硫化氢对血管钙化的影响

硫化氢对血管钙化的影响

李莉1吴胜英2彭吉霞1（通讯作者）

李莉1吴胜英2彭吉霞1（通讯作者）

（1.湖北医药学院机能学实验室湖北十堰442000）

（2.湖北医药学院病理生理学教研室湖北十堰442000）

【摘要】目的：研究硫化氢（H2S）对血管钙化的影响。方法：选取健康雄性SD大鼠40只作为研究对象，随机分四组，分别建立血管钙化模型、引入低/高剂量H2S的血管钙化模型机空白对照组，比较不同组别大鼠的钙化相关指标。结果：钙化组大鼠的主动脉组织钙含量、45Ca2+沉积、碱性磷酸酶活性都显著高于对照组，而在钙化的基础上给予NaHS的大鼠与钙化组相比均显著降低，比较均有统计学差异（P＜0.05）。结论：引入硫化氢能够有效降低血管钙化程度。

【关键词】硫化氢；血管钙化；影响

【中图分类号】R363【文献标识码】B【文章编号】1003-5028（2015）8-0634-01

本文通过大鼠模型的建立来分析硫化氢对血管钙化的影响。具体报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取健康SD大鼠40只作为研究对象，大鼠均为雄性，体重在180g-220g之间，平均（203.4±20.5）g。

1.2方法

1.2.1血管钙化模型的建立

将其随机分为四组，每组均为10只取。分别对其进行造模处理。

钙化组的大鼠经肌肉注射维生素D3，给药剂量为3×105U/kg，同时给予尼古丁灌胃处理[1](尼古丁的给药剂量为25mg/kg。将其溶于花生油中进行操作)。9h后再次对大鼠进行灌胃处理。

钙化+低剂量NaHS组的大鼠经常规钙化处理之后，分两次经腹腔注射NaHS，NaHS需为新配制的，给药剂量为2.8μmol/(kg?d)，给药时间为4周。

钙化+高剂量NaHS组的大鼠处理方法同上，但H2S的给药剂量增加至14μmol/(kg?d)。

对照组的大鼠选择通过生理盐水肌肉注射和单纯花生油灌胃的方法做空白对照。

实验前，每组大鼠的体重、健康状态等的比较均无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。

所有四组大鼠均在常规条件下进行四周得到饲养，然后通过腹腔注射氨基甲酸乙酯的方式实施麻醉，对其进行血压描记后。分别对大鼠实施分离血浆、摘取胸腹主动脉的操作，血浆置冰箱中待检，升主动脉（取5mm左右）经多聚甲醛固定。

1.2.2检测方法

血管组织中的总钙含量及45Ca2+沉积的测定

将多聚甲醛固定的升主动脉10mg用滤纸吸干后进行称重，依次经HN03酸化、高温消化、冷却、加去离子水复溶、加氯化锶处理后，测定波长为422.7nm条件下的吸光度，对组织中的总钙含量进行测定。另取升主动脉血管20mg制作大小为1mm×1mm的组织薄片，将其置于K-H液中浸泡，并依次加入45CaCl2和二氧化碳进行平衡，经振荡、混匀、孵育等一系列的处理后（12h），分别以K-H液、甲酸进行冲洗和消化，定量蛋白后加闪烁液，以β-液闪烁仪进行45Ca2+放射强度的测定。

血管碱性磷酸酶活性测定

取血管组织10mg，用磷酸缓冲液制备组织匀浆后离心，以考马斯亮蓝法度上清液进行蛋白定量，并以金氏法对磷酸酶ALP活性进行测定。

1.3统计学方法

本次实验数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计数资料采用百分数表示，并做卡方检验，以p＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

比较钙化组与空白对照组大鼠的各项指标，可见其主动脉组织钙含量、45Ca2+沉积、碱性磷酸酶活性都显著高于对照组，而在钙化的基础上给予H2S的大鼠与钙化组相比均显著降低，比较均有统计学差异（P＜0.05）。见表1。

3讨论

临床实践研究证明，血管钙化在心血管疾病的发生与发展中起着十分重要的作用。动脉粥样硬化斑块破裂、血栓形成、血管僵硬等都是血管钙化可能引起的结果[2]。传统的研究都认为钙盐被动沉积是引起血管钙化的主要原因[3]，而随着研究的深入可以发现，血管钙化的形成过程中是一个主动可调节的过程，且在此过程中，有多种细胞因子、心血管活性肽、气体信号分子等共同参与。硫化氢就是其中一种气体信号分子，内源性的硫化氢在机体中同时发挥着抑制凋亡、促进血管舒张，抑制内皮素刺激下的平滑肌细胞的增殖以及抑制血管重构及活性氧产生等多种[4,5]。临床上关于硫化氢对血管钙化的影响尚并没有过多的研究报道。

本文通过对大鼠建模的方式对不同情况下大鼠的主动脉组织钙含量、45Ca2+沉积、碱性磷酸酶活性等指标进行了比较，发现引入NaHS之后，血管钙化大鼠的上述指标均显著改善，而机体中的H2S和NaHS可以相互转化并保持动态平衡，说明对血管钙化的大鼠补充外源性的H2S能够对血管钙化的生进行有效抑制，为经CSE/H2S途径干预实现防止或减轻血管钙化的情况提供了新思路。

参考文献：

[1]吴胜英，潘春水，耿彬，等．外源性硫化氢对大鼠血管钙化的影响[J］．基础医学与临床，2006，26(5）：466-467．

[2]王祥，姜志胜．硫化氢与动脉粥样硬化钙化的关系研究进展[J］．中国现代医药杂志，2009，11(11）：119-120．

[3]顾俊，卢竞前，李易；硫化氢与心血管疾病研究进展[J］．实用医药杂志；2009,26(9):84-86

[4]刘银花，杨汉文，王小同；硫化氢在循环系统中的作用[J］．温州医学院学报，2011，1(41):96-98

[5]邓生琼；周显琎；王珺；龚坚；徐增光；硫化氢对氧化损伤心肌细胞凋亡的影响[J］．武汉大学学报，2009,1