HPLC法测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA的含量

HPLC法测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA的含量

陈辉1，陈勇2

陈辉1，陈勇2

（1.海安县中医院药剂科，226600；2.南通市第一人民医院，226000）

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA含量的方法。方法：高效液相色谱法?,以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱；甲醇―水（80∶20）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长270nm；柱温为室温。结果：?丹参酮ⅡA在0.01974～0.3963μg范围内与峰面积呈线性关系良好（r=0.9999），平均回收率99.60%（n=5），RSD=1.98%。结论：?本法操作简便，结果准确，重复性好，可用于测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA的含量，控制宁心胶囊的质量。

【关键词】?HPLC法；宁心胶囊；?丹参酮ⅡA?；?含量测定

ContentdeterminationofTanshinoneⅡAinNingXinCapsulesbyHPLC

ChenHui1,ChenYong2

1.HaianCountyChinesemedicinehospitalpharmacy,226600,China；2.NantongFirstPeople'sHospital,226000.

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordeterminationofTanshinoneⅡAinNingXinCapsules.MethodsTheassaywasconductedonaAgilengt—C18Chromatographiccolumn（5μm，150mm×4.6mm）withmethonal-water（80∶20）asmobilephase.Flowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThecali-brationcurvewaslinearovertherangeof0.01974～0.3963μg（r=0.9999）forTanshinoneⅡA.Theaveragerateofre-coverywas99.60%withRSD=1.98%（n=5）.ConclusionThismethodisconvenientandaccuratewhichmaybeusedfordeterminationofTanshinoneⅡAinNingXinCapsules.

【Keywords】HPLC;NingXinCapsules;TanshinoneⅡA?;determinationofcontent

宁心胶囊是根据我院心血管专科多年的经验方，经过批准生产的医院中药制剂（批准文号：苏药制字Z04000118），由丹参、黄芪、葛根、苦参等多味药组成，具有宁心安神，益气养心，活血通脉之功效，用于心肌炎、冠心病等病引起心律失常的治疗，临床疗效显著。为了控制该制剂的质量，确保临床疗效，本文对成品中君药丹参有效成分丹参酮ⅡA的含量测定方法进行了探讨，采用HPLC法测定丹参酮ⅡA含量1，方法学考察结果令人满意，为控制该制剂的质量提供了依据。

1?仪器与试剂

1.1仪器

Agilengt1200型高效液相色谱仪，AUW—220D电子分析天平

1.2样品

宁心胶囊（本院制剂室提供，批号:131103、131112、131121）。

1.3试剂

对照品丹参酮ⅡA（中国药品生物制品检定所，批号110764-200511）；甲醇（色谱纯），水（纯化水），其余试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1?色谱条件

色谱柱:Agilengt—C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm）；流动相:甲醇―水（80∶20）；柱温:室温;检测波长:270nm;流量:1.0ml/min；进样量5μl。

2.2对照品溶液的制备

精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，精密量取对照品储备液2ml，置另一25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取供试品去除囊壳，倾出内容物，研细，过80目筛，精密称定0.3g，置25mL具塞锥形瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解，稀释至刻度，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，既得。

2.4阴性样品溶液的制备

除丹参外，其他各药按供试品处方量投料，按宁心胶囊的制备工艺制成阴性制对照品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液

2.5系统适应性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液各5?l，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，结果见图1

图1HPLC色谱图

2.5.1线性关系考察

精密称取丹参酮ⅡA对照品12.36mg,置50ml量瓶中，加甲醇适量，摇匀，稀释至刻度，作为标准溶液。精密量取2ml置25m棕色量瓶中，加适量甲醇，摇匀，稀释至刻度，得到浓度为0.01978mg/ml对照品溶液。吸取该对照品溶液1、2、5、10、15和20μl，依次注入液相色谱仪。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得丹参酮ⅡA回归方程:Y=2629713.8957X—5506.0446，r=0.9999。

2.5.2精密度试验

精密吸取上述对照品溶液溶液5μl，重复进样6次，按上述色谱条件测定丹参酮ⅡA峰面积积分值，RSD为0.84%。说明仪器精密度良好。

2.5.3重复性试验

精密称取同一批号宁心胶囊（批号:131103）6份，按“2.3”所述方法制备供试品溶液，分别进样测定，丹参酮ⅡA平均含量为0.5792mg/粒，RSD=1.88%。表明本方法重复性良好。

2.5.4稳定性试验

取样品溶液（批号:131103），分别于0、1、2、4、8、12h各精密吸取5μl进样，

按上述色谱条件测定，丹参酮ⅡA平均含量为0.5732mg/粒，RSD为0.75%，表明供试品中的丹参酮ⅡA的含量在12h内稳定。

2.5.5回收率试验

采用加样回收法，取同一批号样品（批号:131103）6份，称取含量测定中规定量的1/2量，精密称定，分别置于25m棕色量瓶中，精密加入0.284mg/ml丹参酮ⅡA对照品溶液1ml，按本文“2.3”所述方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率，结果回收率为99.60%，RSD为1.98%。见表1。

表1回收率试验结果

4讨论

在供试品制备的过程中，也考虑到其他样品对丹参提取以及含量测定的影响2，考察了用不同提取方法的提取，分别设计了超声10分钟，超声30分钟，回流30分钟，回流1小时，结果超声10分钟提取不完整，丹参酮ⅡA仅为5.8741mg/g，超声回流30分钟和回流一小时结果差不多，但回流提取1小时提取，效果较好，峰面积较大，所以本实验供试品的处理方法为甲醇回流提取1小时，与2010版一部《中国药典》丹参项下丹参酮ⅡA含量测定一致。

宁心胶囊是医院制剂，在长期的临床实践中证明，具有良好的疗效，但是长期以来，以薄层鉴别作为该药的标准，没有具体的质量控制标准，丹参是宁心胶囊的主药之一，本实验通过用HPLC法对宁心胶囊中丹参酮ⅡA的含量进行测定。通过实验，建立了宁心胶囊的质量控制方法，该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强，可以作为宁心胶囊制剂的质量控制标准的参考。

参考文献

1国家药典委员会.中华人民共和国药典?一部.北京:化学工业出版社，2010，57-58.

2楼云娜，袁强，HPLC测定冠心丹参滴丸中丹参酮ⅡA的含量[J].齐鲁药事.2007,26（9）：595.