新生儿脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β测定及其意义

新生儿脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β测定及其意义

林荣军金蓉胡素娟

林荣军金蓉胡素娟

（青岛大学医学院附属医院儿科山东青岛266003）

【摘要】目的：测定并分析新生儿脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β的含量及其可能的危险因素，探讨脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β含量与6个月内婴儿发生湿疹可能性的关系。方法：用ELISA法测定72例青岛地区足月顺产健康新生儿（男性38例，女性34例）脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β含量，随访并记录家族过敏性疾病史、父母吸烟史、母亲孕期饮食情况、6个月内婴儿发生湿疹情况等。结果：父亲或母亲有过敏性疾病的新生儿脐血IL-13含量明显高于对照组（P<0.01），而TGF-β含量明显低于对照组(P<0.01)。父亲或母亲有过敏性疾病新生儿脐血IL-4、IFN-γ含量与对照组差别无统计学意义。父亲或母亲有吸烟史、母亲孕期回避特殊食物新生儿脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β因子的含量、6个月内发生湿疹的概率与对照组差别没有统计学意义。6个月内发生湿疹组婴儿脐血IL-13含量高于对照组（P<0.01），而TGF-β含量低于对照组（P<0.01），6个月内发生湿疹组婴儿脐血IL-4、IFN-γ含量与对照组差别无统计学意义。结论：父母有过敏性疾病及发生湿疹的新生儿脐血IL-13含量增高，新生儿脐血IL-13、TGF-β含量可能对预测以后湿疹等过敏性疾病的发生有一定临床意义。

【关键词】脐血；过敏；婴儿

【中图分类号】R72【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2010）08-0035-02【Abstract】Objective：TosurveyandanalyzethecontentandthepossibleriskfactorsofIL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-βincordbloodofnewarrivals.Methods:Thecordserumof72full-month,normalborn,healthynewarrivalsinqingdaowereanalyzedusingELISAforthecontentofIL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-βincludingthirtyeightboysandthirtyfourgirls.Theallergicdiseasesofparents,smokinghistoryofparents,thedietofmothersinpregnanceandtheoccurenceofeczemaofinfantswithin6monthswerealsorecorded.Results:ThecontentofIL-13incordseruminthegroupofallergicfamilieswassignificantlyhigherthanthecontrolgroup（P<0.01）whilethecontentofTGF-βincordseruminthegroupofallergicfamilieswassignificantlylowerthanthecontrolgroup（P<0.01）.ThecontentofIL-4andIFN-γincordserumintheallergicfamilieshadnosignificantdifferencewiththecontrolgroup.Thesmokinghistoryofparents,thedietofmothersinpregnancedidn’thaveimpactonthecontentofIL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-βincordserumandtheoccurenceofeczemaofinfantswithin6months.ThecontentofIL-13incordserumintheinfantswitheczemawithinsixmonthswassignificantlyhigherthanthecontrolgroup（P<0.01）whilethecontentofTGF-βincordserumintheinfantswitheczemawithinsixmonthswassignificantlylowerthanthecontrolgroup（P<0.01）.ThecontentofIL-4andIFN-γincordserumintheinfantswitheczemawithinsixmonthshadnosignificantdifferencewiththecontrolgroup.Conclusion:InfantswhohaveeczemawithinsixmonthsorhaveallergicfamilyhisitoryhaveelevatedIL-13levelsandlowTGF-βlevelsincordserumthusthecontentofIL-13andTGF-βincordserumofnewarivalspossiblyhaveclinicalsignificanceinpredictingeczemaandotherallergicdiseases.

【Keywords】cordserum;allergy;infant

目前，变应性疾病的发病率越来越高，对儿童健康的影响日益增大。过敏性疾病的发病率呈增高趋势，根据流行病学统计，2000年青岛地区儿童哮喘的发病率高达2.67%，[1]过敏性疾病越来越引起人们的重视。过敏性疾病的发生有一定的历程，从婴幼儿期的湿疹到儿童期的哮喘再到后来的过敏性鼻炎[2]。如何早期预测过敏性疾病，国内外尚无定论。新生儿脐血因子IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β的含量测定，有可能早期预测过敏性疾病的发生。

1资料与方法

1.1资料:选取2008年11月-2009年1月在青岛大学附属医院东区产科、青岛妇女儿童医院产科足月顺产出生的新生儿72例，其中男性38例，女性34例。剔除标准：母亲患妊娠高血压、糖尿病、先天性心脏病等疾病，双胎妊娠，母亲乙肝表面抗原阳性，羊水污染，出生体重小于2.5kg，出生体重大于4kg，新生儿窒息，新生儿缺氧缺血性脑病，羊水吸入综合征。

1.2方法

1.2.1试剂与仪器:测定试剂采用美国Rd分装人IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-βELISA测定试剂盒（96孔板）测定相关细胞因子含量。测定仪器采用Rainbow酶联免疫酶标测定仪（奥地利Tecan公司）。

