PDCD5和Livin蛋白在鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

PDCD5和Livin蛋白在鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

陆鸿略1张德利陈叶平

1.承德医学院附属医院耳鼻咽喉科河北承德067000；2.承德医学院附属医院麻醉科河北承德067000

摘要：目的：研究PDCD5及Livin蛋白在鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌（SNSCC）中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法及Westernblot技术分别检测54例SNSCC，30例鼻息肉（NP组）以及25例正常鼻腔粘膜（正常组）中PDCD5和Livin蛋白的表达情况。结果：PDCD5蛋白在SNSCC组织中的表达明显下调，而Livin蛋白的表达明显上调（P﹤0.05）。结论：PDCD5蛋白的失活和Livin蛋白的诱导可能与鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌组织的发生、发展密切相关，PDCD5蛋白有望为鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌的诊疗提供新的靶点。

关键词：鼻腔；鼻窦鳞状细胞癌；PDCD5蛋白；Livin蛋白；免疫组织化学；

AbstractObjective：ToexploretheexpressionandsignificanceofProgrammedCellDeath5（PDCD5）proteinandLivinproteininsinonasalsquamouscellcarcinoma（SNSCC）.Methods：ImmunohistochemicalmethodandWesternBlotmethodwasusedtodeterminetheexpressionofPDCD5andLivininspecimenofsinonasalsquamouscellcarcinoma（SNSCC）infifty-fourcases，nasalpolyps﹙NP﹚inthirtycases，andnormalnasalmucosaintwenty-fivecases.Results：TheexpressionofPDCD5proteininSNSCCsignificantlydecreased.ButtheexpressionofLivinproteininSNSCCup-regulatedobviously（P﹤0.05）.Conclusion：TheinactivationofPDCD5proteinandtheactivationofLivinproteinmayplayanimportantroleinthedevelopmentofSNSCC，andthereareapositivecorrelationbetweenPDCD5andLivinproteininSNSCC，whichmaybeidentifiedasanewtherapeutictarget.

Keywords：Sinonasalsquamouscellcarcinoma；ProgrammedCellDeath5；Livin；Immunohistochemicalmethod

本实验通过检测PDCD5和Livin蛋白SNSCC组织中的表达，来研究二者在SNSCC发生、发展中的作用。

1.资料与方法

1.1一般资料研究对象为2007年12月～2014年3月我院收治的54例原发SNSCC患者肿瘤组织。男34例，女20例，平均59.8岁，均为单一肿瘤无并发肝肾疾患。高分化5例，中分化29例，低分化20例。取中鼻甲部分切除术患者的中鼻甲黏膜组织（正常组）25例，以及鼻息肉（NP组）30例设为对照组。

1.2主要试剂鼠抗人PDCD5单克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司。兔抗人Livin多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。HRP标记的羊抗兔IgG二抗及ECL发光试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3检测方法

1.3.1免疫组织化学染色采用S-P法

对石蜡标本进行切片、烤片，二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，pH6.0柠檬酸缓冲液煮沸行抗原修复。SP法免疫组化染色，一抗的稀释浓度为1：100，DAB溶液显色，苏木素复染，脱水、透明，中性树胶封片。设阳性和阴性对照。

PDCD5及Livin表达采用相同判定标准[1]：PDCD5蛋白主要在细胞浆内或者细胞膜上出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。Livin蛋白表达主要定位在细胞质，光学显微镜下细胞质被染成淡黄至棕黄色的粗细不等的颗粒者为阳性表达。按照染色强度进行评分，0分无染色；1分轻微染色；2分中度染色；3分强染色。按照染色面积评分，0分无染色；1分细胞染色面积少于25%；2分面积为25%～50%；3分面积大于50%。综合两种标准结果，采用两种判定结果的乘积，参考标准：0分为（—）；1～2分为（+）；3～4分为（++）；5～6分为（+++）。

