不同类型脑梗死患者血管紧张素—Ⅱ2型受体A1675G基因多态性分析

不同类型脑梗死患者血管紧张素—Ⅱ2型受体A1675G基因多态性分析

杨国安1孙洪英2和姬苓2王宏坤1陈鹏1

杨国安1孙洪英2和姬苓2王宏坤1陈鹏1

（1包头医学院第一附属医院基因诊断中心内蒙古包头014010）

（2包头医学院第一附属医院基因诊断中心神经内科内蒙古包头014010）

【中图分类号】R743.33【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)26-0037-03

【摘要】目的探讨血管紧张素—Ⅱ2型受体（AT2R）基因A1675G单核苷酸多态性与不同类型脑梗死的关系。方法采用套式等位基因特异性引物PCR技术检测AT2RA1675G单核苷酸多态性,比较和分析病例组与对照组间该基因型及等位基因的分布频率差异，并运用Logistic回归分析脑梗死的危险因素。结果1.脑梗死组G等位基因频率0.292明显低于对照组0.518，P<0.05。2.将脑梗死按OCSP分型分组,各组间比较G等位基因频率，P＞0.05。各型脑梗死组G等位基因频率低于对照组,P<0.05。3.Logistic回归分析后，G等位基因降低脑梗死的发生概率，OR值为0.38,P<0.05。结论AT2R基因A1675G单核苷酸多态性对各型脑梗死发病均有保护作用,但对不同类型脑梗死的保护作用无差别。

【关键词】脑梗死血管紧张素—Ⅱ2型受体基因多态性OCSP分型

脑梗死是遗传因素与环境因素共同作用的疾病，其发病的基因基础已成为研究脑梗死发病机制的新方向。本课题应用病例-对照分析,利用套式等位基因特异性引物(NASP)PCR技术(NASP-PCR)检测AT2RA1675G单核苷酸多态性,探讨其与脑梗死的关系，从分子基因水平为脑梗死易感者的筛检和识别提供依据。

1对象与方法

1.1对象

（1）脑梗死组：来源于2008年3月至2009年10月包头医学院第一附属医院神经内科住院的脑梗死患者。180例,男117例，女63例，年龄32-90岁，平均年龄（64.74±11.72）岁。诊断符合《各类脑血管疾病诊断要点》，并经头颅CT和/或MRI检查证实。排除脑栓塞、脑出血、严重肝肾损害；（2）正常对照组：为同期来医院门诊体检的健康人群，130例，男84例，女46例，年龄30-80岁，平均年龄（53.49±10.60）岁。除外脑血管意外、严重肝肾功能损害，研究个体间无血缘关系。

1.2方法

1.2.1AT2RA1675G基因多态性的测定

2ml血标本入EDTA-Na2抗凝管，用低渗溶血法提取基因组DNA。利用套式等位基因特异性引物PCR技术(NASP-PCR)检测AT2RA1675GSNP。引物为,P1:5’-GAAGGCTCCCAGTGGACAGAC-3’；P2:5’-CCTAACAAATTAACATAAAAGAA,TC-3’；P3:5’-ACTGTATTTTGCAAAACTCCTA-3’；P4:5’-GAAACAGCAGCTAAATAATTC-3’。PCR反应体系及条件如下：TaqDNA聚合酶6ul，PCR反应混合液10ul制备好的模板DNA2μl。预变性94℃5min，变性94℃30s，退火56℃,30s，延伸72℃30s，共30个循环，最后72℃延伸5min，2%琼脂糖凝胶电泳分型。

1.2.2统计学方法

应用SPSS17.0软件进行分析。AT2R基因型分布及等位基因频率通过x2检验；计量资料采用t检验；计数资料采用x2检验；采用多因素Logistic回归方法分析AT2R基因多态性对疾病的影响。

2结果

2.1病例组和对照组基因型及等位基因的分布频率

脑梗死组G等位基因频率0.292明显低于对照组0.518，经χ2检验，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2各型脑梗死比较

按Bamford提出的脑梗死OCSP分型分组：Ⅰ型：腔隙性梗死（LACI），Ⅱ型：完全前循环脑梗死(TACI)，Ⅲ型：部分前循环脑梗死（PACI），Ⅳ型：后循环梗死（POCI）。将脑梗死组各组间比较G等位基因频率，经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。各型脑梗死组G等位基因频率低于对照组,经χ2检验，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.3多因素Logistic回归分析脑梗死患者易患因素

以吸烟史、饮酒史、性别、年龄、BMI、血压、血脂、血糖以及AT2R各等位基因作为自变量，以是否发生脑梗死为应变量，非条件Logistic回归分析后，SBP、DBP增加脑梗死的发生概率，OR值为1.17(95%CI:0.02-1.44),1.26(95%CI:1.09-1.46),差异有统计学意义（P<0.05）。G等位基因及高密度脂蛋白降低脑梗死的发生概率，OR值为0.38(95%CI:0.17-0.87),0.30(95%CI:0.11-0.81)，差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

迄今脑血管病遗传学研究深入到了分子水平。人类的AT2R基因定位于Xq22-23，含有3个外显子和2个内含子。AT2R的功能主要包括以下几个方面：促进器官发育和细胞分化；抑制细胞增殖；促进细胞凋亡；在体内介导血管扩张和降低血压等。国内外近年对AT2R基因多态性与高血压及心血管疾病的关系进行了研究，但结论不一致。截至目前，关于AT2RA1675G基因多态性与脑梗死的相关性研究还未见报道。

在本实验310例样本中发现AT2R基因A1675G位点3种基因型AA、AG、GG；在男性样本中未发现AG基因型。脑梗死组与对照组间的性别、年龄、BMI差异无显著性,表明资料具有可比性。

脑梗死组G等位基因频率0.408明显低于对照组0.518，P<0.05；提示：AT2R基因A1675G单核苷酸多态性对脑梗死的发病有保护作用。

各型脑梗死组G等位基因频率低于对照组，脑梗死组各组间比较G等位基因频率,P＞0.05。提示：AT2R基因A1675G多态性对各型脑梗死发病均有保护作用,但不同类型脑梗死的保护作用无差别。

非条件Logistic回归分析后，SBP、DBP增加脑梗死的发生概率，OR值为1.17,1.26,P<0.05。G等位基因及高密度脂蛋白可降低脑梗死的发生概率，OR值为0.38,0.30，P<0.05。更进一步说明：AT2R基因A1675G单核苷酸多态性对脑梗死的发病有保护作用，G等位基因为保护基因。

寻找脑梗死的相关基因乃至致病基因，研究它们与脑梗死的关系，从而揭示脑梗死的发病机理,具有重要意义。通过每一候选基因研究，特别是研究候选基因之间、基因多态性与环境之间的相互作用来剖析其发病机制，是未来临床研究中的一个重要方向。

参考文献

[1]中华神经科学会.各类脑血管疾病诊断要点.中华神经科杂志,1996,29(6):379-380.

[2]周平，李法琦，血管紧张素—Ⅱ2型受体基因A1675G多态性与原发性高血压的相关性研究.重庆医科大学学报，2005,30（6）：836-839.