刘艳丽张丽娜
山东省寿光市妇幼保健院262700
摘要:目的:探讨高迁移族率蛋白1(HMGB1)在ⅢB期结肠癌组织中的表达及其在临床诊断治疗中的意义。方法:选取本院86例经手术切除的ⅢB期结肠癌患者的结肠癌组织标本,以及30例癌旁组织、32例正常结肠组织。采用免疫组织化学染色法检测HMGB1,比较HMGB1水平以及分布状况。同时,分析其与CD3+细胞和CD45RO+细胞浸润密度的关系,最后比较结肠癌患者5年的随访资料,统计HMGB1水平和部位与患者术后1年、3年、5年的死亡率的关系。结果:(1)ⅢB期结肠癌组织切片中HMGB1呈强阳性表达,癌旁组织中HMGB1表达较少,正常结肠组织无表达。(2)HMGB1表达越弱,CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低,且HMGB1主要在细胞核中表达,少数由核质共同表达。(3)HMGB1表达水平与死亡率相关性不明显;而表达部位与患者死亡率具有显著相关性,核质共表达的患者5年内死亡率(56.0%)显著高于核表达组(21.3%)。结论:HMGB1在ⅢB期结肠癌患者组织中有强烈表达,CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越高,患者预后越好,死亡率越低,为ⅢB期结肠癌患者预后的关键。
关键词:高迁移族率蛋白1;ⅢB期结肠癌
1资料与方法
1.1一般资料
本文研究对象为86例经外科手术手术切除的ⅢB期结肠癌组织的石蜡包埋标本,均为腺癌,患者于2008年3月~2009年4月内于我院就诊。其中男59例,女27例,年龄在48~76岁之间,60岁以上50例,60岁以下36例,平均年龄64.7±9.5岁;按照病理分级,Ⅰ级14例,Ⅱ级63例,Ⅲ级9例;原发部位为左半边结肠有52例,右半边结肠34例。所有患者均经病理学检查确诊为ⅢB期结肠癌。另选取30例结肠癌旁组织标本和32例正常结肠组织标本作为对照。
1.2方法
选取本院86例经手术切除的ⅢB期结肠癌患者的结肠癌组织、30例癌旁组织、32例正常结肠组织标本,制成石蜡包埋切片。采用免疫组织化学染色法进行HMGB1的检测(试剂盒购自上海信然生物技术有限公司),比较染色后颜色深浅,分析HMGB1水平以及分布状况。同时,分析HMGB1与CD3+细胞和CD45RO+细胞浸润密度的关系,以考察HMGB1与淋巴转移的相关性。此外,对所有患者进行5年的随访,统计HMGB1水平和部位与患者术后1年、3年、5年的死亡率的关系。
1.3免疫组织化学法
切取癌组织,福尔马林固定24小时,酒精逐级脱水,石蜡包埋,然后制成组织切片,脱腊至水后,采用3.3%H2O2处理10min,以防止非特异性染色。再以去离子水洗8min*3次,缓冲液浸泡5min,3.3mol/L尿素消化20min,柠檬酸修复,缓冲液浸泡5min,擦干片子后将其置于湿盒内,血清封闭30min;滴加一抗(3μg/ml),4℃条件下冷藏;第二天,取出片子后,37℃恢复30min,缓冲液浸泡5min*3,滴加二抗,37℃孵育30min,缓冲液振洗5min*3;滴加ABC酶复合物,再次于湿盒孵育30min,缓冲液振洗5min*3;以二氨基联苯胺显色12~20min,自来水清洗,再以苏木素淡染,蓝化,酒精逐级脱水,透明,封片。癌旁组织和正常组织检测方法同上。
2结果
2.1三种标本HMGB1表达程度通过免疫组织化学染色法比较三组标本的染色程度,可见ⅢB期结肠癌组织切片染色最深,其中HMGB1呈强阳性表达,癌旁组织中HMGB1表达较少,正常结肠组织无表达,因此,HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中表达较多,可作为诊断的参考指标之一。
图1三组标本HMGB1表达程度比较
2.2结肠癌细胞淋巴转移情况由表1可知,HMGB1表达越弱,CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低,且HMGB1主要在细胞核中表达,少数由核质共同表达,在细胞核中表达的淋巴细胞浸润密度较高,CD3+细胞在大于16细胞/400倍视野占比83.6%,CD45RO+细胞在大于24细胞/400倍视野中占比86.9%。总之,淋巴细胞浸润密度与HMGB1表达水平和分布状况有显著相关性,P<0.01,可见HMGB1表达水平和分布状况于淋巴转移有一定联系。
2.3HMGB1在淋巴细胞中的浸润密度与患者死亡率的相关性分析统计5年内患者死亡率,可见HMGB1表达水平越高,死亡率越偏低,但差异不明显;而表达部位与患者死亡率具有显著相关性,核质共表达的患者5年内死亡率(56.0%)显著高于核表达组(21.3%),P<0.01。
3讨论
ⅢB期结肠癌即癌症中晚期,此时已有癌细胞转移,局部淋巴转移较为常见,也导致了结肠癌ⅢB期难以治愈。HMGB1与肿瘤的发生、生长、浸润、转移密切相关,该蛋白参与相关癌基因的转录,分泌到细胞外参与肿瘤细胞浸润性生长,,是目前唯一已知的与肿瘤有关的HMB家族成员。本文拟研究HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中的表达水平和部位,及其与患者死亡率的关系,以期为结肠癌治疗和预后提供借鉴。
本文研究结果显示,ⅢB期结肠癌组织切片染色最深,其中HMGB1呈强阳性表达,癌旁组织中HMGB1表达较少,而正常结肠组织无表达,因此可推断因此,HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中表达较多,可作为诊断的参考指标之一。表2可看出,HMGB1表达越弱,CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低,且HMGB1主要在细胞核中表达,少数由核质共同表达,在细胞核中表达的淋巴细胞浸润密度较高。由于CD3+和CD45RO+细胞为主要淋巴细胞,此现象可看出HMGB1表达与结肠癌细胞淋巴转移过程有密切联系。死亡率统计显示,HMGB1表达水平越高,死亡率越偏低,但差异不明显;而表达部位与患者死亡率具有显著相关性,核质共表达的患者5年内死亡率(56.0%)显著高于核表达组(21.3%),P<0.01。因此,上述证据共同说明。
参考文献:
[1]郑舒.RARα在结肠癌组织中的表达及其临床意义[D].山东大学,2012.
[2]王丹.癌胚基因Cripto-1(CR-1)在原发结肠癌组织中的表达及其临床意义[J].中国保健营养,2012,22(9):3060.