李玥
(天津中医药大学天津300451)
【摘要】目的:建立一种有效测定R-α-苯乙胺的含量的高效液相色谱法。方法:采用氰基柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为缓冲盐溶液(0.15%三氟乙酸水溶液:0.1%三乙胺水溶液55:15):甲醇(85:15);等度洗脱,柱温为35℃;检测波长为258nm;体积流量为1.0mL/min;进样量为5μL。结果:R-α-苯乙胺在0.7mg/ml~1.2mg/ml具有良好的线性关系(R=0.9999,n=6)。平均回收率为99.3%,RSD%=0.39,n=9;结论:本方法简便准确、重现性好,精密度高,可以用于测定R-α-苯乙胺的含量。
【关键词】R-α-苯乙胺;含量测定;HPLC
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)11-0310-02
R-α-苯乙胺是最为常用的手性拆分剂之一,是制备手性化合物的重要原料。广泛应用在药物、食品、农药、材料、饲料等领域,但笔者在国内外文献及中国、日本、美国和欧洲药典均没有发现其含量测定方法,对其质量缺乏有效控制,故本文开发出一种快速简便有效的含量测定方法,为R-α-苯乙胺的质量控制提供参考。
1.仪器与材料
Agilent1260高效液相色谱仪系统,包括1260泵、1260进样控制器、G4212B二极管阵列检测器、AgilentChemStation工作站;CP225D电子天平(赛多利斯公司);Elix10纯水系统(美国Millipore公司);R-α-苯乙胺对照品(美国sigma公司,批号128K7135V);R-α-苯乙胺(金坛市华阳科技有限公司,批号20130601);甲醇(色谱纯,美国MREDA公司);三乙胺(色谱纯,美国MREDA公司);三氟乙酸(色谱纯,美国MREDA公司);超纯水(试验室自制)。
2.方法与结果
2.1色谱条件及溶液配制
2.1.1色谱条件色谱柱为氰基柱(月旭XB-CN250mm×4.6mm,5μm);流动相为缓冲盐溶液(0.15%三氟乙酸水溶液:0.1%三乙胺水溶液55:15):甲醇(85:15)等度洗脱,柱温为35℃;检测波长为258nm;体积流量为1.0mL/min。
2.1.2溶液配制
空白溶液:流动相。
供试品溶液:取R-α-苯乙胺1.0g,精密称定,置于10ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,再量取1.0ml,置于100ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
对照品溶液:取R-α-苯乙胺对照品1.0g,精密称定,置于10ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,再量取1.0ml,置于100ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。
2.2专属性试验
2.2.1空白试验
取流动相进样5μL,结果未检测到峰,无干扰。
2.2.2波长确定及主峰纯度试验
取对照品溶液进样5μL,通过二极管阵列检测器进行光谱扫描,发现R-α-苯乙胺在258nm处有最大吸收波长。通过主峰纯度检测,纯度因子为999.265,在阈值限值内,说明主峰纯度符合规定,专属性良好。
2.3线性关系试验
取R-α-苯乙胺对照品1.0g,精密称定,置于10ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,再分别量取1.2ml、1.1ml、1.0ml、0.9ml、0.8ml和0.7ml分别置于100ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,即得线性120%、110%、100%、90%、80%和70%溶液,进样5μL,测定峰面积,以峰面积A对浓度C进行线性回归,A=756755C+2384,R=0.9999,说明R-α-苯乙胺在0.7mg/ml~1.2mg/ml具有良好的线性关系。
2.4检测限与定量限试验
将线性100%进行逐级稀释,分别以信噪比(S/N)3和10确定R-α-苯乙胺的检测线和定量限,结果表明:R-α-苯乙胺的检测限为15ng,定量限为50ng。
2.5进样精密度试验
将线性100%进样6次。各杂质样品的精密度良好,峰面积RSD%为0.20%。
2.6重复性试验
取R-α-苯乙胺1.0g6份,精密称定,置于10ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,再量取1.0ml,置于100ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。结果6次测定R-α-苯乙胺含量的平均值为99.6%,RSD%=0.29%,说明重复性良好。
2.7中间精密度试验
更换不同试验人员在另一台仪器上重复性试验。结果12次测定含量的平均值为99.7%,RSD%=0.23%,说明中间精密度良好。
2.8加样回收率试验
取R-α-苯乙胺0.50g9份精密称定,置于10ml量瓶中,取其中3份分别加入0.30gR-α-苯乙胺对照品,取其中3份分别加入0.50gR-α-苯乙胺对照品,取其中3份分别加入0.70gR-α-苯乙胺对照品,分别使用流动相稀释至刻度,摇匀,再分别量取1.0ml,置于100ml量瓶中,使用流动相稀释至刻度,摇匀,即得加样回收率实验80%、100%和120%各3份样品,分别进样5μL,测定峰面积,计算平均回收率为99.3%,RSD为0.39%。
2.9稳定性试验
取精密度试验项下的样品在0、1、2、4、6和8小时进样,结果峰面积在6小时时变化值为-1.8%,说明样品在6小时内稳定。
3.讨论
根据R-α-苯乙胺的结构可知含有一个胺基,与色谱柱的硅烷基存在一定的吸附,使R-α-苯乙胺的色谱峰出现严重拖尾,甚至呈现三角峰,需要加入三乙胺竞争抑制R-α-苯乙胺的胺基与色谱柱硅烷基的吸附,减少拖尾,通过0.15%的三氟乙酸水溶液和0.1%的三乙胺水溶液和甲醇三相进行摸索,不断调整之间的比例,最终得到理想的峰型。在色谱柱的选择上通过对比C18柱、氨基柱和氰基柱,结果氰基柱效果最好。在紫外吸收图谱扫描时应使用HPLC-DAD进行扫描,可以有效避免杂质干扰,得到更为准确的图谱。
【参考文献】
[1]中华人民共和国药典委员会.中国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,附录29-31.
[2]中华人民共和国药典委员会.中国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,附录194-195.