青海高原低氧环境下藏、汉族妊娠期肝胎盘组织中VEGF和HIF-1α的表达及意义

青海高原低氧环境下藏、汉族妊娠期肝胎盘组织中VEGF和HIF-1α的表达及意义

白玉芳

白玉芳

（青海大学附属医院产科青海西宁810001）

【摘要】目的：探讨青海高原低氧环境下藏、汉族妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者胎盘组织中血管内皮生长因子（VEGF）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及意义。方法：选取2012年1月至2015年1月在我院住院的妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者70例为观察组,其中藏族35例，汉族35例，同时选取健康孕妇70例为对照组，其中藏族35例，汉族35例，检测各组藏族、汉族孕妇VEGF和HIF-1α表达情况。结果：藏族和汉族ICP患者胎盘组织VEGF表达阳性率分别为68.57%和85.71%，而对照组藏族和汉族胎盘组织VEGF表达阳性率分别为97.14%和94.29%，ICP患者胎盘组织VEGF表达强度明显低于对照组；观察组内藏族胎盘组织VEGF表达强度低于汉族（P＞0.05），而对照组内藏族和汉族差异无统计学意义（P＞0.05）；藏族和汉族ICP患者胎盘组织HIF-1α表达阳性率分别为91.43%和77.14%，而对照组藏族和汉族分别为60.00%和57.14%，观察组胎盘组织HIF-1α表达强度明显高于对照组；观察组内藏族胎盘组织HIF-1α表达强度高于汉族（P＞0.05），而对照组内藏族和汉族差异无统计学意义（P＞0.05）；藏族ICP患者早产、新生儿窒息、羊水污染例数明显多于汉族ICP患者组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：与汉族ICP患者相比，藏族ICP患者胎盘组织中HIF-1α表达水平明显增高，而VEGF表达水平明显降低；藏族ICP患者的早产、羊水污染以及新生儿窒息发生率明显高于汉族ICP患者。

【关键词】ICP；VEGF；HIF-1α；胎盘组织；藏族；汉族

【中图分类号】R714【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）05-0028-03

妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP）是一种妊娠中、晚期特有的疾病，由Ahlfeld于1883年首次报道，临床上以皮肤瘙痒和胆汁酸升高为特征，主要危害胎儿，使围生儿发病率和死亡率增高。该病对妊娠最大的危害是发生难以预测的胎儿突然死亡，该风险与病情程度相关。本病具有复发性，分娩后可迅速消失，再次妊娠常会复发。ICP发病率0.8%～12.0%，有明显地域和种族差异。发病孕妇临床症状多表现为黄疸及皮肤瘙痒，还可能存在胆汁酸、肝酶高升等生化指标异常情况，且这些指标升高程度因人而异，多数产妇分娩数日或半月后可恢复正常[1]。ICP对产妇影响较小，但其对胎儿危害极大，极易诱发早产、胎儿宫内窘迫、围产期死亡等情况[2]。青藏高原号称“世界屋脊”，平均海拔4000米，具有独特的地理、生态和气候环境，大气氧分压仅为海平面的60％，环境低氧极为显著。高海拔地区、慢性低氧特殊地理环境下，早产、低出生体重儿和围产儿死亡率高。高原地区妊娠期妇女面临着环境缺氧的挑战，各个组织器官将面临一系列生理生化改变以适应该环境，其中，以缺氧诱导因子为中心的一系列基因发生了变化。为对比分析高原低氧环境下藏、汉族ICP患者及胎儿结局，笔者选取我院住院的70例ICP患者，其中藏族35例，汉族35例，对患者胎盘组织中血管内皮生长因子（VEGF）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及意义进行如下研究：

1.资料与方法

1.1一般资料

选取2012年1月至2015年1月在我院住院的妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者，纳入标准：（1）符合ICP诊断标准，参照乐杰主编的《妇产科学》第7版；（2）为长期居住在青海高原地区，居住时间超过6年；（3）均为单胎、剖宫产分娩；（4）患者及家属知情同意。排除标准：合并妊高征、糖尿病、皮肤病、双胎等；孕期接受过治疗。本次研究共纳入70例ICP患者作为观察组（藏族35例，汉族35例），同时选取健康孕妇70例作为对照组（藏族35例，汉族35例），各组在年龄、孕龄、孕次等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

1.2VEGF、HIF-1α检测（包含了组织取样）

剖宫产后从胎盘子宫附着处取脱膜组织10mg，将一部分组织福尔马林固定，另外一部分置于液氮内保存。选用免疫组织化学检测VEGF、HIF-1α：常规石蜡包埋、切片，烤片，二甲苯脱蜡，3%过氧化氢孵化10min，滴入0.01M枸橼酸盐缓冲液修复，1％牛虹清白蛋白封闭，滴入兔抗人VEGF抗体/兔抗人HIF-1α抗体，洗涤，二抗，洗涤，DAB显色，苏木素复染，镜检。

