散发性结直肠癌的MSI与临床病理特点的关系

散发性结直肠癌的MSI与临床病理特点的关系

罗波

（成都中医药大学附属医院四川成都610072）

【摘要】目的：通过微卫星位点的分析，了解散发性结直肠癌中的微卫星不稳定性的阳性率，并探讨其与临床病理特点的关系。方法：收集131例结直肠癌的血液和肿瘤标本，分离DNA，荧光标记引物后通过PCR扩增，并在DNA测序仪上进行毛细管电泳，Genescan软件收集扩增片段进行分析。结果：131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与患者的年龄，肿瘤的大小相关（P<0.05），而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异(P>0.05)。结论：根据MSI对散发性大肠癌进行分类有重要的理论和实际意义。

【关键词】散发性结直肠癌；微卫星不稳定；病理特点

【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）22-0025-02

Microsatelliteinstabilityofsporadiccolorectalcanceranditsclinicopathologicalsignificance

TheAffiliatedHospitalofChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610072,Sichuan,China

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheincidenceofmicrosatelliteinstability(MSI)insporadiccolorectalcancerandtheassociationwithclinicopathologicalcharacter.MethodsThebloodandtumorsamplesof131casesofcolorectalcancerwerecollected.GenomicDNAwasextractedfromtumortissuesandmatchedblood.MicrosatelliteanalysiswasperformedusingfluorescentPCRfollowedbyfragmentanalysisonautomaticDNAsequencerwithGenescansoftware.Results27outof131sampleswasMSI-Handsignificantlyassociatedwithpatientageandtumorsize(P<0.05),butnottumorsite,stagenordifferentiation(P>0.05).ConclusionTheclassificationofsporadicCRCaccordingtoMSImaybeofimportanceboththeoreticallyandpractically.

【Keywords】Sporadiccolorectalcancer;Microsatelliteinstability;Clinicopathologicalfeature

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展是一个多基因多步骤的复杂过程，其中涉及到癌基因的激活和抑癌基因的失活。基因遗传不稳定性如微卫星不稳定（microsatelliteinstability，MSI）可能是产生突变，导致肿瘤发生、发展的重要分子事件。本研究就最近收治的散发性大肠癌的MSI水平进行检测，并探讨其临床病理生物学特征。

1.资料与方法

1.1病例收集

收集成都中能够医药大学附属医院病理科2015年-2016年诊断的散发性结直肠癌131例，术前均未经过化疗，其中男性68例，女性63例，年龄27～92岁。病变部位分为近端结肠39例，远端结肠21例，直肠71例。肿瘤术后病理类型：HE染色，3例缺失，有11例为黏液腺癌，2例低分化腺癌，其余115例为管状腺癌。高分化5例，中分化114例，低分化11例。

1.2DNA的提取

采用TIANGEN的血液/细胞组织基因组DNA提取试剂盒（目录号DP304-03），严格安装说明书提取血液和肿瘤组织DNA。提取后在Nanodrop2000微量紫外分光光度计上进行浓度及波峰测试，并进行DNA电泳。

1.3微卫星位点的分析

1.3.1聚合酶链反应（PCR）：BAT-25，BAT-26引物序列见表1，由上海生工生物有限公司合成。各引物上游标记荧光染料FAM。PCR反应体系：模板DNA2μl，10×BUFFER2μl，上游引物（10μmol/L)1，下游引物（10μmol/L）1，dNTP（1.25mmol/L）2μl，TaqDNAPolymerase0.2μl，加去离子水补足至20μlPCR循环体系。95预变性2分钟，95变性30秒，55退火30秒，72延伸30秒，40个循环，然后72延伸7分钟，12结束。

1.3.2PCR扩增产物检测及结果判断在ABIPRISM3730DNA测序仪上面，按仪器说明将扩增产物进行毛细管凝胶电泳，由genescan软件进行数据收集和处理。如果肿瘤PCR产物与正常血液PCR产物比较，出现扩增片段碱基延长或者缩短，或者电泳图形状的改变，判定为MSI。如果2个或者以上位点改变则为高度MSI（highfrequencyMSI，MSI-H），只有1个位点有长度变化者为低度MSI(lowfrequencyMSI，MSI-L)，无任何位点变化称为MSS（microstatellitestable，MSS)。

1.4统计方法

以SPSS18.0统计软件进行处理，使用卡方检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2.结果

2.1MSI在结直肠癌中的检测结果

131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与患者的年龄，肿瘤的大小相关（P＜0.05），而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异（P＞0.05）。具体见表2。

3.讨论

微卫星是指DNA基因组中小于10个核苷酸的简单重复序列，又称短串联重复（shorttandemrepeat,STR），是一种遍布于人类基因组的重复序列，一般为2～6个碱基重复，如（CA）n、（GT）n、（CAG）n等，尤以(CA)n重复序列最为常见。其长度由重复单位的拷贝数决定，是一类呈高度多态的遗传标记。目前普遍认为MSI通过改变DNA结构或通过与特异性蛋白质结合而发挥其基因调控作用。微卫星不稳定性（microsatelliteinstability，MSI）是指由于复制错误（replicationerror，RER）引起的简单重复序列的增加或丢失。在同一个体的正常组织比较下，肿瘤组织内的微卫星重复单位可以发生增多或减少而造成长度改变，从而在同一位点上出现不同于正常组织的等位片段，即称为MSI[1]。MSI是由于错配修复基因（mismatch-repairgene）失活导致DNA复制错误的一种表现。

本实验结果显示，131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与年龄、肿瘤的大小有关，而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异（P＞0.05）。这与文献报道一致[2-3]。

MSI与常规病理在判断结直肠癌预后之间还有一定的矛盾，在传统病理中黏液腺癌和低分化腺癌提示预后不良，而大多数表达MSI-H者为黏液腺癌和低分化腺癌[4]，而从MSI角度来判，MSI-H者是预后良好的象征[5]。许多研究报道MSI是一个独立的预后因素[6-7]并且年轻的直肠癌患者预后往往较年长者好[8]。由于本次实验的直肠癌患者均为2015年至2016年成都地区的肿瘤病人，可能具有一定的地域，时间局限性，但同样也反映了结直肠癌的变化。由于本次实验均为最新的病例，所以未进行生存分析，这将是我们下一步研究的内容。

【参考文献】

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[8]SamowitzWS,SweeneyC,HerrickJ,eta1.PoorSurvivalAssociatedwiththeBRAFV600EMutationinMicrosatellitestableColonCancers.[J]CancerRes.2005,65:6063-6069.