海伦市雷炎社区卫生服务中心152399
摘要:目的:研究分析梅毒螺旋体特异性IgM(TP-IgM)抗体在梅毒血清固定中的应用。方法:此次研究的对象是选择285例梅毒患者中病程1年以上,快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)阳性且血清固定患者,将其临床资料进行回顾性分析,并用免疫印迹法检测TP-IgM抗体。结果:285例梅毒患者中,28例发生血清固定,经TP-IgM检测,阳性8例,阴性20例;28例血清固定患者中,17例二期梅毒患者TP-IgM抗体阳性5例,阴性12例;11例潜伏梅毒患者中TP-IgM抗体阳性3例,阴性8例;无一期梅毒。结论:梅毒螺旋体特异性IgM抗体可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。
关键词:血清固定;梅毒螺旋体IgM抗体;免疫印迹法;RPR
Abstract:Objective:TostudytheapplicationofTreponemapallidumspecificIgM(TP-IgM)antibodyinsyphilisserofixation.Methods:thesubjectsofthisstudyistochoosethecourseof285casesofsyphilispatientsinmorethan1years,rapidplasmareagintest(RPR)positiveandSerofastpatients,retrospectiveanalysis,andWesternblottingwasusedtodetectTP-IgMantibody.Results:285casesofsyphilis,28casesofSerofast,detectedbyTP-IgM,8caseswerepositive,20werenegative;28casesofpatients,17casesofsyphilisweretwoTP-IgMantibodypositivein5cases,12caseswerenegative;11casesofTP-IgMpatientswithlatentsyphilisantibodypositivein3cases,8caseswerenegativenosyphilis.Conclusion:TreponemapallidumspecificIgMantibodycanbeusedasaserologicalindicatorofinfectionandactivityinpatientswithsyphilisserofixation.
[Keywords]Serofast;TreponemapallidumIgMantibody;Westernblotting;RPR
梅毒是由苍白密螺旋体(treponemapallidum,TP)感染所致的一种慢性系统性性传播疾病,可侵犯全身各组织器官,造成多器官的损害[1],是我国目前主要性传播疾病之一。近年来,梅毒的发病率呈逐年上升趋势[2],随着发病率的上升,梅毒病人治疗后的一种血清学现象日益受到关注,即少数患者经驱梅治疗后梅毒血清试验持续不阴转,这种现象称之为血清固定(sero-fixation)[3]或者血清抵抗(sero-resistance)。据报道近年来梅毒患者血清固定发生率显著升高[4],各期梅毒治疗后血清固定发生率不一。
目前,临床上通常采用荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)等方法来为梅毒的诊断提供实验室依据。其中,RPR通常用作梅毒筛查、疗效观察、判断复发及再感染的监测[5],而FTA-ABS、TPHA、TPPA通常用作确证梅毒。上述各种方法均已成熟,但仍各有缺点,不足以完全解决梅毒的实验室诊断问题。本文采用抗原特异性免疫印迹法(WB)检测梅毒螺旋体特异性IgM抗体,用于血清固定病例的确证,现总结如下。
1一般资料
1.1病例资料
梅毒患者285例,来自2016年1月1日至7月31日我院皮肤科门诊。梅毒初筛实验采用快速血浆反应素环状卡片实验(RPR),选取病程1年以上、RPR阳性且滴度固定病例用梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测试剂盒(WB法)做确诊实验。
1.2检测试剂
快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供,梅毒苍白螺旋体特异性IgM抗体检测试剂盒(WB法)由无锡博慧斯生物医药科技有限公司提供。所有试剂均在有效期内。
1.3仪器
梅毒旋转振荡器1台,XK96-9型,由姜堰市新康医疗器械有限公司生产;低速离心机1台,SC-04型,由安徽中科中佳科学仪器有限公司生产。
2结果
2.1梅毒患者RPR实验结果
285例来我院就诊的梅毒患者均按照中华人民共和国卫生部颁布的《中华人民共和国卫生行业标准》明确诊断,其中一期梅毒108例,二期梅毒121例,潜伏梅毒56例;RPR阳性198例,滴度在1∶1~1∶32之间,RPR阴性87例。198例RPR阳性梅毒患者病程在1周~5年之间,其中28例患者病程1年以上,且RPR滴度固定。28例患者中二期梅毒17例,潜伏梅毒11例,无一期梅毒。
2.2梅毒患者血清固定情况
在28例血清固定的患者中,RPR滴度固定于原倍者17例,1∶2者9例,1∶4者2例,无RPR滴度大于1∶4者。RPR滴度转阴后复升者1例,为二期梅毒。
