HPLC法测定十一味活血酊中血竭素的含量

HPLC法测定十一味活血酊中血竭素的含量

张洁白娟李成网

张洁白娟李成网（安徽省医学科学研究院安徽合肥230061）

【摘要】目的建立十一味活血酊中血竭素的含量测定方法。方法采用HPLC法，ShimPackODS柱(250×4.6mm，5μm)，乙腈一0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(50：50)为流动相，检测波长440nm。结果血竭素在0.9912～5.9472μg/ml范围内浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9997(n=6)。平均回收率97.81%，RSD0.96%。结论本法简便、灵敏、准确，可用于十一味活血酊的质量控制。

【关键词】HPLC十一味活血酊血竭素

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）23-0329-02

DeterminationofdracorhodininShiyiweihuoxuetincturebyHPLCMethod

ZHANGJie,BAIJuan，LICheng-wang

（AnhuiAcademyofMedicalSciences,Hefei230061,China）

【Abstract】Objective：ToestablishamethodforthedeterminationofdracorhodininShiyiweihuoxuetincture.Methods：HPLCmethodwasusedinthequantitativeanalysisusingaShimPackODS(250×4.6mm，5μm)column.Themobilephasewasacetonitrile—0.05mol/Sodiumdihydrogenphosphatesolution(50：50)anddetectingwavelengthwas440nm.Results：Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.991～5.947μg/mlfordracorhodin(r=0.9997,n=6).Theaveragerecoverywas97.81%andRSDwas0.96%.Conclusion：Thismethodwassimple,sensitive,accurateandavailableforthequalitycontrolofShiyiweihuoxuetincture.

【Keywords】HPLCShiyiweihuoxuetincturedracorhodin

十一味活血酊由血竭、延胡索、红花等十一味药制成，具有活血化瘀、消肿止痛之功，临床用于急性软组织损伤及颈、肩、腰、腿痛等骨关节系统疾病。血竭为方中贵重药，为棕榈科植物麒麟竭果实渗出的树脂经加工制成[1]。血竭具有祛瘀定痛，止血生肌的功效，用于跌扑折损，内伤淤痛，血竭中的主要成分为血竭素，亦是本方的主要活性成分。故选择血竭素作为控制该产品质量的定量指标，通过高效液相色谱法建立其含量测定方法。结果表明：本法简便、灵敏、准确[2-4]。

1、仪器与试药

Waters600型液相色谱仪（美国）、UV996紫外检测器（美国）、UV-1750紫外分光光度计（日本岛津）、XP56百万分之一电子天平(德国METTLERTOLEDO)；血竭素高氯酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号0811-200203），十一味活血酊（批号：121207、121210、121216；规格每瓶50mL）和阴性制剂均为安徽中医学院第二附属医院提供，水为重蒸馏水，乙腈、甲醇均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2、实验方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：ShimPackODS柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈一0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(50：50)；检测波长：440nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃。进样量：20μl。

2.2对照品溶液的制备取血竭素高氯酸盐对照品适量，精密称定，用3%磷酸甲醇溶液制成每1ml含血竭素高氯酸盐13.649μg的对照品溶液（血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377），折算成血竭素浓度为每1mL含血竭素9.912μg。

2.3供试品溶液的制备取本品，摇匀，用0.45μg微孔滤膜滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

2.4线性关系考察分别精密吸取上述血竭素对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至10ml棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别进样20μl，测定其峰值面积，并以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，得血竭素回归方程：Y=28017Ｘ﹣2151（r=0.9997，n=6）。结果表明：血竭素对照品在0.9912～5.9472μg/ml范围内成良好的线性关系。

2.5精密度试验精密吸取供试品溶液20μl，进样，测定，重复6次，测定峰面积值，结果RSD=1.20%，表明本法精密度良好。

2.6重现性实验取同一批号的样品6份，分别用微孔滤膜滤过后按上述色谱条件测定血竭素含量，结果含量值为3.685μg/ml、RSD=1.18%，表明本法重现性良好。

2.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,分别于避光处放置0，2，4，6，8，10h后依法测定，结果血竭素峰面积RSD为0.46%，表明供试品溶液在避光处10h内稳定性良好。

2.8阴性对照实验按照本品处方，取血竭外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含血竭的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液并测定。阴性溶液色谱中，与对照品相应的位置上无干扰，见图1。

B

平均回收率=97.81%RSD=0.96%（n=9）

2.10样品测定取三批样品，按“2.3”项下制备样品溶液，按上述色谱条件测定，以外标法计算血竭素含量，结果三批样品血竭素含量分别为3.685μg/ml（121207）、3.712μg/ml（121210）、3.693μg/ml（121216）。

3、讨论

3.1本实验经对血竭素高氯酸盐对照品溶液进行紫外扫描发现,在440nm处有最大吸收,故选择440nm作为测定波长。通过对乙腈一0.05mol/磷酸二氢钠溶液(45：55)、乙腈一0.05mol/磷酸二氢钠溶液(50：50)、乙腈一0.05mol/磷酸二氢钠溶液(55：45)等多种流动相进行比较实验,发现乙腈一0.05mol/磷酸二氢钠溶液(50：50)的系统分离效果最好,且柱效高,故选择本系统为流动相。

3.2剧文献报道[5]，血竭素高氯酸盐在室温条件下遇光不稳定，故实验中的所有对照品溶液和供试品溶液的制备均在避光处操作，并置棕色量瓶中避光保存。建议十一味活血酊使用棕色瓶包装，以保证产品质量稳定。

3.3血竭为进口贵重药材，对其制剂中的含量进行检测盒控制对保证产品的质量及其必要。选用血竭的有效成分血竭素作为含量测定指标，又具有分析时间短、干扰小的优点。因此，本实验结果表明：本法简便、灵敏、准确，可用于十一味活血酊的质量控制。

参考文献

[1]中国药典2010年版(一部)[S].2010：133.

[2]姜春来等.高效液相色谱法测定舒筋活血定痛散中血竭素的含量[J].解放军药学学报,2010,26(6)：536.

[3]王杰等.HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸盐[J].中草药,2006,37(6)：859.

[4]徐雄华等.HPLC法测定化瘀止痛散中血竭素的含量[J].海峡药学,2011,23(9)：69.

[5]谭生建等.HPLC法测定通络止痛散中血竭素的含量[J].解放军药学学报,2012,28(6)：514.