郑欣邓凤祥(深圳市人民医院药学部518000)
【摘要】目的研究川芎喷鼻剂对实验动物脑血管方面的药理效应作用。方法观察川芎喷鼻剂对家兔PT(凝血酶原时间)、APTT(部分凝血活酶时间)的影响;对大鼠微循环的影响;采用大鼠MCAO模型观察对大鼠脑内梗死面积的影响。结果川芎喷鼻剂可显著的延长血液的PT和APTT;可显著抑制大鼠肾上腺素引起的微动脉管径缩小,可显著减少大鼠脑梗死面积。结论川芎喷鼻剂具有抗凝、改善微循环和抗脑缺血作用。
【关键词】川芎微循环MCAO模型脑缺血
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)24-0108-02
ThepharmacodynamicseffectofLigusticumChuanxiongnasalspray
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofLigusticumChuanxiongnasalsprayonexperimentalcerebralischemiaanditsmechanism.MethodLigusticumChuanxiongnasalspraywasgiventoanimalsnasally,andthepharmacologiceffectswereobservedonthreeanimalmodels,whichinvolvedrabbitbloodcoagulation,reserpineproducedlow-5-HTmicemigrainemodelandcerebralischemia-reperfusioninrat.ResμltsLigusticumChuanxiongnasalspraycouldsignificantlyprolongtheprothrombintime(PT)andactivatedpartialthromboplastintime(APTT),increasedthediametersofmicroarterioletreatedwithadrenaline,andalsodecreasedtheareaofcerebralinfarction.ConclusionLigusticumChuanxiongnasalsprayhastheeffectonbloodcoagulation,microcirculationandcerebralischemia.
【Keywords】LigusticumChuanxiongmicrocirculationMCAOcerebralischemia
川芎为伞形科植物川芎LigusticumChuanxiong干燥根茎。别名芎穷,具有活血祛瘀;行气开郁的功效[1]。已被现代临床实验和药理实验研究所证实具有广泛的药理活性。现代药理研究证实,川芎、川芎嗪、川芎生物碱等能够提高血小板中cAMP含量,对血栓烷的活性和生物合成有抑制作用,可降低血小板表面活性,抑制血小板聚集,且能使聚集的血小板解聚,从而调节血管活性物质的含量,使其保持平衡[2]。因此川芎可以扩张脑血管,改善脑循环[3]。本研究采用大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(middlecerebralarteryobstruction,MCAO)等模型,观察川芎喷鼻剂对实验动物脑血管方面的药理效应作用,为其临床适应证的确立提供实验依据。
1材料
1.1药品与试剂
川芎喷鼻剂(20mg/ml,批号20110122,单位?);尼莫地平片(20mg/片,批号:20110816,正大青春宝药业有限公司);阿司匹林片(500mg/片,批号:20110715,安徽仁济药业有限公司);PT试剂盒(批号:105061,上海太阳生物技术有限公司);KTPP试剂盒(批号:112038,上海太阳生物技术有限公司);肾上腺素(批号:0120906,杭州民生药业集团有限公司)。
1.2仪器
电热恒温干燥箱,长沙医疗器械厂;AverEzcapture图象分析系统,上海复旦大学;BI2000医学图象系统,四川省成都泰盟科技有限公司。
1.3动物
家兔,雄性,体重(2.0±0.2)kg;SD大鼠,雄性,体重240~280g,湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,合格证号:SCXK(湘)2009-0004。
1.4其它
显微手术器械,专用栓线(直径为0.235mm,北京沙东生物技术有限公司),微型动脉夹等。
1.5数据处理
所有实验数据以x-±s表示,并采用SPSS13.0统计软件进行方差分析及组间检验。
2实验方法与结果
2.1对家兔凝血功能的影响
2.1.1分组及给药
取雄性家兔50只,按随机分成5组,分别为空白对照组(生理盐水滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂低剂量组(滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂中剂量组(滴鼻,50μl/kg)、川芎喷鼻剂高剂量组(滴鼻,100μl/kg)和阿司匹林片组(灌胃,0.025g/kg)组,各组动物每天给药1次,连续给药7天。
2.1.2PT和APTT的测定
末次给药30min后,家兔耳中动脉取血,加入9倍血量的3.8%枸橼酸钠抗凝;3000r?min-1离心10min,取上清液制备贫血小板血浆(PPP)。按试剂盒要求,测定PT和APTT。
表2-1对家兔PT和APTT的影响(x-±s,n=10)
注:与空白对照组比较,*为P<0.05;**为P<0.01。
由表2-1可以看出,与空白组比较,川芎喷鼻剂高剂量(100μl/kg)组和阿司匹林片(0.025g/kg)组有极明显的延长血液的PT和APTT;川芎喷鼻剂中剂量(50μl/kg)组明显的延长血液的PT和APTT。
2.2对大鼠微循环的影响
2.2.1分组及给药
