P75基因在结直肠癌中的表达及其意义

P75基因在结直肠癌中的表达及其意义

杨国光周嘉礼

杨国光周嘉礼（通讯作者）（保山市第二人民医院普外一科云南保山687000）

【中图分类号】R735.3+7【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）15-0050-02

【摘要】目的调查结直肠癌与癌旁组织中P75基因的表达，探讨其在结直肠癌发生发展过程中的作用。方法采用RTPCR技术检测40例结直肠癌组织与癌旁组织中P75mRNA表达水平。结果⑴癌组织和癌旁组织中均有P75mRNA的表达。⑵癌组织明显高于癌旁组织(P<0.05)。⑶P75基因表达与Dukes分期和TNM分期呈正相关(P<0.05)，与其他临床病理相关因素无明显相关，与临床病理相关因素无关。结论P75参与了结直肠癌的发生发展过程，其诱导的凋亡可能促进了结直肠癌的发生及发展。P75基因表达与肿瘤分期呈正相关，可作为评价结直肠癌临床预后的参考指标。

【关键词】结直肠癌P75凋亡

本研究通过检测P75在直肠癌中的表达，探讨其在结直肠癌发生发展中的可能作用，为结直肠癌的化学药物治疗和基因治疗提供新的依据。

1材料与方法

1.1材料和试剂氯仿、异丙醇、乙醇、焦碳酸二乙酯、乙醇、3-吗啉丙环酸、甲醛、氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷、冰乙酸、乙二胺四乙酸、冰乙酸、溴化乙锭；琼脂糖；RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit、PCRMasterMixKit；DNAMarker、DNA上样缓冲液、RNA上样缓冲液；TRIZOL；引物。P75SENCE5’-AGCTCGACCTAGATCTATTATTT-3’，ANTI-SENCE5’-CTATGTATGAGCCGCACCTTTA-3’，PCR产物620bp，退火温度60℃；β-actinSENCE5’-AGCCACTGAACTAGACTAACT-3’，ANTI-SENCE5’-CCTGATCACTCCCGTGTATG-3’，PCR产物大小为312bp，退火温度55.5℃；均由大连宝生物公司合成。

1.2标本收集保山市第二人民医院2009年1月至2010年1月期间术前未经化疗、放疗或免疫治疗的结直肠癌患者新鲜手术标本40例，癌组织和癌旁组织各2份，其中1份约100mg，存于-196℃液氮，备用。另1份经病理检查确诊。

1.3一般资料男25例，女15例，年龄27～88岁，直肠癌27例，结肠癌13例。按照WHO标准腺癌33例，黏液腺癌6例，未分化癌1例；分化程度高、中、低及未分化分别为9例、18例、12例、1例；DukesA期12例，B期10例，C期15例，D期3例；TNM分期Ⅰ期12例，Ⅱ期10例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例。

1.4RT-PCR扩增目的基因匀浆后的组织用TRIZOL试剂盒提取总RNA，1.5%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，紫外线透射分析仪上观察电泳结果。取1μlRNA样品在紫外分光光度仪260nm/280nm下测其浓度。按RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit试剂说明书合成cDNA，RNA样品均取3μg。向0.2mlPCR管中顺序加入2×PCRMasterMix10μl,PCRwaternucle-free8μl,目的基因上游引物0.3μl,目的基因下游引物0.3μl,逆转录模板1μl。PCR反应条件:94℃预变性10min；94℃变性45s，退火1min，72℃延伸45s，40个循环；72℃总延伸15min。反应结束后，取10μl样品，按体积比加入10×DNA上样缓冲液，以TAE为电流缓冲液，在1%琼脂糖凝胶中电泳鉴定PCR产物，凝胶成像仪拍照并分析图像。其中DNAMarker的量也为10μl。

1.5统计学处理采用SPSS12.0统计软件包对数据进行分析，计量资料以均数±标准差(x±ｓ)表示，组间比较采用t检验，mRNA水平与临床病理相关因素的关系采用Kruskal-Wallis检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1RNA完整性检测检测所得RNA样品，可见28S和18S两条带，说明所提取RNA样品完整，可用于逆转录。

2.2结直肠癌与癌旁组织中P75mRNA的表达所有的标本均能检测到P75mRNA及β-actinmRNA表达，得到的目的基因片段为特异性扩增条带，与预期的片段长度一致。

2.3结直肠癌组织中P75mRNA表达与临床病理相关因素的关系P75mRNA表达水平与Dukes分期及TNM分期呈正相关，但与其他因素无关。

3讨论

本实验结果显示：P75基因在癌组织中的表达明显要高于癌旁组织，其表达水平与Dukes分期和TNM分期都成正相关，这与Maurer等的结论比较相似，提示P75可能与预后有关，可作为评价结直肠癌临床预后的参考指标。

参考文献

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