1.2.2操作步骤:收集脐血10ml，以3500r/min离心，取上清液置-20℃保存。配置不同浓度的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液，预实验测定标准品OD-450值。将标准品、样品分别加样于96孔板。密封后孵育规定时间，洗板4次，除空白孔外加入生物素化抗体工作液。密封后孵育规定时间，洗板4次，除空白孔外加入酶结合物工作液。密封后孵育规定时间，洗板4次，加入显色剂，避光孵育规定时间，加入终止液混匀后测OD-450值（5分钟内）。EXCEL2007制作标准曲线，将OD-450值转换为浓度。

1.2.3统计学处理:所有数据通过spss17.0软件完成t检验和卡方分析，检验水准以P<0.05为差异有显著性意义。

2结果

2.1性别、吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食、过敏性疾病家族史对脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β的影响。男性、女性，父母有无吸烟史，母亲孕期是否回避特殊饮食并不影响脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β的含量；有过敏性疾病家族史的新生儿，脐血IL-13含量高于对照组（P＜0.01），TGF-β含量低于对照组（P＜0.01），IL-4、IFN-γ含量与对照组差别无统计学意义，见表1。

at=63.4，p<0.01bt=78.4，p<0.01

2.2发生湿疹婴儿与未发生湿疹婴儿脐血IL-4，IL-13，IFN-γ，TGF-β测定值比较。湿疹患儿IL-13含量高于未患湿疹患儿，TGF-β含量低于为患湿疹患儿，IL-4、IFN-γ含量与未患湿疹患儿差别无统计学意义，见表2。

at=40.35,p<0.01bt=13.66

2.3性别、吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食、过敏性疾病家族史对婴幼儿发生湿疹的影响。男性、女性，父母有无吸烟史，母亲孕期是否回避特殊饮食其发生湿疹比例差别无统计学意义；有过敏性疾病家族史的婴儿发生湿疹的比例明显高于无过敏性疾病家族史的婴儿，见表3。

3讨论

随着过敏性疾病的发病率的升高，婴幼儿过敏性疾病的干预越来越引起家庭和社会的关注和重视。婴幼儿过敏性疾病的干预可分为一级预防即消除过敏性疾病发生的高危因素，二级预防即过敏性疾病发生后尽早诊断和治疗，三级预防即将过敏性疾病的发生降低到最低限度[3]。湿疹是婴幼儿期过敏性疾病比较早期的表现，要做到一级预防，就要找出湿疹发生的高危因素。本次试验结果发现，性别、家族有无吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食对婴幼儿发生湿疹的影响并不大，与国外最新报道基本一致。DuToitG,KatzY等对以色列学龄5171名在英国生活的儿童（母亲孕期避免花生暴露），5615名在以色列生活（母亲孕期没有避免花生暴露）的儿童做了比较，发现前者花生过敏发生率1.85%，后者仅为0.17%，结果有统计学意义。排除特应质的影响后，两个国家发生花生过敏的校正危险比是9.8，也就是母亲孕期避免花生暴露的儿童花生过敏发病率是母亲孕期没有避免花生暴露儿童的10倍[4]。2008年AAP也指出目前，仍缺乏证据证明孕期饮食限制对特应性疾病具有重要的预防作用[5]。

胎儿在妊娠22周时已出现针对吸入性和食物过敏原的细胞免疫反应，胎儿的宫内环境对儿童时期免疫反应形成的初始化过程以及与日后的过敏性疾病(支气管哮喘、过敏性鼻炎、湿疹或异位性皮炎、过敏性眼结膜炎等)的发生具有重要影响[6]。IL-4，IL-13作为B细胞生长刺激因子，可以刺激IgE的产生，上调单个核细胞表面MHCII表达，扩增Th2亚群；IFN-γ阻止IL-4，IL-13介导IgE的产生[7]。已经发现哮喘患儿外周血和支气管肺泡灌洗液中的T淋巴细胞会表达IL-4mRNA。哮喘患儿外周血分离的单个核细胞经PHA刺激释放的IL-4的量明显高于正常儿童[8]。而代表Th1的IFN-γ在哮喘患儿中的含量明显低于正常儿童。但从我们的试验发现过敏性疾病家族史婴幼儿脐血中IL-4的含量很低，与对照组的差别不明显，IFN-γ的含量虽然较对照组低，但差别也无统计学意义，与HagendorensMM结果相似[9]。许以平等在脐血中分离单个核细胞经PHA刺激所分泌的IL-4的量很低，与正常组差别无统计学意义，表明脐血中的Th2功能并无想象的亢进[10]，或者在新生儿期可能存在更能反映Th2功能的细胞因子[11]。本试验过敏性疾病家族史的婴幼儿IL-13的含量明显高于对照组，6个月之内发生湿疹的婴幼儿IL-13的含量明显高于对照组。这说明IL-13可能更能代表遗传表型，这可能与脐血中CD4+IL13+淋巴细胞有关[12]，因此IL-13也可能成为预测过敏性疾病发生的新指标。调节性T淋巴细胞(Tr)参与过敏性的发病，Tr有不同的亚群，它们所分泌的IL-10、转化生长因子TGF-β、细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4可使T淋巴细胞对过敏原不发生反应，此即所谓T细胞无能[13]。过敏性家族史的婴幼儿TGF-β含量低于对照组，提示特应质儿童体内的拮抗淋巴细胞应答的能力较正常儿童弱，TGF-β能阻止IL-1基因等的表达，从而抑制Th2反应。脐血细胞因子水平反应的是出生之前环境对新生儿炎性因子和抗炎因子的影响[14]，高IL-13的水平提示新生儿在出生前就被母体的抗原致敏，当出生后接触环境抗原后，因为免疫不耐受，更加容易发生过敏性疾病[15]。