取雄性SD大鼠60只,按随机分成5组,分别为空白对照组(生理盐水滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂低剂量组(滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂中剂量组(滴鼻,50μl/kg)、川芎喷鼻剂高剂量组(滴鼻,100μl/kg)和尼莫地平片组(灌胃,0.28g/kg)组,各组动物每天给药1次,连续给药7天。
2.2.2微动脉管径的测定
末次给药30min后,将动物用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉,按Chambers法[4]制备大鼠肠系膜微循环标本,沿腹白线纵形切开腹壁2~3cm,轻轻拉出回肠部,将肠系膜置于盛有台式液恒温灌流槽上,用AverEzcapture图象分析系统,测定微动脉管径,观察微循环变化,然后对各组滴加0.05ml的1∶25万肾上腺素(Ad),1min后测定上述指标。
表2-2对大鼠微循环的影响(x-±s,n=12)
注:与空白对照组比较,*为P<0.05。
由表2-2可以看出,与空白对照组比较,川芎喷鼻剂高剂量(100μl/kg)组和尼莫地平片(0.28g/kg)组可显著抑制肾上腺素引起的微动脉管径缩小。
2.3对MCAO模型大鼠脑缺血影响
2.3.1MCAO模型的建立
将大鼠用10%水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉,颈正中切口,分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹,颈总动脉分叉处切口,插入栓线,其深度为17~20mm,栓线进入颈内动脉,入颅至大脑前动脉,阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹,扎备线,伤口以碘伏消毒,最后缝合皮肤,手术完毕回笼饲养。假手术组除不插线外,其余步骤同上。其余各组按上述手术方法造模[5,6]。
造模成功的标准:动物手术后有明显手术侧(即左侧)Horner症(左侧眼睑下垂,眼球凹陷)及手术侧(即左侧)偏瘫体症(不能完全伸展左前肢,行走时向左侧倾倒或转圈);TTC染色有一定的白色梗死灶。
2.3.2分组及给药
取雄性SD大鼠72只,按随机分成6组,分别为假手术组(生理盐水滴鼻,25μl/kg)、模型组(生理盐水滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂低剂量组(滴鼻,25μl/kg)、川芎喷鼻剂中剂量组(滴鼻,50μl/kg)、川芎喷鼻剂高剂量组(滴鼻,100μl/kg)和尼莫地平片组(灌胃,0.28g/kg)组。
预先给药7天,每天给药两次。造模前0.5h先给药1次;造模后6h和12h分别进行第2、3次给药。假手术组和模型组动物给予生理盐水,给药时间及体积同喷鼻剂组。
2.3.3脑梗塞面积的测定
造模后24h每组大鼠,快速取全脑,去掉嗅球、小脑和低位脑干,冰冻25分钟。然后均匀切成7片,接着迅速将脑片置1%红四氮唑(TTC)中,避光,37℃温孵20分钟,其间每隔7~8min翻动一次,染色后以4%多聚甲醛固定。染色结果:正常组织呈红色,梗塞组织呈白色。拍照并用BI-2000医学图像分析系统计算脑梗塞面积百分比。
表2-3对MCAO大鼠脑梗死面积的影响(x-±s,n=12)
注:与假手术组比较,##为P<0.01;与模型组比较,*为P<0.05;**为P<0.01。
由表2-3可以看出,假手术组动物未见明显脑梗塞发生,模型组脑缺血再灌注24h后脑组织梗塞程度比较于假手术组显著性增加。川芎喷鼻剂高剂量(100μl/kg)组使脑梗塞面积百分比显著下降;尼莫地平片(0.28g/kg)组给药后,脑梗塞面积百分比极显著下降。
3讨论
血小板聚集、血栓形成是心肌梗死、缺血性卒中、深静脉血栓等许多疾病的基本病理过程,近几十年来发病率逐渐升高,严重地危害着人类的健康。川芎属活血化瘀药,其味辛,辛散善行,有“血中气药”之称,气入血分,使血脉通畅,瘀滞消散,活血兼行气,有良好的活血祛瘀之功。
有文献报道[7]如果凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原正常,即可排除凝血因子缺乏,所以凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原是有效衡量凝血因子缺乏的指标。TT延长多为血浆纤维蛋白原减低或结构异常。PT主要反映外源性凝血是否正常。APTT凝血时间是指离体血液与异物表面接触到血液自然凝固所需要的时间。APTT延长通常是由于Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子的缺乏,它是反映内源凝血系统整个凝血过程的筛选试验[8]。
本研究结果显示川芎喷鼻剂高、中剂量组明显的延长血液的PT和APTT,表明本品显著的抗凝作用。同时,川芎喷鼻剂高剂量组还可显著抑制肾上腺素引起的微动脉管径缩小,亦即表明川芎喷鼻剂有改善微循环障碍的作用趋势。川芎喷鼻剂抗凝和改善微循环的作用也反映出其活血化瘀功效的药理学基础。另外,本研究发现川芎喷鼻剂使大鼠脑梗塞面积百分比明显下降,表明其具有抗脑缺血的作用。综合本研究结果,提示本品对脑缺血的保护作用与其显著的抗凝作用和改善微循环密切相关,也为研制开发新的防治心脑血管疾病的药物奠定理论基础。
参考文献
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[2]谢虞升,王曙东,宋炳生,等.川芎药理研究近况[J].中草药,2000,31(增刊):201-202.
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[8]CHENSP,HANYL,GUOW,etal.StudyontheantithromboticeffectoffibrinolyticproteinsfromScolopendrasubspinipesmutilans[J].ChinPharmacolBull(中国药理学通报),2007,23(8):1088-1092.