补肾中药干预雷公藤多苷对原代培养卵巢颗粒细胞影响的实验研究

补肾中药干预雷公藤多苷对原代培养卵巢颗粒细胞影响的实验研究

黄芳1白玉华2王艳丽3丁樱4(通讯作者)

黄芳1白玉华2王艳丽3丁樱4(通讯作者)

(1郑州人民医院儿科450000;2内蒙古市市国际蒙医医院儿科450000)

(3山东省青岛市中西医结合医院泌尿内科450000;4河南中医学院第一附属医院儿科医院450000）

【摘要】目的：研究补肾中药干预雷公藤多苷(GTW)对原代培养大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法：取3龄SD雌性幼鼠,采用血清药理学的方法，采用SP法检测其作用24h时对大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2蛋白表达。结果：SP法检测Bcl-2蛋白表达结果显示，GTW组Bcl-2表达测值明显少于空白组，统计学分析有极显著性差异（P＜0.01）,提示雷公藤多苷组抑制Bcl-2表达。黄酮组、六味组Bcl-2表达与雷公藤多苷组相比均有极显著性差异（P＜0.01），且黄酮组表达较六味组有所增强，两组间统计学分析无显著性差异（P＞0.05）。结论：雷公藤多苷对体外培养的卵巢颗粒细胞具有一定的影响。表现在促进细胞凋亡。菟丝子黄酮和六味地黄丸能有效的延缓了颗粒细胞的凋亡。

【关键词】大鼠颗粒细胞Bcl-2雷公藤多苷六味地黄丸菟丝子黄酮

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）46-0088-02

雷公藤多苷有显著的抗炎、镇痛、免疫抑制等作用。本实验探讨雷公藤多苷对雌性生殖毒性的机制及补肾中药的减毒作用机理，为临床安全有效的应用雷公藤多苷提供科学依据。

1材料与方法

1.1实验动物：3周龄SD雌性幼鼠34只，体重体重50±10g左右，许可证号：SCXK（豫）2005-0001。购于河南省实验动物中心。

1.2实验药物：（1）雷公藤多苷：江苏美通药业有限公司提供有效成分，常温密封保存。（2）六味地黄丸：河南宛西制药有限公司提供，批号：Z41022128，购于河南中医学院第一附属医院。（3）菟丝子黄酮：陕西昂威生物医药科技有限公司提供，规格：10％，生产批号：20070914。

1.3主要试剂及仪器：（1）试剂：凋亡因子Bcl-2一抗：SantaCruzBiotechnoIogy产品，批号：L1708。（2）仪器：全自动高压灭菌器：型号ALPCL-32L，日本ALP公司生产。倒置生物显微镜：型号DMIL，德国莱卡公司产品。

1.4实验方法：

1.4.1大鼠含药血清的制备

取3周龄SD雌性幼鼠24只，按体重随机分为4组。分为空白组（A）、雷公藤多苷组（B）、雷公藤多苷加六味地黄组（C）、雷公藤多苷加菟丝子黄酮组（D），每组6只。

1.4.2SD幼鼠卵巢颗粒细胞的分离培养

1.4.3体外培养SD幼鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2免疫组化检测

采用Imager-propius6.0图像分析系统分析阳性细胞表达强弱，分析各片染色阳性细胞的平均光密度值。

1.4.4统计学分析

所有数据均经SPSS13.0统计软件进行统计学分析。

2结果

2.1卵巢颗粒细胞的形态观察

培养24h内贴壁，48h在倒置显微镜下观察活性良好的卵巢颗粒细胞展开程度不完全相同，扁平多角形中间有圆形细胞核，细胞彼此紧密相连形成单层膜。

2.2含药血清对SD幼鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2表达的影响

表GTW与补肾中药共同作用对体外培养卵巢颗粒细胞Bcl-2表达

（n＝6，x-±S）

注：各组与空白组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；补肾中药组（黄酮组与六味组）与多苷组比较△P＜0.05，△△P＜0.01，黄酮组与六味组比较☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。

由上表可以看出，空白组SD幼鼠的GC存在Bcl-2蛋白的阳性表达定位于GC胞浆，并且与其他组相比表达较强，与其他各实验组相比均有显著性差异（P＜0.05），黄酮组、六味组Bcl-2蛋白表达与雷公藤多苷组相比均有极显著性差异（P＜0.01），且黄酮组表达较六味组有所增强，两组间统计学分析无显著性差异（P＞0.05），使用雷公藤多苷组Bcl-2表达测值明显少于空白组，统计学分析有极显著性差异（P＜0.01）。

讨论

雷公藤为卫矛科植物。雷公藤多苷是从卫茅科植物雷公藤根提取精制而成的一种毒性较大的脂溶性成分混合物，其生理活性是由多种成分(二萜内酯、生物碱、三萜等)协同产生，即保留了雷公藤生药的免疫抑制等作用，又去除了许多毒性成分。

药理研究具有壮阳、调节内分泌、抗衰老、抗氧化等作用。在菟丝子的生殖内分泌作用研究方面，发现它能促进下丘脑-垂体-性腺功能[1]，提高垂体对促性腺激素释放激素的反应性，且其本身具有雌激素样活性。在雌性大鼠和小鼠，菟丝子黄酮提取物表现有雌激素样活性，能增加成年大鼠腺垂体、卵巢和子宫的重量，增强卵巢HCG/LH受体功能。在去卵巢大鼠，能增强腺垂体对LRH的反应性，对心理应激造成的卵巢分泌功能降低有明显改善作用[2]。

本研究的实验结果显示雷公藤多苷对体外培养的可促进体外培养的卵巢颗粒细胞凋亡，表现在下调凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达。菟丝子黄酮和六味地黄丸均能促进Bcl-2蛋白表达，从而对抗GTW所致体外培养的卵巢颗粒细胞凋亡作用。

参考文献

[1]王建红,王敏璋,欧阳栋,等.菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠下丘脑β-EP与腺垂体FSH、LH的影响[J].中药材.2002,25(12):886-888.

[2]王建红,王敏璋,伍庆华.菟丝子黄酮对应激大鼠卵巢内分泌的影响[J].中草药,2002,33(12):1099-1101.