微柱凝胶技术在新生儿溶血性疾病诊断中的探讨

微柱凝胶技术在新生儿溶血性疾病诊断中的探讨

马吉联梁金凤姜设初赖春征

马吉联梁金凤姜设初赖春征（广西壮族自治区贵港市人民医院广西贵港537100）

【中图分类号】R722.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）20-0129-02

【关键词】新生儿溶血直接抗球蛋白试验放散试验游离试验

ABO血型系统引起的新生儿溶血病是母子ABO血型不合，多见于O型母亲、A型或B型胎儿，主要是由于胎儿红细胞抗原A或B与来自母体的抗A或抗B抗体反应的结果。本文将微柱凝胶技术应用于新生儿溶血病诊断的直接抗球蛋白试验、释放试验、游离试验中，并和传统的试管法进行比较，现将检测结果报告如下：

1材料与方法

1.1对象2010年11月至2011年12月本院出生拟诊为ABO血型不合HDN的新生儿血标本（EDTA抗凝）。其中母-婴血型为O-A者为56例,O-B者为61例，O-AB者为5例。

1.2方法

1.2.1微柱凝胶法（试剂、微柱凝胶卡、离心机和孵育器,半自动加样机,自动判读机由达亚美公司提供）（1）直接抗球蛋白试验①取新生儿静脉血，离心。取压积红细胞，用达亚美2号稀释液配0.8%的红细胞悬液。②将50ul上述红细胞悬液加入微柱凝胶孔，离心10分钟判读结果。（2）释放试验①用DiaCidel洗涤液，清洗压积红细胞4次。②最后一次倾去洗涤液，保留部分上清液，检测是否存在不规则抗体。③在洗涤的细胞中，加入等量的放散液，混匀，9000G离心1分钟。④在上述放散液中加入DiaCidel缓冲液，边加边混匀观察是否有蓝色出现，如有则表示PH约（6.5-7.5）。⑤分别取0.8%A、B红细胞悬液50ul加入各个孔再加入放散液25ul。⑥放孵育器孵育15分钟，卡式离心机离心10分钟，观察结果。（3）游离试验①取新生儿血标本，离心，取血浆。②分别取0.8%的A、B、O标准红细胞50ul，然后各孔加入25ul血浆。③放孵育器孵育15分钟，卡式离心机离心10分钟，观察结果。

1.2.2试管法[1](试剂由上海血液生物医药有限公司提供)（1）直接抗球蛋白试验①将受检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2%的红细胞悬液一滴，其中一管加入抗-IgG抗球蛋白血清50ul，另管加盐水50ul，混匀后立即以2000r/min离心1min，判读结果。②取受检红细胞，生理盐水洗涤3次，配成3%红细胞盐水悬液；③取上述3%红细胞悬液50ul、抗球蛋白血清50ul加入试管混匀；120/分，离心1分钟，混合，观察结果。同时做阴、阳性对照。（2）放散试验（热放散法）①将受检红细胞洗3次，取压积红细胞1ml左右，加半量盐水；②将试管放在56℃水浴中不断振摇7-8分钟，取出放入置有56℃热水的离心套管中，立即2000r/min离心3分钟，吸取上清液备用。③将放散液分为3份，加入3个小试管中，分别加入3%的A、B、O型酶处理细胞悬液50ul，37℃致敏，1小时。④取出生理盐水洗涤3次，加入抗-IgG50ul，以1000r/min离心1min，混合，观察结果。（3）游离抗体试验①取小试管三支，每管加患儿血清100ul。②分别加入3%A、B、O型酶处理红细胞悬液50ul，37℃致敏，1小时后取出，若凝集，证明存在抗体。③若不凝集，生理盐水洗涤3次，加入抗-IgG50ul，以1000r/min离心1min，混合，观察结果。

1.3统计学处理：微柱凝胶法和凝聚胺法交叉配血符合率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异具有显著性意义。

