。

在理论上未结合胆红素与间接胆红素存在一致性，两组数据相关性较低，从数据计算进行分析显示，未结合胆红素与间接胆红素基本一致，但在个别组数据上还有显著差别，应用理论较难对其做出解释。重氮法因其操作简单的特点，在大量标本的筛查过程中较为适用，如人群的流行病学调查、健康体检等。多层膜片法是因结合胆红素与特异性蛋白结合，使溶血对侧量的干扰影响最大限度的降低，故临床标本在有严重的溶血时可采用多层膜片法进行检测，可获得更高的结果准确性。且重氮法对δ-胆红素不能测出，多层膜片法可做一定的弥补，在肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸的诊断及治疗方案的制定中有较为重要的作用。

综上，重氮法测得的直接胆红素水平无法对结合胆红素进行代替，且对δ-胆红素的值不能测出，而就未结合胆红素和间接胆红素水平而言，两组方法检查结果具有一致性，故实验室在对高胆红素标本进行检测试，应对参考范围进行明确界定，应用相关性曲线加以较正，以获得更准确的检测结果，确保临床治疗顺利进行。

参考文献

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：452-457.

[2]VitekL,CareyMC.Enterohepaticcyclingofbilirubinasacauseofblackpigmentgallstonesinadultlife[J].EurJClinInvest,2003,33(9):799-810.

[3]王建兵，孙蕾，黄宪章，等.不同检测胆红素测定结果的偏倚分析[J].现代医药卫生，2007，23（4）：491-493.

[4]AminSB.Clinicalassessmentofbilirubiniuducedneurotoxicityinprematureinfants[J].SeminPerinatol,2004,28(5):340-347.