支气管镜灌洗联合基因芯片检测诊断耐多药肺结核的临床研究

支气管镜灌洗联合基因芯片检测诊断耐多药肺结核的临床研究

王俊玲1周连坤2张文静1

王俊玲1周连坤2张文静1

(1山东省滨州市结核病防治院山东滨州251700）

（2山东省济南市历下区人民医院山东济南250014)

【摘要】目的：为验证经支气管镜灌洗联合基因芯片检测耐多药肺结核在结核病临床工作中可行性。方法：对94例复治肺结核患者随机分为2组,47例经支气管镜灌洗联合基因芯片检测耐利福平、异烟肼菌株，与传统罗氏培养药敏试验结果对照。结果：两种方法检测利福平一致率92.1%、异烟肼一致率90.7%，均无统计学差异。基因芯片检测需要时间6h左右，传统培养和药敏需6周左右结论：在肺结核临床工作中经支气管镜灌洗联合基因芯片检测耐多药肺结核所需时间短，标本质量高，其准确性与传统培养和药敏试验接近，是发现耐多药肺结核患者快速有效的可行性措施。

【关键词】支气管镜;灌洗;结核分支杆菌;基因芯片;利福平;异烟肼

【中图分类号】R44【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）15-0113-01

耐多药结核病具有传染性强、治疗时间长、治疗费用高和治愈率低等特点，其病死率明显高于非耐药菌引起的结核病［1］。早期快速诊断耐药结核病并针对耐药结核病出现原因采取有效措施，从源头开始减少耐药结核病的出现变得尤为重要；近年来，随着结核内镜介入治疗的快速发展，通过支气管灌洗更易于取得有意义的标本，联合耐药基因芯片快速检测更有益于耐药肺结核的早期诊断，为耐药肺结核临床合理用药争取时间。

1.资料与方法

1.1研究对象

2014年1月－2014年9月我们两院复治肺结核患者94例。随机分为2组,观察组47例,对照组47例,年龄均在17岁至60岁之间,无统计学差异。

1.2实验方法

观察组经支气管镜介入，病灶段局部行生理盐水20ml灌洗，留取灌洗液作标本。利用晶芯固结核分枝杆菌耐药检测试剂盒和相关仪器通过核酸提取、PCR扩增、芯片杂交与清洗和芯片扫描，分别对结核分枝杆菌的INH和RFP耐药相关基因KatG315、inhA-15和rpoB常见突变位点进行检测和药敏判断；通过抽提结核分枝杆菌基因组DNA，采用PCR扩增KatG和rpoB基因片段，核酸电泳鉴定后进行纯化和测序；将基因芯片检测的耐药情况与传统药敏试验结果的一致性进行分析，并将基因芯片法检测的位点突变情况与DNA测序结果进行比较分析。对照组留痰给予传统罗氏培养加药敏检测。

2.结果

94例复治肺结核支气管灌洗液与痰标本中，基因芯片检测与传统药敏检测RFP耐药率(8/47、7/47)、INH耐药率(7/47、6/47)经卡方检验均无显著差异(P＞0.05)。其中灌洗液基因芯片检测未检出2例，对照组罗氏培养无结核菌生长12例，2组有显著差异(P＜0.05)。本研究对47例复治肺结核经支气管镜灌洗液标本直接应用基因芯片方法检测与利福平相关的rpoB基因和与异烟肼相关的hatG和inhA基因变异情况，结果与传统药敏方法相比，二者对RFP检测结果总符合率为92.1%;对INH检测结果的总符合率为90.7%。基因芯片技术快速检测耐多药肺结核与传统细菌培养药敏试验相比，耐RFP、INH灵敏性分别为91.8%、81.7%,耐RFP、INH特异性分别为98%、93.3%，耐多药检测灵敏性81%。

3.结论

耐多药肺结核确诊之前，由于没有应用有效的药物治疗，患者症状明显，传染性强，不但传染了其他人导致新的耐多药感染，而且，用现有的初、复治化疗方案治疗可能会进一步扩大耐药谱，对患者和社会人群的健康均构成严重威胁。传统的耐多药肺结核诊断方法是对患者的痰标本进行细菌培养和药敏试验，一般需要约6周至2月时间得到结果，不能解决耐多药肺结核患者的早期诊断问题，使患者有效治疗时间推迟，传染时间延长，传染他人仍然是耐多药者。一些患者由于治疗不及时导致治愈率下降，甚至确诊时已经死亡。研究、探索耐多药肺结核快速诊断方法，是当前结核病防治工作中急需解决的问题。本研究对47例复治肺结核经支气管镜灌洗液标本直接应用基因芯片方法检测与利福平相关的rpoB基因和与异烟肼相关的hatG和inhA基因变异情况，结果与传统药敏方法相比，二者对RFP检测结果总符合率为92,1%;对INH检测结果的总符合率为90.7%。基因芯片技术快速检测耐多药肺结核与传统细菌培养药敏试验相比，耐RFP、INH灵敏性分别为91.8%、81.7%，略低于桂晓红等报道[2]，可能与方法不同和直接用痰标本检测有关。耐RFP、INH特异性分别为98%、93.3%，耐多药检测灵敏性81%。提示基因芯片技术检测耐多药肺结核特异性较高，其准确性与传统培养和药敏试验接近，时间缩短到6h可以得到耐多药肺结核诊断结果，显著缩短耐多药肺结核待诊时间，为早期治疗和预防传染提供了诊断依据。经支气管镜灌洗更有利于获得有意义标本，联合基因芯片检测建立对耐药肺结核的早期与快速诊断，对耐多药肺结核的防治具有重要意义。

【参考文献】

[1]孙强，闫赞，边学峰，等．耐多药肺结核患者医疗费用及经济负担分析[J]．中国卫生经济，2011，30(1):33．

[2]桂晓红，徐鹏，赵明．耐多药结核病快速诊断试剂盒检测耐药结核分枝杆菌的评价[J]．中华结核和呼吸杂志，2010，33(1):43-45．