URG4及其钙网蛋白表达与结直肠癌预后之间的关系

URG4及其钙网蛋白表达与结直肠癌预后之间的关系

徐志峰王剑平蔡绍环陈聪王明元

徐志峰王剑平蔡绍环陈聪王明元

(南京军区福州总医院九五临床部普通外科福建莆田351100)

【摘要】目的检测URG4和钙网蛋白在结直肠癌、癌旁和正常组织中的表达及其与预后之间的关系。方法免疫组化法检测URG4和钙网蛋白在正常组织、结直肠癌组织及癌旁组织中的分布和表达情况，同时应用酶联免疫吸附法检测三种组织胰蛋白酶表达量，并分析三者表达的意义及临床表型之间的相关性。结果URG4在结直肠癌组织及癌旁的阳性表达高达74.5%和54.5%，而在正常组织中仅10.9%呈弱表达，其与远处转移的相关系数高达0.775和0.858(P<0.05)，钙网蛋白和胰蛋白酶呈显著正相关（r=0.982）并与患者的疼痛水平相关（r=0.847），但与URG4之间无明显相关性。结论URG4在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达高于正常组织且与远处转移密切相关，钙网蛋白和胰蛋白酶与患者的疼痛水平相关。

【关键词】URG4钙网蛋白胰蛋白酶结直肠癌

【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）32-0037-02

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其分子机制仍不清楚。已知URG4基因与肿瘤的形成密切相关，而钙网蛋白通过协助蛋白质的正确折叠，参与调节细胞凋亡等，由此，深入探讨二者与病理表型之间的关系，可为肿瘤预后提供实验依据[1-3]。同时考虑到胰蛋白酶在胃肠道中呈高表达而且也与肿瘤的发生、粘附、侵袭等行为密切相关[4-5]。因此本研究旨在探索URG4表达量与结直肠癌发病之间的关联以及钙网蛋白、胰蛋白酶等在癌及癌旁组织中的表达情况，以初步解释结直肠肿瘤的发生通过多分子参与的过程。

1对象和方法

1.1资料：55份结直肠组织取自福建医科大学附属第一医院和南京军区福州总医院附属第一医院2009年3月-2011年6月手术切除标本，经病理证实为结直肠癌。其中无淋巴结转移11例，有淋巴结转移44例。

1.2免疫组织化学染色：所有结直肠癌标本（癌、癌旁和正常组织）采用S-P法进行URG4和钙网蛋白免疫组织化学染色。

1.3胰蛋白酶检测：依照美国R＆D公司胰蛋白酶ELISA试剂盒操作程序将标本匀浆后，离心，取上清液用测定胰蛋白酶水平。

1.4统计学方法：用SPSS13.0软件包处理数据，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1免疫组织化学结果：结直肠癌组织中URG4和钙网蛋白的表达情况图1。

图1：URG4和钙网蛋白免疫组织化学结果

图1A:URG4在癌组织和癌旁组织均有不同程度的表达，分别高达74.5%（41/55）和54.5%（30/55），而正常组织中仅有6例（10.9%）呈弱表达。其与远处转移的相关系数高达0.775和0.858(P<0.05)。

图1B：钙网蛋白在癌组织中呈不均匀分布，阳性表达与URG4和肿瘤的转移均不存在明显相关关系，但与患者的疼痛水平相关（r=0.847）。

2.2结直肠癌组织中胰蛋白酶的表达与临床病理特征的关系：按不同年龄、肿瘤直径、病理类型及淋巴结转移分组，单因素分析表明：结直肠癌组织的胰蛋白酶水平显著高于癌旁，但是与肿瘤是否有淋巴转移无关。其不论是在癌组织还是癌旁组织表达均与钙网蛋白呈正相关（r=0.982）同样与患者的疼痛水平相关。

3讨论

Upregulatedgene4（URG4），一个新发现的基因，它位于7号染色体上，基因全长3607bp，编码922个氨基酸的蛋白，无同源基因，为一新癌基因。近期研究发现，此基因和细胞周期蛋白相关。在人的肝细胞癌中，URG4可被HBxAg上调表达，有资料证明在肝癌细胞株HepG2中URG4的过表达可促进体外培养组织及裸鼠的肝细胞生长和存活，所以URG4可能是导致肝癌形成的基因。鉴于此，URG4基因异常在肿瘤形成中的作用成为研究的热点。钙网蛋白是内质网/肌浆网主要的Ca2+结合蛋白，通过协助蛋白质正确折叠和维持细胞Ca2+稳态而参与调节细胞凋亡、黏附、类固醇敏感性基因表达和自身免疫反应等，并与多种人类疾病的发生、发展和预后相关，是一种能够较好的反映肿瘤活动的抗体类标记物[1-3]。肿瘤细胞能直接诱导机体产生抗核抗体，这些抗体没有种属、构象和序列特异性，大肠肿瘤细胞为活化细胞，活化细胞核抗原的改变可引起ANA生成，诱导出钙网蛋白等多种自身抗体。

本研究运用免疫组化法和ELISA法分别检测了结直肠癌组织、癌旁组织和正常组织中URG4和钙网蛋白的分布和表达情况，结果显示URG4与结直肠癌的发生存在密切相关而且是转移的指针，而钙网蛋白和胰蛋白酶同样可以作为癌性疼痛的指针，但不是结直肠的特异性标志。

结直肠癌5年生存率低，术后复发及其转移是主要原因，而目前的肿瘤标志物缺乏特异性和时效性[2,3]，URG4基因的表达水平与结直肠癌的远处转移密切相关，因此深入开展其基因型、蛋白表达水平及其时空分布将为结直肠的防治提供新的思路。

参考文献

[1]MungerK.Disruptionofoncogene/tumorsuppressornetworksduringhumancarcinogenesis.CancerInvest2002;20(1):71–81.

[2]TufanNL,LianZ,LiuJ,etal.HepatitisBxAntigenStimulatesExpressionofaNovelCellularGene,URG4,thatPromotesHepatocellularGrowthandSurvival.Neoplasia2002;4(3):355–368.

[3]SongJ,XieH,LianZ,etal.EnhancedCellSurvivalofGastricCancerCellsByaNovelGeneURG4.Neoplasia2006,8(10):995–1002.

[4]LiuQC,LinXH,LiuJF,etal.The-409C/TGenotypeofPRSS1ProtectsAgainstPancreaticCancerintheHanChinesePopulation.DigestDis&Sci2012;57(12):573-579.

[5]LiuQ,LiuA,GaoF,etal.CouplingTechniqueofRAPDandNano-electrochemicalSensorforMappingofPancreaticCancerGeneticFingerprint.IntJNanomedicine2011;6(11):2933-2939.