新疆地区学龄儿童肥胖症与ob基因及瘦素关系的研究

新疆地区学龄儿童肥胖症与ob基因及瘦素关系的研究

王晓英1徐佩茹2

王晓英1徐佩茹2

(1新疆维吾尔自治区人民医院830001；2新疆医科大学第一附属医院830054)

【摘要】目的了解新疆地区学龄儿童Ob基因型的分布特点、瘦素水平及其与肥胖之间的关系。方法对291名6-13岁学龄儿童进行基因多态性检测,并抽血检测瘦素水平。结果(1)学龄儿童瘦素水平肥胖者高于非肥胖者，提示瘦素是儿童肥胖的重要影响因素之一。(2)学龄儿童Ob基因存在基因多态性，肥胖组AA型及CC型明显高于非肥胖组，而肥胖组AC型明显低于非肥胖组，说明肥胖的发生与ob基因多态性有关。

【关键词】ob基因瘦素基因多态性学龄儿童

【中图分类号】R723.14【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）35-0069-02

儿童肥胖症是21世纪以来严重的健康和社会问题，肥胖儿童是日后发生心血管疾病和糖尿病等疾病的高危人群[1]。肥胖的形成是由多种基因共同作用的结果，Ob基因是肥胖的候选基因之一，其表达产物瘦素参与能量代谢，在肥胖的形成中起重要作用。新疆地区儿童肥胖发生率较高为5.66%[2]。本研究通过对新疆地区291例学龄儿童瘦素基因进行研究,了解新疆地区学龄儿童瘦素基因C－2549A基因型分布，同时检测血清瘦素，探讨儿童肥胖与ob基因及瘦素之间的关系。

1对象和方法

1.1在乌鲁木齐周边地区学校进行健康普查,排除其他疾病后,选出6～13岁学龄儿童291名,肥胖儿者143人，非肥胖者148例。

1.2体格测量由专业人员用校正的身高体重计测量身高与体重，测量体重仅穿内裤。身高以cm表示,体重以kg表示，精确至0.1cm。计算体质指数BMI=体重(kg)/身高2(m2)。

1.3血清的采集和制备:早8:00～9:00取晨起空腹静脉血2ml,静置后离心15min,制备血清，血清样品贮于-20℃备用。

1.4DNA的提取取静脉血用EDTAK2抗凝,淋巴细胞分离液分离白细胞后,酚-氯仿法抽提DNA。

1.5基因多态性检测。

1.5.1PCR由上海生物工程公司合成引物，上游引物5′－TTTCCTGAATTTTCCCGTGAG－3′,下游引物5′－AAAGCAAAGACAGGCATAAAAA－3′。在试管中加入引物1.5μl（75pmol）,10倍扩增反应液2.5μl，MgCL21.5μl，dNTP0.5μl，DNA模板3μl，Taq酶0.25μl,再加入双蒸水14.25μl。置入PCR仪进行PCR循环。循环条件为变性94℃×45s,复性55℃×45s,延伸72℃×60s,共35次循环,循环之前预变性94℃×180s,循环之后最后延伸72℃×300s。

1.5.2RFLP取PCR扩增产物5μl加入6×上样缓冲液1μl,在3%琼脂糖凝胶上点样,40伏电压下电泳20min。在紫外灯下观察结果，如有目标带则进一步进行下述的酶切反应。

取扩增产物10μl加入Cfo1μl,置恒温水浴箱37℃保温3h,取酶切反应液约7μl做琼脂糖凝胶电泳,根据条带判断基因型。

1.5.3多态性判断通过酶切产物电泳后条带数目及片段大小分型。酶切产物电泳后显示有181bp和61bp两条带，为AA型；酶切产物电泳后为242bp一条带，为CC基因型；酶切产物电泳后为242bp、181bp和61bp3条带，为AC基因型。

1.6瘦素浓度的测定:采用北京北方生物技术有限公司生产的瘦素放免试剂盒。批内变异系数在3.4%～8.3%,批间变异系数在3.6%～6.2%。测试仪器为中佳GC-2016γ放射免疫计数器。

2统计学处理

用SPSS11.5统计软件进行统计分析。两组间均数比较经正态分布检验及方差齐性检验后,采用独立样本t检验,数据以x-±s表示。用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,分组分析用t检验。检验水准α=0.05(双侧),P<0.05,差异有统计学意义。

3结果

3.1研究对象瘦素水平比较291例学龄儿童肥胖组瘦素值(4.32±1.68)μg/L，明显高于非肥胖组瘦素值(2.44±1.2)μg/L，差异有统计学意义（P=0.00），见表1。

表1肥胖和非肥胖组瘦素水平比较

3.2ob基因多态性分布291例学龄儿童中三种基因型AA型占5.84%,AC型占54.29%,CC型占39.86%。A等位基因频率为33.16%,C等位基因频率为66.83%。Ob基因的三种基因型在肥胖和非肥胖组中有差异，差异有统计学意义（χ2=15.29，P=0.00）。（见表2）

表2肥胖组与非肥胖组ob基因不同基因型及等位基因频率

4讨论

人类ob基因位于染色体7q31.3，瘦素为ob基因的表达产物，它是调节体重的主要激素之一，作用于下丘脑，可通过控制食物摄入和调节能量代谢、增加能量消耗而控制体重增加。

本研究显示新疆地区肥胖儿童瘦素水平明显高于非肥胖儿童，提示瘦素水平与体脂关系密切，是影响肥胖发生的因素之一[3]。由于外周血循环瘦素异常增高可导致肥胖，瘦素水平过高可能存在瘦素抵抗，而不能发挥调节能量代谢的作用，又可进一步加重肥胖[4，5]。

Mamas[6]等研究发现,在瘦素基因编码区上2549位存在C→A多态性,此多态性与白种人瘦素水平有关。本研究结果发现,新疆地区学龄儿童存在瘦素基因C2549A多态性,A等位基因频率为33.16%,C等位基因频率为66.83%。与国外研究结果略有不同,可能与研究人群种族不同有关。肥胖儿童AA型及CC型明显高于非肥胖儿童，而肥胖儿童AC型明显低于非肥胖儿童，A等位基因及C等位基因在肥胖者及非肥胖者中无明显差异，提示肥胖的发生与ob基因多态性有关。

综上所述,本研究结果显示:学龄儿童瘦素水平肥胖者高于非肥胖者，提示瘦素是儿童肥胖的重要影响因素之一。学龄儿童Ob基因存在基因多态性，说明肥胖的发生ob基因多态性有关。

参考文献

[1]WeissR，DziuraJ，etal.Oesityandthemetabolicsyndromeinchildrenandadolescents[J].NEnglJMed，2004,350（23）：2362-2374.

[2]徐佩茹.新疆地区不同民族学龄儿童肥胖患病率及其相关因素分析[J].中华现代医学杂志，2003,3（1）：2.

[3]GmezR，LagoF，etal.Novelfactorsastherapeutictargetstotreatdiaetes.Focusonleptinandghrelin[J].ExpertOpinTherTargets，2009,13（5）：583-591.

[4]马红，杨香玖.血浆瘦素与体重指数和脂肪分布的关系[J].临床内科杂志2006,23（3）：173-174.

[5]PilcavaRUlcovaJ，etal.Leptinlevelsinobesechildren：effectsofgender，weightreductionandandrogens[J].PhysiolRes,2003,52：53-60.

[6]MamasO,BetoulleD,R,etal.Novelpolymorphismsinthe5′regionoftheLEPgene[J].Diabetes,1998,47:487.