2结果

122例新生儿溶血三项检测微柱法和试管法的结果比较

2.181例新生儿溶血直接抗球蛋白二种方法实验结果122例肝HDN患者两种方法结果显示，采用微柱凝胶法进行直接抗球蛋白试验结果阳性25例。采用试管法进行直接抗球蛋白试验结果阳性27例。χ2=56.7,P=0.031,实验表明微柱凝胶法的阳性率低于试管法，两法差异有显著性意义。

2.2122例新生儿溶血游离试验二种方法实验结果122例肝HDN患者两种方法结果显示，采用微柱凝胶法进行游离试验结果阳性67例。采用试管法进行游离试验结果阳性60例。χ2=58.3,P=0.031，实验结果表明，微柱凝胶法敏感度高于试管法，两法差异有显著性意义。

2.381例新生儿溶血放散试验二种方法实验结果122例肝HDN患者两种方法结果显示，采用微柱凝胶法进行放散试验结果阳性77例。采用试管法进行放散试验结果阳性67例。χ2=51.1,P=0.016实验结果表明，微柱凝胶法敏感度高于试管法，两法差异有显著性意义。

3讨论

新生儿溶血病是一种由于母亲体内存在着与其胎儿红细胞不配合的IgG血型抗体而引起的同种被动免疫疾病，当胎儿从父亲方面遗传来的红细胞抗原恰为母亲所缺乏时，称母婴血型不合。在已知的血型抗体中发生新生儿溶血病者，以ABO血型系统为最常见。A、B血型物质广泛存在自然界某些植物、寄生虫性细菌中，O型血母亲通常在孕前早已接触过A、B血型物质抗原刺激，并产生相应的抗A、抗B的IgG，故ABO血型不合50%在第一胎即可发病，所以ABO溶血临床多见[2]。患儿表现为黄疸进行性加深,不同程度的贫血、肝脾肿大,严重者可有水肿、核黄疸等[3]。临床上可根据“三项试验”,即红细胞抗球蛋白试验、抗体放散试验和血清游离抗体试验做出诊断[1]。因此，探讨新生儿溶血病检测方法，对临床早期诊断早期治疗母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病具有重要意义。

本文检测122例ABO血型不合临床拟诊新生儿溶血病的新生儿标本。分别采用微柱法、试管法进行直接抗球蛋白试验、游离试验和放散试验，在三项试验中，直接抗球蛋白试验阳性率最低，微柱法直接抗球蛋白阳性检出21例，试管法直接抗球蛋白试验阳性27例，试验结果表明，试管法的敏感性高于微柱法。本文认为可能是婴儿抗原较弱，试管法对婴儿的红细胞洗涤，有利于红细胞表面抗原充分暴露。有报道，由于婴儿红细胞表面A、B抗原发育不完全，吸附抗体量不够多[4]。对于多特异性和单特异性抗球蛋白，每个细胞至少要包被200-500分子才能被检测出来[5]。

放散试验微柱法检出阳性结果64例，试管法检出阳性结果57例；游离试验微柱法检出阳性结果56例，试管法检出阳性结果50例，。实验结果表明，微柱法敏感度高于试管法，两法差异有统计学意义。但试管法操作复杂，洗涤放散时间过长不能及时给临床提供诊疗结果；结果判断主观化，受干扰因素较多，特别是在放散实验中，温度难以保持在56°C，酶的PH需效正，酶化时间把握不好易造成假阳性、假阴性。微柱法操作过程简单，标准化，耗时短，结果易观察，尤其表现在放散试验和游离试验中，适宜在临床推广应用。

参考文献

[1]李勇,马学严主编.实用血液免疫学(血型理论和实验技术)[M].北京：科学技术出版社,2006:419-420.

[2]吴家敏,黄国华,乔晓红.新生儿高胆红素血症260例临床分析[J].同济大学(医学版),2007,28(1):64-66.

[3]杨于嘉.新生儿溶血病[J].医学临床研究,2002,19(7):5131.

[4]宋志伟,刘凤华.166例新生儿溶血病结果分析[J].哈尔滨医药,2002,22(1):25-26.

[5]徐树良,田爱民,陈军浩等.流式细胞术检测抗体致敏红细胞方法的建立及初步应用[J].中国输血杂志,2002,15（2）:98-1.