谷氨酰胺对坏死性小肠结肠炎预防机制的研究

谷氨酰胺对坏死性小肠结肠炎预防机制的研究

孟阳（通讯作者）1施高阳1王丹1胥飞1朱玲玲

（1盐城市第一人民医院儿科江苏盐城224000）

（2扬州市苏北人民医院新生儿科江苏扬州225000）

【摘要】目的：利用人工喂养联合内毒素灌胃方式建立新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）的动物模型，从而探索谷氨酰胺（Gln）预防坏死性小肠结肠炎机制。方法：采用清洁级、2日龄的健康wistar新生鼠60只，随机分成三组，利用人工喂养联合内毒素灌胃方式建模后，比较三组镜下肠道组织病理损伤。结果：C组的道病理损伤在2、6、12h均较B组降低显著，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：利用LPS灌胃结合人工喂养方式诱导新生鼠坏死性小肠结肠炎模型，且谷氨酰胺可减轻发生坏死性小肠结肠炎新生鼠的肠组织损伤，为临床NEC患儿预防性补充Gln提供实验室依据。

【关键词】坏死性小肠结肠炎；谷氨酰胺

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）34-0235-01

新生儿坏死性小肠结肠炎首次报道于1964年，多见于早产儿，是新生儿重症监护病房病死率极高的肠道急症[1]。近年来学者们尝试寻找合适的NEC动物模型，研究NEC的发病机制，进一步探索其防治药物及药理作用。本研究主要致力于建立新生鼠坏死性小肠结肠炎模型，并探索谷氨酰胺对其是否存在预防作用。具体研究如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

采用清洁级、2日龄的健康wistar新生鼠60只，体重3～5g，由扬州大学比较医学中心提供，随机分成三组：空白对照组（A）、模型组（B）、谷氨酰胺组（C）各20只。

1.2实验方法

A组喂养于母鼠旁。C组：0.3g·Kg-1·天-1谷氨酰胺灌胃，持续五天；B组C组：于实验第六天起每只5mg·Kg-1·天-1LPS灌胃，持续三天；C组和B组新生鼠均代鼠乳人工喂养，代鼠乳配制参照Flores[2]方法。LPS灌胃结束后第2、6、12、24h，各时间点随机抽取5只断颈法处死后，留取回盲部近端肠管，进行H-E染色，留作病理标本，观察组织形态学变化。

2.结果

2.1肠组织损伤的程度

B组和C组各时间点肠组织平均损伤评分均高于A组，病理损伤评分高峰在6时。C组肠组织损伤评分在2、6、12h与B组比较P值均＜0.05；B组肠组织损伤评分在2、6、12、24h与A组比较P值均＜0.05；C组肠组织损伤评分在2、6h与A组比P值均＜0.05。

表各组新生鼠肠组织损伤病理评分（x-±SD）

注a：与A组相比P＜0.05；b：与B组相比P＜0.05；c：与A组相比P＜0.001。

2.2H-E染色后A、B、C组肠组织病理改变（HE×200）

A组：肠上皮和绒毛结构完整；B组2h肠上皮细胞变性，肠黏膜下层和固有层分离，绒毛萎缩、结构脱落；C组2h肠黏膜下层和固有层轻微分离，绒毛顶端脱落；B组6h肠上皮结构基本消失，黏膜下层和肌层重度水肿，绒毛结构崩解分离；C组6h肠黏膜下层和固有肿胀，绒毛断裂、缺失；B组12h肠上皮结构较前修复，绒毛结构不清，C组12h轻微肠黏膜下层水肿，绒毛结构始修复；B组24h肠黏膜下层和基层水肿，绒毛结构始修复；C组24h肠上皮结构基本完整，绒毛结构清楚。

3.讨论

1974年Barlow等首次综合采用配方乳人工喂养联合缺氧成功建立新生大鼠NEC模型。近年来，国内学者通过人工喂养联合接种肠道细菌造模，发现其与人类NEC病理改变十分相似，且建立方法较为廉价、方便，较好重复[2]。本实验对象为出生48小时的新生鼠，采用人工喂养+LPS灌胃的方法建立NEC模型。实验中B组新生鼠于操作后逐渐精神萎靡、体毛杂乱，严重者惊厥，腹部青紫、血便，甚至死亡，且剖腹见胃潴留明显，肠管扩张、水肿，血性渗出物增多，严重者见肠片状出血、坏死。进一步镜检后发现，B组肠组织上皮被炎性细胞浸润，固有层充血，绒毛逐渐萎缩、结构塌陷、进而崩解；其实验中表现和病理形态学改变与人类NEC类似。同时B组肠组织损伤在2、6、12、24h与A组比较P值均＜0.05，证实其统计学意义，提示造模成功[3]。

GLn多年来被认为是非必须氨基酸，但近年来国内外学者通过大量动物实验和临床研究证实，Gln能维持肠结构完整性，应激状态下更为明显。其作为条件必需氨基酸，通过修复机体组织细胞供能，进而调节免疫。本实验发现H-E染色后B、C组大鼠肠组织病理改变在2、6、12h有明显不同，C组肠组织损伤轻且修复较B组快，统计C组肠道病理损伤评分在2、6、12h与B组比较P值均＜0.05，具有统计学意义，揭示Gln可能具备减轻并修复肠黏膜屏障的功效，接下来需进一步从免疫和炎症因子表达层面探索Gln对NEC的保护机制，为临床防治NEC的工作提供宽阔思路。

【参考文献】

[1]KafetzisDA,SkevakiC,CostalosC.Neonatalnecrotizingenterocolitis:anoverview[J].CurrOpinInfectDis,2003,16(4):349-355.

[2]FloresCA,HuC,EdmondJ,etal.Milkcarnitineaffectsorgancarnitineconcentrationinnewbornrats[J].JNutr,1996,126(6):1673-1682.

[3]郑晓辉，周伟，荣箫，等.早产大鼠坏死性小肠结肠炎三种常用模型的建立及评价[J].中华围产医学杂志，2010，13(5):408-412.