肺炎支原体抗体测定的血清学方法比较

肺炎支原体抗体测定的血清学方法比较

郭立新1于浪

郭立新1于浪2

(1辽宁省新民市人民医院检验科110300；2沈阳医学院附属中心医院检验科110031)

【摘要】目的探讨早期诊断肺炎支原体(MP)感染的实验室检测方法。对四种方法的诊断特异度和灵敏度进行比较。结论建议用明胶颗粒凝集法作为支原体肺炎早期感染诊断的方法，为临床提供快捷可靠的诊断依据。

【关键词】肺炎支原体胶体金渗滤法明胶颗粒凝集法ELISA法冷凝集试验法

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2014）20-0258-02

前言支原体肺炎是肺炎支原体(MycoplasmapneumoniaeMP)引起的急性呼吸道感染性肺炎，过去称为“原发性非典型肺炎”的病原体中，肺炎支原体最为常见，可引起流行，约占各种肺炎的10％，严重的支原体肺炎也可导致死亡。其感染的临床表现多种多样，可引起全身各脏器官损害，但以呼吸道感染最常见，仅依据临床表现很难与病毒及细菌等感染相鉴别[1]。

一、标本与方法

1、标本来源

94例血清标本来源于沈阳医学院奉天医院2012年8月~2013年5月期间儿科病区住院确诊为支原体肺炎患者，男性58例，女性36例，年龄1.5月~13岁。所有血液标本均于病程达到5天后采集。

2、试剂来源

明胶颗粒凝集试验试剂由珠海丽珠试剂有限公司提供的日本富士瑞必欧株式会社SERODIA-MYCOII试剂盒，ELISA试剂采用德国NovaTec公司的试剂盒，胶体金渗滤试验试剂由美国AltruBlomedical公司生产。

3、检验方法

所有血清标本分别用胶体金渗滤试验法、明胶颗粒凝集法、ELISA法和冷凝集试验进行检测，具体操作严格按照各试剂盒说明书进行。

3.1胶体金渗滤试验法

血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～8℃条件保存不超过一周，高脂血症血清不能使用反应板48人份/盒，试剂Ⅰ：1瓶0.02mol/LPH7.4PBS

试剂Ⅱ：1瓶胶体金标记物

具体操作严格按照各试剂盒说明书进行。

阳性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端出现红色圆斑，为肺炎支原体抗体阳性；

阴性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端不出现红色圆斑，为肺炎支原体抗体阴性。

3.2明胶颗粒凝集法

采用珠海丽珠试剂有限公司提供的日本富士瑞必欧株式会社SERODIA-MYCOII试剂盒，以待检血清抗体滴度≧1:40为阳性。

具体操作严格按照各试剂盒说明书进行。

3.3ELISA法

采用德国NovaTec公司的试剂盒,操作及结果判断按说明书进行。

3.4冷凝集试验

按《中华医学检验全书》中“冷凝集素测定”进行操作，滴度≧1:64为阳性。

具体操作严格按照各试剂盒说明书进行。

3.5临床支原体肺炎诊断标准[2]

①发热呈驰张热或不规则热；刺激性咳嗽，咳非脓性痰，偶带血丝；②年长儿常有咽痛、头痛、胸痛，口腔溃疡，鼻衄及皮疹；婴儿表现为呼吸困难，喘憋：③全身症状比体征明显，肺部体征不典型而胸片炎症表现显著，可见云雾状大片阴影：④白细胞计数大多正常或稍增高，红细胞沉降率多增快：⑤内酰胺类及磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始即使用大环丙内脂类抗生素有效。

4.统计学方法：采用X2检验。

二、结果

1、94例呼吸道感染患儿中，ELISA检出阳性28例，阳性率为29.8%；明胶颗粒凝集试验检出阳性50例，阳性率为53.2%；胶体金渗滤试验检出阳性结果15例，阳性率为16%；冷凝集试验检出阳性22例，阳性率为23.4%。

2、四种方法标本中抗-MP-IgM检测结果的比较见表1。

表1

注:表1中X2值和P值为1和2、1和3、1和4的比较结果；2和3比较；X2=2.6，P>0.05；2和4比较X2=37.7，P<0.05；3和4比较，X2值=21.8，P<0.05。

三、讨论

近年来小儿肺炎支原体感染的发病率日益增加，肺炎支原体IgM抗体在感染后第3天即可升高，1周左右即可查出，1个月后可达高峰。肺炎支原体IgM阳性可作为急性期感染的诊断指标。

MP感染的实验室诊断方法大致分为三类[3]：病原体的分离与培养、血清学检查以及PCR诊断技术。其中，MP的分离培养虽然是最可靠的确诊依据，但存在着临床标本中病原体含量少、呼吸道污染的杂菌较多、分离培养需要时间长以及阳性率低等缺点，因而不能作为临床快速诊断的方法；而PCR诊断技术虽然在MP的感染诊断中已得到较好的应用，但试验对仪器设备的要求相对较高，并且操作也较为繁琐，因而也不能满足临床快速诊断的需要。所以，目前MP感染的实验室诊断仍然主要依靠血清学试验，而抗-MP-IgM抗体是机体受MP感染后最早产生的特异性抗体，于发病后1周左右可检出，约2~4周达到高峰，一般12~16周转阴，检测抗-MP-IgM抗体可以早期诊断MP感染。

从本研究结果可知，4种方法中明胶颗粒凝集法测定肺炎支原体IgM抗体的阳性率最高，较国内报道低[4]；ELISA测定肺炎支原体IgM抗体的阳性率与国内报道的相近[5-6]；冷凝集试验和胶体金渗滤试验测定肺炎支原体IgM的阳性率最低。明胶颗粒凝集法与其他三种方法比较，其检测敏感性最高，操作简便，无需仪器设备，缺点是试剂成本相对较高。胶体金渗滤试验和冷凝集试验敏感性低，不宜采用。ELISA操作比较复杂，需要仪器设备，还存在一定的假阳性。因此明胶颗粒凝集法可作为一个比较好的方法，为临床提供快捷可靠的诊断依据。

四、结论

建议用明胶颗粒法作为检测肺炎支原体早期感染的试验诊断方法，为临床提供快捷可靠的诊断依据。

参考文献

[1].GwyneldA,BendersC.TtascriptionalAnalysisoftheConservedftszgeneclusterinmycoplasmagenitaliumandmycoplasmapneumoniae.JournalofBacteriology,2005,187(13):4542-4551

[2].崔振泽，陶哲．多聚酶链反应在肺炎肺炎支原体诊断中的应用[J]．小儿急救医学杂志，2004，11(2)：124

[3].庞保军，肺炎支原体实验室检测方法进展及其临床应用[J]．临床肺科杂志，2004，9（5）：515

[4].唐丽萍，葛青玮，蒋巍．呼吸道感染患儿1379例肺炎支原体IgM抗体的检测[J]．山海医学检验杂志，2001，16（4）：249-250

[5].张伟珍，1563例患儿肺炎支原体检测分析[J]．浙江预防医学，2000，12（6）：46

[6].张利通，连建谦，刘莉，等。肺炎支原体抗体检测阳性率差异分析[J]．临床和试验医学杂志，2007，6（3）：129