高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中4种皂苷类成分

高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中4种皂苷类成分

代吉英

（榆中县贡井中心卫生院甘肃兰州730118）

【摘要】目的：研究高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中4种皂苷类成分的效果。方法：通过高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中丙二酰黄芪皂苷Ⅰ黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪甲苷的相对校正因子，分析结果。结果：黄芪药材中黄芪甲苷含量最低，部分甚至无法检测到，丙二酰黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅰ含量较高。结论：通过高效液相-蒸发光散射检测器能够对黄芪中4种皂苷类成分进行准确测定。

【关键词】高效液相-蒸发光散射检测器；黄芪；皂苷成分；测定

【中图分类号】R285【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）08-0323-02

选择黄芪甲苷作为指标成分是测定黄芪质量的重要方法，不过黄芪中黄芪甲苷的含量极少，但是丙二酰黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅰ的含量偏高[1]。高效液相-蒸发光散射检测器（ELSD）不对化合物的光学性质存在以来，能够良好响应非挥发组分，所以在多种中药成分的质量控制中应用较广[2]。本研究具体分析高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中4种皂苷类成分的效果。

1.材料及方法

1.1仪器及药剂

仪器有Agilent1100高效液相色谱仪、色谱工作站、电子分析天平、AgilentLC-TOFMS系统。药剂有实验室自制的丙二酰黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪甲苷Ⅳ，HPLC(峰面积归一化法)纯度都在98%以上。色谱纯选择乙腈为，Milli-Q超纯水作为水，其余都选择分析纯。

1.2方法

1.2.1制备对照品溶液精密称取丙二酰黄芪皂苷Ⅰ5.165mg、黄芪皂苷Ⅰ5.91mg、黄芪皂苷Ⅱ1.29mg、黄芪甲苷Ⅳ1.14mg，放在5ml量瓶内，通过甲醇进行稀释，达到刻度位置，完成混合对照品溶液的制备，放在4℃温度下保存备用。

1.2.2制备供试品溶液选取1g黄芪干燥粉末放在锥形瓶中，加入50ml甲醇，超声半小时后滤过，回收滤液甲醇到小体积并转移到量瓶（5ml）内，添加适量甲醇定容到刻度位置，摇匀后过0.22μm微孔滤膜，除去初滤液，留取续滤液备用。

2.结果

2.1精密度

选择混合对照品溶液，在24小时内进行6次连续进样，获取的峰面积RSD则是日内精密度，丙二酰黄芪皂苷Ⅰ为1.1%、黄芪皂苷Ⅰ为1.1%、黄芪皂苷Ⅱ为0.7%、黄芪甲苷Ⅳ为1.0%。持续3天，3针/天，获取的峰面积RSD则是日间精密度，上述各项峰面积RSD相应是3.5%、3.0%、4.1%、2.2%。从结果可知仪器具有良好精密度。

2.2稳定性

选择供试品溶液，放0、2、4、8、12、24小时后分别进行进样分析，每次量15μl，对峰面积进行记录，进行RSD%的计算，结果显示丙二酰黄芪皂苷Ⅰ为2.6%、黄芪皂苷Ⅰ为3.2%、黄芪皂苷Ⅱ为3.4%，因为黄芪甲苷Ⅳ较定量限值更低，所以没有测定值。从结果得知供试品溶液在一天内稳定性好。

2.3重复性

选取6份分别1g左右黄芪干燥粉末，依照供试品溶液制备项下方法进行样品的制备，对6份样品中4种皂苷质量分数平均值进行计算，其中丙二酰黄芪皂苷Ⅰ为（0.1337±0.0029)%、黄芪皂苷Ⅰ为（0.0877±0.0025）%、黄芪皂苷Ⅱ为（0.0293±0.0003）%，RSD分别为2.1%、2.8%、1.0%。因为黄芪甲苷Ⅳ较定量限值更低，所以没有测定值。从结果可以得知这一方法具有较好重复性。

2.4含量测定

对5批黄芪药材以及3批黄芪饮片在相应进样15μl后进行3次平行测定，依据外标法进行含量计算，结果见表。

3.讨论

有研究发现化合物ELSD响应因子不是定值，考虑和其检测原理存在联系。

ELSD属于一类通用型检测器，检测信号主要来源于溶质颗粒所有散射光的累加[3]。ELSD的响应受多方面的影响，比如溶质浓度和雾化器气压的大小均会对溶

质颗粒的大小形成影响，所以会对ELSD的响应形成影响[4]。因为颗粒尺寸不平均，具有一定的分布特点，所以信号和被测定物质的质量关系式应该为A=amx，ELSD散射光强度与光源波长、溶质性质、颗粒数目、检测方向、颗粒大小等的关系非常复杂，虽然米氏散射、瑞利散射理论可近似用于能够接近定量描述ELSD检测时散射光的强度，不过由于其理论缺乏足够完善性，往后还应该不断深入研究系统的检测机制[5]。黄芪的皂苷类成分之间出现转化的可能性大，在不了解具体转化率的基础上，开展多成分含量测定可以更为全面、更为合理地将药材质量反映出来。

综上所述，高效液相-蒸发光散射检测器测定黄芪中4种皂苷类成分的准确性高，不过无法通过“一测多评法”进行同时定量，因此往后还应该继续加强黄芪中皂苷类成分测定的研究，探讨更多可以用于评价的指标以及方法。

【参考文献】

[1]高攀峰,胡明勋,曹爱华.UPLC法同时测定甘肃产蒙古黄芪皂苷类成分的含量[J].中国药房,2015,522(12):1708-1710.

[2]韩旭阳,曾祖平,彭冰,等.UPLC/Q-TOF-MS方法测定黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量并研究水解对黄芪皂苷类成分的影响[J].世界中医药,2016,11(3):523-528.

[3]丁菲菲,邓雁如,张晓静,等.HPLC-ELSD法同时测定黄芪及金芪降糖片中5种皂苷类成分的含量[J].中药材,2015,38(1):156-159.

[4]陆铖,周盛会,李炜,等.HPLC-DAD同时测定黄芪生脉饮中4种成分含量[J].中国中医药信息杂志,2015,22(7):96-99.

[5]付娟,张海弢,杨素德,等.HPLC法同时测定芪白平肺颗粒中4种皂苷类成分的含量[J].中国药房,2015,26(33):4698-4700.