肺炎支原体检测方法的研讨

肺炎支原体检测方法的研讨

宫殿军

宫殿军

【摘要】肺炎支原体是引起支原体肺炎的主要病原体。支原体肺炎约占各种肺炎的10％，已成为发病率最高的传播疾病.严重的支原体肺炎也可导致死亡。由于技术局限，目前对肺炎支原体检测仍存在不少局限性。本文就各种检测方法进行简要的分析，以其给临床检测人员实用的参考。

【关键词】肺炎支原体;支原体肺炎;检测

【中图分类号】R485【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)06-0373-02

肺炎支原体是介于病毒和细菌之间的一种微生物，是人类支原体肺炎的病原体。肺炎支原体平均直径125-150um，没有细胞壁。肺炎支原体的致病性可能与感染者对病原体或其代谢产物的过敏反应有关。肺炎支原体被呼吸道吸入后，黏附于宿主呼吸道上皮细胞表面，抑制纤毛活动与破坏上皮细胞。

支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行肺炎支原体的检测。目前，国内肺炎支原体的诊断主要依靠血清学检测和病原体培养。

1主要检测方法介绍

1.1补体结合试验:补体结合试验是诊断肺炎支原体常规使用的血清学诊断方法。取急性期和恢复期双份血清，测定结果，前后检测效价呈4倍增长或单份血清效价不小于1∶32判定为阳性。补体结合试验的敏感性高，特异性很好，但检测上的缺陷是初次感染时出现阳性率高，再次感染时容易出现假阴性反应。

1.2间接血凝试验:间接血凝试验检测肺炎支原体IgM抗体。一般在感染肺炎支原体后7天出现阳性，10～30天达高峰，12～26周逐渐降低。检测缺陷在于很多感染者采血时错过急性期，难以测出4倍增高的抗体。特异性比较不理想。

1.3冷凝集试验:冷凝集试验是一种诊断肺炎支原体感染的非特异性试验，阳性率为33%～76%。效价越高该病的可能性越大，常在发病的第一周末或第二周初出现阳性反应，持续约2～4个月。检测缺陷在于婴幼儿腺病毒、副流感病毒等引起的肺炎和呼吸道感染也可出现假阳性反应。特异度和敏感度均为最低，因此其临床诊断价值不大。

1.4间接红细胞凝集反应:用单宁酸处理绵羊红细胞，然后结合肺炎支原体，加上抗体则可见红细胞凝集反应。其抗原效价为不小于1：32。间接血凝试验在临床应用中仍具有较高的使用价值。该检测方法灵敏度、误诊率、阴性预测值较高，且价格低廉，适合于发现病例。但是特异性、漏诊率、阳性预测值都较低。

1.5金标免疫层析法:根据金标免疫层析原理，利用肺炎支原体采用免疫层析技术，检测肺炎支原体抗体。阳性检出率最高，而且操作简单快速，是确诊肺炎支原体的最好方法。但是敏感度略低，有漏诊的可能。

1.6酶联免疫吸附试验:酶联免疫吸附试验用于检测IgM和IgG抗体。具有特异性高、敏感度好和简便等优点。适合临床常规使用。检测缺陷在于很难判断标本病人是既往感染还是现症感染，再次测定支原体抗体滴度增加时方可判为支原体阳性。许多病人检测抗体为阳性而培养则为阴性，也在一定程度上影响了病情的确诊。

1.7直接培养法:培养法可检测到病原体存在的直接证据，是金标准的方法。支原体用人工合成培养基培养。缺点在于需要的时间长，快速培养至少需要2～3天才能出结果。一般培养需2周左右。目前临床一般不采用，仅在科研单位进行科研活动。

1.8间接培养法:根据培养基中加入其它试剂，间接判断病原体的存在，在培养的同时也进行药敏试验，可大大缩短检测的时间。但是由于是间接的证据，理论上这种变色也可能由于其它微生物代谢发生，造成出现假阳性，致病菌导致的假阳性，药敏结果也能在一定程度上反映出该菌对抗生素的耐药性，药敏结果有一定的临床应用价值。非致病菌所致的假阳性，就有可能使结果产生错误，误导临床用药。

1.9PCR法:直接检测肺炎支原体基因的存在。PCR反应有较高的灵敏度，阳性率明显高于培养法，也明显高于血清学方法。特异性也较强，与其他支原体无交叉反应，且不受口腔其他菌污染的干扰。所需时间较短，因而采用PCR法可争取早日确诊，以指导临床合理用药。方法的缺陷在于，对实验条件、试剂以及操作人员的要求都较高，操作不当易造成错误判断。只能判断有没病原体的感染，而不能同时做药敏，临床只能经验性的用药，如有耐药菌就会对治疗有一定的影响。

病理研究证实肺炎支原体是呼吸道及其他器官感染的重要病因之一。肺炎支原体的实验室诊断方法种类繁多，传统的培养方法要求高、敏感性低、耗时长等，限制其临床应用。血清学提供了一种回顾性方法，其特异性和敏感性适中，简便快捷，可应用于临床，但存在难以解决的假阳性假阴性问题。PCR法是通过检测病原体核酸水平，具有高敏感性和高特异性、检测快速、不存在交叉反应和放射性污染、易标准化、能够反映感染度等特点，是现症感染指标，在某种意义上可替代培养，但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求高、易交叉污染，其高假阳性制约了方法的广泛使用。

参考文献

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[2]袁壮.董宗祈.鲁继荣等.小儿肺炎支原体肺炎诊断治疗中的几个问题．中国实用儿科杂志，2002;17(8):9．457

[3]王佳贺，陈海峰，李萍等．二种PCR法与培养法同时检测肺炎支原体[J]．临床内科杂志，2002，19(supp1):122-123

作者单位：155811黑龙江省农垦红兴隆中心医院