气相色谱-串联质谱法测定动物组织中五氯酚杜鹏程

气相色谱-串联质谱法测定动物组织中五氯酚杜鹏程

杜鹏程

杜鹏程

(河南省开封市疾病预防控制中心475000)

摘要:应用气相色谱-串联质谱法（gaschromatography-masssepetrometry,GC-MS）对动物组织中五氯酚（PCP）进行分析测定。将其粉碎拌匀，用酸化丙酮浸提萃取。采用气相色谱-串联质谱对提取到的经纯化后五氯酚进行测定。该方法线性范围为0.20～31.00ng/mL，线性相关系数为0.9997，定量下限为0.10μg/kg，加标回收率为88.73%～109.97%，相对标准偏差为6.08%～9.42%。

关键词:气相色谱；串联质谱法；动物组织；五氯酚

五氯酚(PCP)曾在世界范围内大量使用，广泛用作防腐剂、抗菌剂、除草剂、杀虫剂等，而我国是世界上最大的PCP生产和消费国[1]。PCP性能稳定，在生物体内富集率高。PCP能抑制生物代谢过程中氧化磷酸化作用，导致动物内脏和神经系统的损伤，甚至能在人体中产生生物蓄积作用而致癌[2-3]。正因为PCP的诱突变性和广谱毒性，各国纷纷立法对其进行严格限制，并将其列入环境优先监测污染物黑名单。PCP最终通过各种途径进入到食草动物的身体中，造成了世界范围内的食物污染问题。PCP虽然可在自然光条件下分解或被生物降解，但大部分PCP还是会存在于各种沉积物中。动物组织对PCP具有明显的富集作用，吸附在动物组织中的PCP降解十分缓慢。在PCP污染严重地区的动物体中，PCP积累迅速，这些动物体内的PCP含量的高低直接影响在其组织PCP的浓度上[4-6]。为了了解日常食用动物组织中PCP的含量，本研究对日常食用动物（牛、羊、猪、鸡、鸭）肝脏与肾脏组织的PCP水平应用气相色谱-串联质谱联合检测，希望为此类研究提供参考与借鉴。

1资料与方法

1.1仪器与试剂

安捷伦7890A-5975C气质联用仪，PCP标准品(纯度为99．0%，德国Augs-bure公司)。

正己烷、丙酮、乙酸酐、硫酸、吡啶、四硼酸钠、环已烷、碳酸钾均为分析纯（上海生工生物工程有限公司）。PCP标准溶液:1g/L；硫酸溶液:6mol/L；碳酸钾溶液:0.2mol/L；

1.2标准溶液的配制

称取适量PCP标准品，用甲醇溶解，配制成浓度为1g/mL的标准储备液，使用时用甲醇稀释至所需浓度。

1.3样品前处理

所有动物组织测试前放入冷冻干燥机中冷冻干燥，然后转移到研钵中研磨粉碎。称取10g样品于150mL磨口锥形瓶中，加入20mL硫酸溶液进行酸化，剧烈振荡5min。加入50mL萃取溶剂，常温下超声萃取40min。将有机相收集于250mL磨口锥形瓶中。用20mL溶剂进行第二次超声萃取，合并有机相。在有机相中加入50mL碳酸钾溶液，剧烈振荡15min。转移到250mL分液漏斗中，静置分层后，将下层水相转移到150mL磨口锥形瓶中，加入1mL乙酸酐，剧烈振荡5min，再加入10mL正己烷，剧烈振荡10min，转移到125mL分液漏斗中，静置分层后弃去下层水相。上层有机相每次用20mL四硼酸钠溶液洗涤，共洗涤三次。有机相用0.2μm滤膜过滤，供测试用。PCP标准溶液用乙酸酐进行衍生化处理后，再进行气相色谱-串联质谱分析。

1.4分析条件

1.4.1色谱条件

安捷伦HP－5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度:260℃；传输线温度:280℃；进样方式:不分流进样；进样量:1.0μL；载气:氦气(纯度＞99.999%)，流速为1.2mL/min；溶剂延迟:4min；程序升温:初温为60℃，保持1min，以20℃/min升至240℃，保持5min。

1.4.2质谱条件

电离方式:电子轰击离子化(EI)；电离能量:70eV；测定方式:多反应监测(MRM)模式；离子源温度:230℃；四极杆温度:150℃；氮气流量:1.5mL/min，氦气流量:2.25mL/min；MRM条件见表1。

3结论

对几种选定动物组织中五氯酚进行气相色谱/串联质谱分析，该方法线性范围为0.20～31.00ng/mL，线性相关系数为0.9997，定量下限为0.10μg/kg，加标回收率为88.73%～109.97%，相对标准偏差为6.08%～9.42%。在本研究中，肾脏组织中PCP的含量显著高于肝脏组织（P＜0.05），提示肝脏可能只是对PCP进行加工，而部分PCP可能在肾脏富集；实验动物肝脏中PCP的含量不高，但是牛羊肝肾组织PCP显著高于其他三种动物（P＜0.05），提示牛羊体内的PCP比较易聚集，可能与自身组织结构或独特生理反应，也可能是与牛羊的食物来源有关，另外在本研究中，鸭体内组织PCP含量相对于同种属的鸡显著偏高，可能与地表水源污染有关，值得引起重视；作为食用量较大的肉类提供者-猪，在本研究者肝肾PCP检测水平较其他动物偏低，可能与现代化的养殖方式有关，与PCP污染源接触几率小。综上，牛、羊、猪、鸡、鸭的肾脏与肝脏中PCP含量小，但是牛羊与鸭中含量较高，可能与农业中含PCP农药的滥用有关，值得引起重视，以确保此类食品的安全。

参考文献

[1]杨淑贞,韩晓冬,陈伟.五氯酚对生物体的毒性研究进展[J].环境与健康杂志,2006,22(5):396-398.

[2]常浩.五氯酚的内分泌干扰作用研究进展[J].环境与健康杂志,2002,19(3):279-281.

[3]周丽新,陈晓红,金米聪.五氯酚对人体的毒性及防治研究进展[J].卫生研究,2014,43(002):338-342.

[4]YadidI,RudolphJ,HlouchovaK,etal.Sequestrationofahighlyreactiveintermediateinanevolvingpathwayfordegradationofpentachlorophenol[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2013,110(24):E2182-E2190.

[5]Pentachlorophenol:chemistry,pharmacology,andenvironmentaltoxicology[M].SpringerScience&BusinessMedia,2013.

[6]王以燕,袁善奎,李富根,等.五氯酚钠的境内外管理概况[J].农药,2014,5:030

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