3讨论
机体感染梅毒螺旋体后产生的抗体分为两类:梅毒螺旋体特异性抗体和非梅毒螺旋体特异性抗体。前者包括TP-IgM抗体和TP-IgG抗体,TP-IgM抗体在感染2周后产生,4周后机体产生TP-IgG抗体;后者主要是类脂质又称为反应素,是组织被梅毒螺旋体破坏后释放的心磷脂等刺激机体产生的抗体[6]。因此梅毒血清学抗体的检测有特异性和非特异性两类,性病研究所实验室试验(VDRL)、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、RPR等非梅毒螺旋体特异性实验用于常规筛选、疗效观察、判断复发或再感染;TPHA、TPPA、TP-ELISA和梅毒螺旋体免疫印迹试验(WB)等梅毒螺旋体特异性试验常用作确诊试验[7]。
早期梅毒经规范化治疗后,多数患者的梅毒血清反应素抗体可转阴,但有部分患者的梅毒血清反应素抗体滴度下降较慢或不转阴。GOH等认为早期梅毒患者接受规范驱梅治疗后12个月血清反应素试验不阴转者即为血清固定。血清固定形成的原因和机制尚不完全清楚,根据长期临床经验推测血清固定可能与以下因素有关:部分梅毒患者感染梅毒螺旋体后,因无临床症状而忽视,未经治疗;部分患者虽经治疗,但不规范或剂量不足,未按要求定期复查;部分患者因个体的免疫状态不同出现细胞免疫抑制或免疫失衡,逃避免疫系统的梅毒螺旋体长期潜伏于组织中,机体受其持续刺激产生抗体,导致血清学检测持续阳性[8]。因此机体免疫抑制可能是造成梅毒血清固定的重要因素。赵建斌等[9,10]对免疫抑制的研究也得出类似观点,外周血CD4+CDbright调节性T细胞比例增高造成免疫抑制,导致梅毒患者血清固定。有研究认为未经正规驱梅治疗的早期梅毒患者存在明显的细胞免疫抑制现象,表现为Th(CD4)、NK、Th/Ts(CD4/CD8)明显降低,而Ts(CD8)明显增高[11]。Levene等[12]发现二期梅毒患者的血浆中含有大量由进入血液的苍白螺旋体脱落的荚膜粘多糖,它能灭活Th/Tc细胞,从而导致Th低下。在梅毒非特异性抗体血清学检测中(如RPR),常出现生物学假阳性。由于磷脂抗体的非特异性,在梅毒患者合并某些结缔组织病及伴有自身抗体的疾病中,生物学假阳性维持时间较长,可持续数月或数年甚至终身[13],这在一定程度上造成了梅毒血清固定患者的假阳性。
近年来,随着梅毒患者的增多,血清固定发生率也随之增加,血清固定后是否需要重新治疗,应根据脑脊液VDRL检测结果来确定,但由于部分医院医疗条件和病人依从性的限制,脑脊液检测较难普遍开展,因而治疗和处理十分棘手,成为梅毒防治工作中的难题,严重影响患者身心健康。而TP-IgM抗体是大分子蛋白,不易通过脑脊液,因此我们探讨TP-IgM抗体是否可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。
本研究采用快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)对285例梅毒患者血清作初筛,其中28例患者病程在1年以上,RPR阳性且滴度固定,即血清固定,再用抗原特异性免疫印迹法对28例血清固定患者做确认实验。本研究中血清固定发生率为9.82%,较杨文林等报道17.5%低[4],其中二期梅毒发生血清固定率为14.05%,潜伏梅毒血清固定率为19.64%,一期梅毒无血清固定。大部分潜伏梅毒患者病期不明,患病早期治疗不及时不规范,容易形成血清固定,该部分患者通常仍具有一定的传染性[14]。何玉清等[15]研究认为部分梅毒患者在两年内机体内仍有少量梅毒螺旋体存在,使TP-IgM抗体产生并维持一定水平。
本研究28例梅毒血清固定患者中8例经免疫印迹法检测为TP-IgM阳性,按照神经梅毒给予头孢曲松钠治疗半个月,一年后复查TP-IgM6例转阴,RPR3例转阴。头孢曲松钠药代动力学显示可以在脑脊液中达有效浓度,并维持对敏感细菌的杀菌作用达24h,证明在部分梅毒血清固定患者机体内确实存在活的梅毒螺旋体,也在一定意义上提示我们TP-IgM抗体可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。但由于本研究样本量较小,存在一定的局限性,有待进一步研究探讨。
杨琳等[16]研究显示部分梅毒患者反应素持续阳性,但TP-IgM抗体经3次以上检测均为阴性。本研究28例梅毒血清固定患者中20例经免疫印迹法检测为TP-IgM阴性,8例TP-IgM阳性患者经抗菌治疗后6例阴转,说明该部分梅毒血清固定患者机体内已不存在活动的梅毒螺旋体。TP-IgM抗体的检测对梅毒患者判愈更有意义。一般认为一期梅毒患者TP-IgM抗体阴转为3个月,二期梅毒患者达到9个月,潜伏梅毒患者时间较长,可达到2年[17]。对TP-IgM抗体的检测结果分析,当TP-IgM抗体转阴,说明患者体内没有活动的梅毒螺旋体,可酌情继续随访或判愈;TP-IgM抗体不转阴,说明患者体内可能残存梅毒螺旋体,需继续治疗;某些特殊病例中,TP-IgM抗体阴转患者随访时再转阳性,表明再次感染梅毒[18]。
在8例TP-IgM抗体阳性患者中,4例RPR固定在1∶1,占TP-IgM阳性的50%,他们具有以下临床特征:年龄偏大,平均60.75岁,感染后治疗时间较晚,3例合并有基础性疾病;3例固定在1∶2;1例固定在1∶4。但TP-IgM抗体与RPR固定滴度的关系尚不明确,与以上三项是否相关有待进一步研究。同时本研究样本数有限,还需在今后的工作中进一步扩大研究。
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