P16蛋白表达在宫颈上皮内瘤变中的诊断价值

P16蛋白表达在宫颈上皮内瘤变中的诊断价值

王忠文程涛沈红

王忠文程涛沈红（云南省昭通市第一人民医院病理科云南昭通657000）

【摘要】目的探讨P16蛋白在宫颈组织中的表达及其在宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)中的诊断价值。方法应用免疫组化SP法检测P16蛋白在162例宫颈良性病变、低级别宫颈上皮内瘤变（CINⅠ级）、高级别宫颈上皮内瘤变（CINⅡ级-Ⅲ级）及宫颈鳞状细胞癌（SCC）中的表达，并对其表达和意义进行分析。结果宫颈良性病变中P16表达率为0%，CINⅠ中P16表达率为78.4%且多为点灶状表达，CINⅡ-Ⅲ中P16表达率100%且多为带状或弥漫强阳性表达，各组之间差异显著（P<0.05）。结论P16可以作为宫颈良性病变、CINⅠ及CINⅡ-Ⅲ之间鉴别诊断的一个有用的标记物。

【关键词】P16蛋白宫颈上皮内瘤变

【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）02-0041-01

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌，高居女性恶性肿瘤的第二位。目前的研究表明，几乎所有的宫颈鳞状细胞癌（SCC）都要经过宫颈上皮内瘤变（CIN)阶段，而且绝大多数与高危型人乳头状瘤病毒（highriskhumanpapillomavirus，HPV16/18）的持续感染有关。近年来，宫颈癌的发病在年轻女性中的发生率有明显上升趋势。P16是宫颈上皮肿瘤的高度敏感标记物，在HPV感染引起的宫颈癌病变中起着重要作用[1]，本研究采用免疫组化SP法检测P16蛋白在宫颈病变中的表达，探讨其在宫颈上皮内瘤变中的诊断价值。

1材料与方法

1.1材料选取云南省昭通市第一人民医院病理科2012年1月至2012年12月间的宫颈标本162例，其中宫颈良性病变40例，CINⅠ37例，CINⅡ-Ⅲ59例，SCC26例。所选病例均由2名高年资病理医师以双盲法做出相同诊断。

1.2方法标本均采用10％中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片厚度3um，免疫组化染色采用SP法，DAB显色，以PBS缓冲液（0.01mol/L，pH7.4）代替第一抗体作阴性对照，用已知阳性组织切片作阳性对照。所用单克隆抗体P16、SP试剂盒、DAB显色剂及阳性对照片均由福州迈新生物技术开发有限公司生产。操作严格按SP试剂盒说明书进行。

1.3结果判定P16阳性为细胞核与细胞质中出现棕黄色颗粒，定位于细胞核或细胞质中，计数宫颈鳞状上皮中的阳性细胞数，＜5％为（-），5％-25％为（+），26％-50％为（++），>50％为（+++）。

1.4统计学分析采用SPSS16.0统计学软件，设P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

在宫颈良性病变中P16表达为阴性，CINⅠ中P16阳性率78.4％，主要为点灶状表达，CINⅡ-Ⅲ中P16表达率100％，主要为弥漫阳性表达，SCC中表达率100％，且为弥漫阳性表达，各组之间差异显著（P<0.05），见附表。

图3CINⅡ累及腺体P16弥漫（+）SP法

图4CINⅢ累及腺体P16弥漫（+）SP法

图7-10SCC弥漫强（+）SP法

3讨论

P16蛋白是一种抑癌基因，定位于9p21，由3个外显子和2个内含子组成，是细胞周期G1→S期的重要调控者和抑制肿瘤细胞生长的关键因子。当P16基因异常不能正常表达P16蛋白时，cyclingD则与CDK4优势结合，刺激细胞生长、分裂，细胞表型发生变化[2]。自从1998年Sano等通过研究指出，P16可以作为宫颈上皮内瘤变的一个诊断标记物用于病理诊断工作。本实验结果显示[3]，大部分学者研究指出，P16散在点状弱阳性常预示低危型HPV感染的低级别CIN，而P16弥漫性或带状强阳性表达则预示高危型HPV感染的高级别CIN。本实验结果显示，P16蛋白在宫颈良性病变中表达为阴性，而在低级别宫颈上皮内瘤变（CINⅠ级）、高级别宫颈上皮内瘤变（CINⅡ级～Ⅲ级）及宫颈鳞状细胞癌（SCC）中均有表达，并且随着宫颈病变程度的加重，P16表达强度和阳性表达率有升高趋势，与Murphy等的检测结果相符[2]。P16的表达有明显的分层现象，在CINⅠ级中，阳性细胞主要局限于中下层，而在CINⅡ级-Ⅲ级及SCC中，阳性细胞常超过上皮层的下2／3直至全层，这与Lambert等[4]的结论类似。

综上所述，从CIN到SCC是一个连续发展的过程，目前对于宫颈良性病变、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及SCC的临床处理完全不同，早期诊断CIN是降低SCC发生的关键。本实验表明，P16是宫颈良性病变与CINⅠ以及CINⅠ与CINⅡ-Ⅲ、SCC之间鉴别诊断的一个有用的标记物，可帮助病理医师提高对宫颈癌及癌前病变的诊断准确率。

参考文献

[1]BalanR,SimionN,GiuscǎSE,etal.Immunohistochemicalassessmentofp16,COX-2andEGFRinHPV-positivecervicalsquamousintraepitheliallesions[J].RomJMorpholEmbryol,2011,52(4):1187-1194.

[2]顾依群，高子芬，汪颖南，等.p16、p53、ki67及ER在宫颈病变中表达的临床意义[J].诊断病理学杂志，2008,15（2）：133.

[3]SanoT,OyamaT,KashiwabaraK,etal.Immunohistochemicaloverexpressionofp16proteinassociatedwithintactretinoblastomaproteinexpressionincervicalcancerandcervicalintraepithelialneoplasia[J].Pathollnt,1998,48(8):580-585.

[4]LambertAP,AnschauF,SchmittVM.p16INK4Aexpressionincervicalpremalignantandmalignantlesions[J].ExpMolPathol,2006,80(2):192-196.