安乃近片有关物质中样品浓度对保留时间的影响

安乃近片有关物质中样品浓度对保留时间的影响

黄雷闵祺单玉华

黄雷1闵祺1单玉华2

(1辽宁省锦州市食品药品检验所辽宁锦州121001)

(3辽宁省锦州市铁丰大药房辽宁锦州121001)

【摘要】目的采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC法）测定安乃近片，研究样品浓度对安乃近片保留时间的影响。方法采用WatersSunFiretm-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0）—甲醇（75：25）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min。结果安乃近片浓度为5.4750mg/ml时平均保留时间为16.870min；浓度为0.0574mg/ml时平均保留时间为18.438min，平均差为1.568min，经统计学处理，有显著性差异（P＜0.01）。结论实验结果表明，安乃近片浓度相差100倍时，保留时间相差8.50%，即：安乃近片浓度达到一定高度时，保留时间会随着浓度的增加而缩短。

【关键词】安乃近片高效液相色谱法保留时间

【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）03-0352-01

保留时间在液相色谱分析和气相色谱分析中对物质的鉴别具有十分重要的意义。理论上，同一种物质在相同的色谱系统中的保留时间是一定的，可是实际工作中并非完全如此，它们会有波动，会有漂移。实验发现样品浓度的变化，色谱峰的保留时间有所差别，这种现象与保留时间的波动和漂移有所不同。

1仪器与试药

1.1仪器

WatersSe2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司），Waters2498检测器（美国Waters公司），WatersSunFiretm-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)。

1.2试药

安乃近片（批号：20120401，锦州九洋药业有限责任公司），4-甲氨基安替比林对照品（批号：101115-201101，中国食品药品检定研究院）

2方法与结果

2.1检验标准

《中国药典》[1]2010年版二部安乃近片质量标准

2.2色谱条件

安乃近片流动相为磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0）—甲醇（75：25），检测波长254nm，流速1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl，色谱柱为WatersSunFiretm-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)。

2.3供试品溶液制备

取本品的细粉适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含安乃近5mg的溶液，作为供试品溶液（临用新制）。

2.4对照溶液制备

精密称取4-甲氨基安替比林对照品5mg，置100ml量瓶中，精密加入供试品溶液1ml，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.5检查方法

精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍。再精密量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至与供试品相同时间。如此重复进样各10次，按供试品和对照两组分别记录各主峰的保留时间，进行统计学处理。

2.6结果

供试组安乃近峰保留时间平均值为16.870min，对照组安乃近峰保留时间平均值为18.438min，平均差为1.568min，剔除漂移因素，实际平均差为1.558min，保留时间相差8.45%，经统计学处理，有显著性差异（P＜0.01）（见图1、2）。

3讨论

保留时间漂移是指保留时间仅沿单方向发生变化。保留时间波动是指保留时间无固定规律的波动。保留时间的漂移主要是由于色谱柱平衡、固定相稳定性、色谱柱污染和老化等因素引起的；本实验在排除以上原因的情况下，发现（进样量）浓度对保留时间产生了较大的影响，当进样量由0.0574mg/ml×10μl提高100倍时，保留时间向前位移1.568min（相对位移8.50%）。在色谱柱保留性能不变的情况下，如果进样量小，则样品分子全部能够得到充分保留，当进样量足够大时，有一部分样品分子便不能得到充分保留而提前流出色谱柱，使保留时间提前（向前位移）。我们在使用对照溶液进行定位鉴别时如果与样品浓度不同就应该考虑保留时间是否存在不一致的问题。

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典二部（2010年版）.化学工业出版社，2010.