吡咯二硫氨基甲酸酯对幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

吡咯二硫氨基甲酸酯对幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

严亮亮陈良万

严亮亮陈良万(福建医科大学附属协和医院心外科350001)

【中图分类号】R542.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）14-0161-02

【摘要】目的本实验通过建立幼兔离体心脏灌注模型，研究吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）对幼兔心肌缺血再灌注损伤的影响。方法通过Langendorff离体心脏灌流系统建立幼兔离体心脏灌注模型。离体心脏复跳60min后，取左心室组织测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果缺血再灌注后，实验组MDA值低于对照组，其差别有统计学意义（p<0.05），实验组SOD值高于对照组，其差别有统计学意义（p<0.05）。结论PDTC可减少幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤后氧自由基的产生，减轻幼兔心肌缺血再灌注损伤。

【关键词】PDTC幼兔缺血再灌注损伤氧自由基

1材料与方法

1.1实验动物：健康新西兰白兔（3-4周龄）16只，体重400±30g，清洁级，雌雄不拘。

1.2实验处理分组：新西兰白兔16只随机分成2组。实验组A组：Stthomas+PDTC组n=8；对照组B组：Stthomas组n=8。

1.3离体幼兔心脏灌注模型建立：幼兔腹腔内注射戊巴比妥钠（50mg/kg）麻醉，肝素钠（500U/㎏）耳缘静脉注射肝素化，开胸取心，切下心脏，立即置入4℃的KH液中，液面下行主动脉插管，同时切下肺动脉，结扎肺静脉，接上Langendorff灌注系统，37℃冲氧KH液以55mmHg压力灌注稳定15min，其间插入左房灌注管和左室测压管；关闭主动脉灌注，开放左房灌注及主动脉引流，转入Neely左心做功模型；稳定15min后关闭左房灌注及主动脉引流，主动脉根部灌注4℃ST.Thomas.II心脏停搏液（15ml/kg，2min灌完），置入15℃林格氏液中保温，停搏120min，其间每30min重复心脏停搏液灌注一次（10ml/kg）；复温至37℃，开放Langendorff灌注管灌注15min，再转入Neely左心做功模型60min。其中实验组于取兔心前10min静脉注射PDTC（100mg/kg），对照组注射等量生理盐水。

1.4观察指标：自由基损伤指标的测定。离体心脏复跳60min后，取左心室组织测定MDA及SOD含量。(操作步骤严格按试剂盒说明书操作)。

2实验结果

MDA及SOD的测定结果：见表1。

表1两组心脏心肌组织MDA、SOD的方差分析结果（x-±s)

组别例数MDASOD

A组82.81±0.43102.36±2.08

B组83.68±0.5368.46±3.01

p<0.05<0.05

表1示A组MDA值低于B组，两组差异有统计学意义(p<0.05)。A组SOD值高于B组，两组差异有统计学意义(p<0.05)。

3讨论

一般把胎儿、新生儿、豚鼠龄<2d、羊龄<6d、猪龄<15d、新西兰兔龄<4周、犬龄<8周的心肌称为未成熟心肌[1]。未成熟心肌在其细胞结构、生物功能、及能量代谢等方面明显迥异于成熟心肌。故未成熟心肌缺血再灌注损伤的表现及对保护方法的反应也明显不同于成熟心肌。近年来通过对缺血再灌注损伤的深入研究发现，缺血再灌注的病理生理过程中，各种诱导因素、炎症介质、效应细胞、效应因子构成复杂的网络（其中包括氧自由基），核转录因子-κB（NF-κB）则是这个网络的“焦点”。PDTC是具有抗氧化作用的稳定化合物，被广泛用于抑制NF-κB活性，但其抑制NF-κB激活的机制尚未阐明。

正常生物体内有一定的自由基水平，同时存在内原性氧自由基清除系统，氧自由基可以被内源性自由基清除系统所清除，使机体的氧化与抗氧化处于一种动态的平衡之中细胞免遭其毒性损伤[2]。然而当组织细胞缺血、缺氧时，氧自由基清除系统功能降低，生成系统活性增强，一旦恢复组织血液供应和氧供，氧自由基便大量产生与急剧“堆积”，以不同方式造成细胞急性或慢性损伤[3]。由于心肌细胞缺乏某些抗氧化酶，所以心脏对于氧自由基的损伤格外敏感。在心肌缺血再灌注损伤过程中，产生大量氧自由基，使缺血心肌产生再灌注损伤:(1)大量的氧自由基抑制线粒体的氧化磷酸化，能量合成不足；(2)灭活N0，使中性粒细胞粘附于血管壁后活化，刺激内皮释放血小板活化因子；(3)诱导血浆中产生中性粒细胞趋化物，进而吸引更多的中性粒细胞,合成组织因子并暴露于内皮细胞，微血栓形成。聚集的中性粒细胞加上微血栓的堵塞，造成无复流现象加重再灌注损伤。(4)氧自由基可以抑制机体氧化防御系统，使体内抗氧化酶减少，包括SOD、Catalase等[4](5)缺血期间产生的氧自由基可以抑制机体表达氧应激蛋白、热休克蛋白(HSP)，并抑制机体SODmRNA的表达[5],使SOD合成减少。(6)氧自由基具有极强的化学特性，通过与细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，破坏细胞的结构和功能，同时形成脂质过氧化物产物MDA。MDA上升能引起蛋白质交联变性、DNA断裂，破坏组织结构[6]。由于氧自由基的半衰期极短，实验中常将脂质过氧化的终产物MDA作为其标志物，MDA含量的高低反映了自由基的产量，也即心肌缺血再灌注损伤的程度。SOD是“抗氧化防御体系”中最重要的一种保护性酶，其活性升高有助于清除和抑制自由基及衍生物对心肌的侵害，是机体清除氧自由基的酶。SOD活性的降低和MDA的增加，表明氧自由基的大量生长，也间接反映了细胞损伤的程度[7]。本实验结果表明，幼兔心肌缺血再灌注损伤后诱发氧自由增加，导致幼兔心肌细胞损伤，加入PDTC后减少氧自由基的生成，减轻细胞损伤，发挥心肌保护作用。

4结语

PDTC可减少幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤后氧自由基的产生，减轻幼兔心肌缺血再灌注损伤。

参考文献

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[2]周四芳,吴星恒.自由基与心肌缺血再灌注损伤.实验临床医学.2005,6(7):155-162．

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