1.3.2Westernblot

取适量组织标本，加1ml含多种蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂，提取总蛋白。用BCA法测定蛋白浓度，将样品调成相同浓度，加入5×SDS凝胶加样缓冲液，沸水煮5min；恒压条件下做SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。以β-actin为内参切胶后，恒流条件下转移至PVDF膜上，先后将膜与一抗、辣根过氧化物酶标记二抗在摇床室温作用1h，加入ECL发光液暗反应5min，膜与胶片在暗室结合曝光、显影、成像。胶片经扫描后，用imageJ测定每条带的灰度值。与相应的内参β-actin的灰度值比值进行相对定量分析。

2结果

2.1免疫组织化学S-P法检测结果

PDCD5蛋白在SNSCC组织中的表达强度明显低于其他两组（P＜0.05）。而Livin蛋白在SNSCC组织中的表达强度与其他两组相比明显上调（P＜0.05）。PDCD5及Livin蛋白在不同病理分级的SNSCC组织中的表达强度没有差异（P﹤0.05）。见表1

表1PDCD5及Livin蛋白在SNSCC组织，NP组织以及正常鼻腔粘膜中的表达与病理分

3讨论

SNSCC的发生、发展是肿瘤细胞增殖和细胞凋亡两个过程共同作用的结果，细胞凋亡是在基因的调控下进行的，目前认为存在3类与细胞凋亡相关的基因：促细胞凋亡基因、凋亡抑制基因以及凋亡过程中表达的基因[2]。PDCD5是从白血病TF-1细胞中分离得来的一种促细胞凋亡基因。多项研究表明它可与其他多种凋亡诱导因素共同作用触发细胞凋亡，作为凋亡促进剂参与肿瘤细胞凋亡进程[3]。本研究结果显示，本组患者28例存在PDCD5蛋白的阳性表达，与NP组织及正常鼻腔黏膜组织中的高表达相比较，PDCD5蛋白在SNSCC组织中的表达显著下调。同时发现SNSCC组织分化程度越差，PDCD5蛋白的表达强度越低；SNSCC组织中PDCD5蛋白表达强度明显低于NP组织及正常鼻腔黏膜中的表达。此结果说明PDCD5蛋白的表达下调可能参与了SNSCC的发生、发展。

Livin蛋白是凋亡抑制蛋白家族的成员之一[4]。Livin抑制细胞凋亡作用主要通过BIR区与Caspase酶结合，抑制凋亡的终末效应器Caspase-3、7、9的活性，从而达到阻断凋亡受体及以线粒体为基础的凋亡途径而起作用。本实验研究表明，Livin蛋白在SNSCC组织中的表达上调，提示Livin抗凋亡作用可能在SNSCC的发生发展中起到关键作用。Livin表达与SNSCC组织分化程度呈显著相关（P﹤0.05）。SNSCC组织分化程度越低，Livin阳性表达率越高。提示PDCD5蛋白可能通过抑制Livin蛋白的表达，从而间接调节Caspase-3的激活，达到促进细胞凋亡的作用。这与白艳等[5]研究结果一致。

综上所述，PDCD5蛋白表达阳性与SNSCC的发生、发展呈负相关，而Livin呈正相关。但还需大量的实验来进一步阐明两者对SNSCC的作用，以期通过对两者的蛋白检测，做到对SNSCC的早期诊断，并为SNSCC的治疗提供新的途径。

参考文献：

[1]LymphnodemetastasisinsinonasalsquamouscellcarcinomatreatedwithIMRT/3D-CRT[J].OralOncology，2013，49（1）：60-65.

[2]PDCD5negativelyregulatesautoimmunitybyupregulatingFOXP3（+）regulatoryTcellsandsuppressingTh17andTh1responses[J].JournalofAutoimmunity，2013，47（1）：34-44.

[3]JiangJ.ProgrammedCellDeath5FactorEnhancesTriptolide-inducedFibroblast-likeSynoviocyteApoptosisofrheumatoidarthritis[J].ArtifCellsBloodSubstitImmobilBiotechnol，2010，38（1）：38-42.

[4]TheInvolvementofProgrammedCellDeath5（PDCD5）intheRegulationofApoptosisinCerebralIschemia/ReperfusionInjury[J].CNSNeurosciTher，2013，19（8）：566-576.

[5]白艳，郑晓永，郭长青，等。PDCD5和Livin在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义[J]。中国现代医学杂志，2011，21（31）：3890-3893.