1.3结果判定

镜下细胞核或细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，400倍高倍镜下随机选择5个视野/每张切片，计数200个细胞/视野，共计1000个，根据阳性细胞显色比例和染色强度做判定。阳性细胞评分：阳性细胞比例＜5%为0分，5%～24%为1分，25%～49%为2分，50%～74%为3分，≥75%为4分。染色程度评分：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；以阳性细胞评分与染色强度评分乘积作为标准，0分为阴性（-），1分～4分为弱阳性（+），5分～8分阳性（++），9分～12分（+++）。

1.5统计学处理

应用采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，计量资料采用（x-±s)表示，比较使用t检验，计数资料比较使用χ2检验，等级资料使用Kruskal-WallisH检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2.结果

2.1各组胎盘组织VEGF表达情况

观察组藏族和汉族ICP患者胎盘组织VEGF表达阳性率分别为68.57%和85.71%，而对照组藏族和汉族胎盘组织VEGF表达阳性率分别为97.14%和94.29%，通过Kruskal-WallisH检验，观察组胎盘组织VEGF表达强度明显低于对照组；观察组内藏族胎盘组织VEGF表达强度低于汉族（P＞0.05），而对照组内藏族和汉族差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

3.讨论

妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）是一种严重危害胎儿健康的围产期疾病，其作用机制尚未明确，但分析可能与女性激素、遗传、免疫、以及环境等有关[3]。我们的研究中发现青海高原地区藏族女性ICP高于汉族女性，这佐证了ICP与遗传有关这一结论。

低氧诱导因子（HIF）是缺氧诱导基因转录的重要节点，对滋养层相关细胞增殖、分化、侵袭能力具有直接影响。HIF还与胎盘、胎儿发育密切相关[4]。HIF存在有α、β两个亚基，其中HIF-1α是HIF的功能性亚基，HIF-1β是结构性亚基。HIF-1α存在两个氧依赖性降解区域，该两个区域可介导HIF-1α的泛素一蛋白酶小体降解途径[5]。在缺氧刺激下，HIF-1α降解将被阻滞，细胞内的HIF-1α将大量聚集并出现核转位，转位的HIF-1α可与HIF-1β组成稳定的二聚体，进而与相关缺氧反应元件作用，最终激活目的基因转录，保证机体适应缺氧环境[6]。ICP发病后，产妇宫腔存在一系列的缺血、缺氧状态，这将持续刺激HIF-1α的表达，并诱发一系列的低氧反应，以满足缺氧组织的氧供，同时降低细胞氧耗，缓解胎盘的氧供矛盾，保证胎盘环境稳定，最终维持母胎滋养层细胞的分化和代谢，维持妊娠[7]。本次研究中我们发现，藏族和汉族ICP患者胎盘组织HIF-1α表达阳性率分别为91.43%和77.14%，而对照组藏族和汉族分别为60.00%和57.14%，观察组胎盘组织HIF-1α表达强度明显高于对照组；观察组内藏族胎盘组织HIF-1α表达强度高于汉族，而对照组内藏族和汉族差异无统计学意义，提示藏族ICP患者症状更为严重，功能缺氧状态更为严峻。

血管内皮生长因子（VEGF）是血管生成因子的一种，主要由血管内皮细胞合成，具有促血管内皮细胞有丝分裂的能力，还具有促新生血管生长、维持血管完整性及通透性等功效。妊娠启动及维持均与血供有关，而VEGF在构建胎盘血管网络上扮演着重要角色[8]。有学者研究发现VEGF与妊娠中合体滋养细胞及侵蚀性绒毛细胞表达存在密切联系，高表达的VEGF在促绒毛虚构生产、促胎盘血管网发育上具有显著作用[9]。当妊娠进入晚期时，VEGF又将发挥血管通透性调节作用，以维持母儿间营养交换，保证妊娠顺利进行。现代研究显示，妊娠过程中母儿无法通过血液直接进行物质交换，而需借助胎盘、毛细血管来进行物质交换，这意味着VEGF低表达将通过影响胎盘、毛细血管来作用胎儿发育[10]。我们的研究中发现，藏族和汉族ICP患者胎盘组织VEGF表达阳性率分别为68.57%和85.71%，而对照组藏族和汉族胎盘组织分别为97.14%和94.29%，ICP患者胎盘组织VEGF表达强度明显低于对照组；观察组内藏族胎盘组织VEGF表达强度低于汉族，而对照组内藏族和汉族差异无统计学意义，这表明藏族ICP患者VEGF表达水平显著低于汉族患者，患者胎盘、毛细血管功能损伤更为严重，胎儿缺血、缺氧率更高。我们分析ICP患者妊娠结局发现，藏族ICP患者早产、新生儿窒息、羊水污染例数明显多于汉族ICP患者组，这也佐证了上述结论。

综上所述，青海高原地区藏族ICP患者胎盘组织中HIF-1α表达水平明显高于汉族患者，而VEGF表达水平明显低于汉族患者；且藏族ICP患者的早产、羊水污染以及新生儿窒息发生率明显高于汉族患者，提示HIF-1α、VEGF表达水平可作为ICP诊断及预后判定的重要参数。

【参考文献】

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