本研究提示,有家族过敏史的新生儿其代表Th2细胞功能水平的细胞因子IL-13产生明显增高,并具过敏症如湿疹的发生倾向。因而对此类新生儿有必要避免变应原刺激,及早采取防治措施,以减少变态反应性疾病的发生。

参考文献

[1]林荣军，王为达，潘玉娟，等.青岛市区0-14岁儿童哮喘流行病学调查[J].青岛大学医学院学报，2002，38（3）：202-205

[2]DelGiudiceMM,RoccoA,CapristoC．Probioticsintheatopicmarch:highlightsandnewinsights[J]．DigLiverDis.2006Dec;38Suppl2:S288-90

[3]ToscaMA,VillaE,RossiGA．Futureperspectivesinthetherapyofasthmainchildren[J]．MinervaPediatr.2008Apr;60(2):235-47

[4]DuToitG,KatzY,SasieniP,etal.Earlyconsumptionofpeanutsininfancyisassociatedwithalowprevalenceofpeanutallergy[J].JAllergyClinImmunol,2008,122(5):984-991

[5]FrankR.Greer,ScottH.Sicherer,A.WesleyBurks,etal.早期营养干预措施对婴幼儿特应性疾病的作用-孕期饮食限制、母乳喂养、辅食添加的时间和使用经水解的配方奶的作用[J].AMERICANACADEMYOFPEDIATRICS，2008，7（3）：456-465

[6]郑珠丽，邵洁，华炳春，等.特应质孕妇风险因子与婴儿过敏性疾病相关性研究[J].临床儿科杂志，2004，10（22）：689-690

[7]RichardE.Behrman,RobertM.Klicgman,HalB.Jenson,尼尔森儿科学[M].17版.北京：北京大学医学出版社，2007：852-859

[8]吴曙粤.变应性疾病产妇的新生儿脐血中免疫调节特点与儿童哮喘[J].广西医学，2007，7（29）：1040-1042

[9]HagendorensMM,VanBeverHP,SchuerweghAJ,etal.DeterminationofT-cellsubpopulationsandintracellularcytokineproduction(interleukin-2,interleukin-4,andinterferon-gamma)bycordbloodT-lymphocytesofneonatesfromatopicandnon-atopicparents[J].PediatrAllergyImmunol.2000Feb;11(1):12-9

[10]王茂，许以平，朱丽君，等.IL-4在支气管哮喘发病中的作用研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2000,2（20）：116-118

[11]NeavilleWA,TislerC,BhattacharyaA,etal.Developmentalcytokineresponseprofilesandtheclinicalandimmunologicexpressionofatopyduringthefirstyearoflife[J].JAllergyClinImmunol.2003Oct;112(4):740-6

[12]SpinozziF,AgeaE,RussanoA,etal.CD4+IL13+Tlymphocytesatbirthandthedevelopmentofwheezingand/orasthmaduringthe1styearoflife[J].IntArchAllergyImmunol.2001Apr;124(4):497-501

[13]许以平，王茂，朱丽君，等.脐带血细胞和白细胞介素-4含量与哮喘遗传表型关系的研究[J].中华医学杂志，2005，22（85）：1547-1550

[14]TadakiH,ArakawaH,SugiyamaM，etal.Associationofcordbloodcytokinelevelswithwheezyinfantsinthefirstyearoflife[J]．PediatrAllergyImmunol.2009May;20(3):227-33

[15]VanderVeldenVH,LaanMP,BaertMR，etal.SelectivedevelopmentofastrongTh2cytokineprofileinhigh-riskchildrenwhodevelopatopy:riskfactorsandregulatoryroleofIFN-gamma,IL-4andIL-10.[J]．ClinExpAllergy.2001Jul;31(7):997-1006