Beagle犬服用褪黑素的药动学研究

Beagle犬服用褪黑素的药动学研究

岳建农邹泽苏学琴

岳建农邹泽苏学琴（重庆市黔江中心医院药剂科重庆黔江409000）

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）48-0063-02

【摘要】目的研究褪黑素在Beagle犬体内药代动力学参数。方法选6只Beagle犬行单剂口服褪黑素(3mg/只),高效液相色谱法测定血中药物浓度,经3p97程序推算药动学参数。结果褪黑素在体内药-时曲线为二室模型。主要药动学参数t1/2Ka为(0.16±0.10)h,t1/2Ke为(1.21±0.52)h,tmax为(0.50±0.18)h,Cmax为(11.27±3.77)ng/ml,AUC(0→T)为(25.23±7.71)(ng?h)/ml。结论褪黑素在犬体内口服吸收快、作用迅速,但维持时间较短。

【关键词】褪黑素高效液相色谱药动学

许多研究表明,褪黑素（Melatonin）可以有效地改善睡眠,且起效快、毒性小,是一种新型的催眠药[1]。其制品正在成为我国保健食品市场的热销品种。为了解该类药物的药动学参数以供消费者参考,笔者进行了褪黑素在Beagle犬体内的药动学研究。

1材料和方法

1.1试药与仪器

褪黑素片(3mg/片,批号:20030110,美国宝力士有限公司);褪黑素标准品(美国Sigma公司)。

Agilent1100系列高效液相色谱仪,包括泵系统、可调波长紫外检测器和工作站(美国Agilent公司)。

1.2受试动物

健康合格Beagle犬6只,雌雄各半,体重7kg～8kg,个体之间体重不超过20%。实验前检查其肝、肾功能和心电图,结果均正常。由四川省都江堰养麝研究所提供，实验实施合格证号为川实动管第64号，实验动物质量合格证号为川实动管第63号。

1.3血样采集

选取6只Beagle犬,实验前禁食12h后,于次日晨8时空腹灌服褪黑素片，每只犬3mg,于给药前及给药后0.083、0.17、0.25、0.33、0.5、0.67、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0h,抽取静脉血4.0ml,分离血浆,低温保存(-20℃)待测。

1.4褪黑素标准品的配置方法

精密称取褪黑素标准品9.1mg,用适量甲醇溶解,置于25ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,混匀,即得浓度为364μg/ml的标准储备液。使用时用甲醇稀释成浓度为728ng/ml的工作浓度。

1.5样品含量测定

1.5.1色谱条件

参考文献[2],选择如下色谱条件:色谱柱为KromasilTMC18（150×0.6mm，7μm）,固定进样环为50μL，流动相为乙腈-三蒸水(50：50),流速为0.5ml/min,紫外检测波长为220nm,柱温为室温。在此条件下褪黑素与血浆中内源性杂峰分离良好,详见图1。

1.5.2样品处理

取Beagle犬血浆1.5ml,加重蒸乙醚4ml,旋摇1min,静置5min,定量取有机层3ml,置于40℃水浴用氮气吹干,用50μL流动相复溶,进样40μL。

1.5.3标准曲线制备

在犬空白血浆中分别添加褪黑素标准品,使血药浓度为36.400、18.200、9.100、4.550、2.275、1.138ng/ml,按1.5.2项下方法进行处理和测定,所得数据经线性回归,得标准曲线方程。褪黑素峰面积(Y)与褪黑素浓度(X)的关系为Y=5.8896X-0.5126(r=0.9998)。

1.5.4方法回收率及日内、日间精密度试验

按规定方法进行测定,结果血浆中褪黑素含量的回收率为(97.90±6.76)%(n=15),日内、日间相对标准差(RSD)分别为(5.96±0.81)%(n=5)、(6.34±11)%(n=5)。

图1高效液相色谱

A.标准品；B.空白犬血奖；C.犬血样品；1.褪黑素

Fig1HPLC

A.referencesubstance;B.blankplasma;C.sample;1.melatonin

2结果

2.1Beagle犬灌服褪黑素片后血药浓度

6只Beagle犬分别灌服褪黑素片，每只3mg,其药-时曲线详见图2。

图2褪黑素在Bealge犬体内药-时曲线

Fig2Theconcenteation-timecurveofmelatonininthe

Beagledogs

图2结果表明,Beagle犬服用褪黑素片后,血药浓度迅速升高,约20min左右达峰,2h左右降至较低水平,其药-时曲线符合二室模型分布。提示本品在犬体内吸收快,消除也快。

2.2药动学参数

采用中国数学药理学会编制的3p97计算机软件计算各犬的药动学参数,结果详见表1。

表1褪黑素在Beagle犬体内的药动学参数

Table1Pharmacokineticparametersofmelatonininthebeagledogs

3讨论

褪黑素是一种神经传递激素，是由松果体细胞合成分泌的吲哚类神经激素，随着人的年龄的增长，褪黑素的分泌量逐步减少，促使机体老化。因此，补充体内褪黑素的不足，可抑制老化过程、延缓衰老，并促进睡眠[3]。本实验研究结果表明，犬灌服给予褪黑素后tmax平均为（0.50±0.18）h，Cmax平均为（11.27±3.77）ng/ml,而t1/2β平均为（1.21±0.52）h，约经过5个t1/2Ke后,其血药浓度几乎消除完毕，提示犬灌服本品后其体内药动学符合生理睡眠周期,睡前约20min～30min服用即可产生明显催眠作用，其作用可维持6h～8h，即清晨醒来后,体内药量已基本消除。

此外,对褪黑素含量的检测方法包括放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、气-质联用法(GC-MS)、液-质联用法(HPLC-MS)[4]。其中,RIA法简单灵敏,但需放射性试剂；GC-MS法需进行柱前衍生；HPLC-MS仪器昂贵,不宜推广。本研究采用RP-HPLC法,以乙腈-水(50:50)为流动相,紫外检测波长为220nm,结果令人满意,且此法简单可行、方法稳定,除可用于检测血药浓度外,还可对褪黑素在各种制剂中的含量进行检测,以控制产品质量。

参考文献

[1]徐峰,李经才,张杨,等.褪黑素的抗应激作用[J].沈阳药科大学学报,1996,13(1):18.

[2]卞俊,原永方,宣伟东,等.HPLC法测定安脑胶囊中褪黑素含量[J].药物分析杂志,2002,22(4):270.

[3]丁长海.褪黑素对肿瘤药物骨髓毒性的抑制作用[J].中国药理学学报,1996,12(6):576.

[4]崔小兵,赵晓莉,茅力,等.反相高效液相色谱法测定褪黑素胶囊的含量[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2001,17(5):306.