HPLC测定清眩丸（水丸）中欧前胡素的含量

HPLC测定清眩丸（水丸）中欧前胡素的含量

王亚辉1孔新颖1李元宾1韩风雨2李洪泽3王蕊

王亚辉1孔新颖1李元宾1韩风雨2李洪泽3王蕊

（（1.内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司024000；2.内蒙古天奇药业投资（集团）有限公司024000；

3.内蒙古博泰现代蒙药制剂研究开发有限公司024000；4.内蒙古呼伦贝尔市卫生学校162650）

【摘要】目的：建立HPLC法测定清眩丸（水丸）中欧前胡素的含量。方法：采用AgilentZORBAXSB-C18柱（5um，4.6×250mm），流动相为甲醇-水-磷酸（62:38：0.5），流速为0.8mL·min-1,检测波长为248nm，柱温35°C。结果：欧前胡素在上述色谱条件下，分离效果良好，在15.4～138.6ng范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系，r=0.9991，加样回收率99.182%。结论：本法简便，准确，灵敏度高，重现性好，可用于该药品的含量测定。

【关键词】清眩丸；欧前胡素；HPLC

【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】1671-8725（2014）12-0101-02

清眩丸（水丸）是由白芷、川芎、薄荷等五味药材生药原粉加水制得的水丸，是一种具有散风清热功效的中药，用于风热头晕目眩，偏正头痛，鼻塞牙痛的治疗[1]。白芷中欧前胡素具有兴奋交感神经，抗炎镇痛等作用[2-3]。欧前胡素和异欧前胡素是白芷中主要活性成分[4]。为了控制清眩丸的质量，我们选定欧前胡素为清眩丸的指标性成分，并选用高效液相色谱法对其进行了研究。实验结果表明，本方法简便、快速、准确[5]。

1仪器与试药

高效液相色谱仪：仪器型号：LabAlliance；检测器：LabAlliance泵：LabAlliance；色谱工作站：ANASTAR；AgilentZORBAXSB-C18柱（5um，4.6×250mm）试剂：甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水；其它试剂均为色谱纯；对照品：欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所批号110826-200712）；样品：由内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司提供和生产。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18柱（5um，4.6×250mm）；流动相：甲醇-水-磷酸（62:38:0.5）；流速：0.8mL·min-1；检测波长：248nm柱温：35℃。理论塔板数按欧前胡素峰计算应不低于2500。

2.2对照品溶液的制备

取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取装量差异下的本品，研碎，取本品粉末（过五号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率50kHZ）40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性溶液的制备

处方中除了药材白芷，其余等四位药材按比例称取适量，粉碎，取本品粉末（过五号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率50kHZ）40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液5ml和阴性溶液10ml，注入液相色谱仪中，结果在液相色谱图上，欧前胡素峰保留时间相应的位置上无吸收，表明其它成分对本品中欧前胡素含量测定无干扰。方法的专属性良好。

2.5线性关系考察

精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含欧前胡素15.4ug的对照品溶液。分别精密吸取该溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液10ml注入液相色谱仪，记录色谱图[6]，测定其峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，欧前胡素量（ng）为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：y=3223.4x-152.6r=0.9991。结果如下。

实验结果表明欧前胡素在15.4～138.6ng范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.6稳定性试验

分别精密吸取同—份供试品溶液10ul，于0、5、10、15、20h进样，测定峰面积，结果RSD为0.93％，表明供试品溶液在20h内稳定性良好。（表2）

以上实验结果表明，供试品溶液在20小时内基本稳定。

2.7精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液10ml，按色谱条件，重复进样5次，测定其峰面积，结果RSD为1.24%，表明精密度良好。（表3）

2.8重现性试验

取同一批样品（批号为101015）5份，按供试品溶液制备方法平行处理并测定，计算含量，测得平均值为0.474mg/g，RSD为1.89%，表明重现性良好。（表4）

结论：制备的6批样品经含量测定，结果均符合含量限度要求。

3讨论

3.1检测波长的选择

精密称定欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，在200nm～600nm的波长范围内扫描。本品在248nm波长处有最大吸收波长。

3.2流动相的选择

参考《中国药典》2010年版一部清眩丸质量标准含量测定项下要求，采用甲醇-水（63：37）为流动相，结果表明欧前胡素峰与杂质峰分离效果较差,分离度小于1.5，经过实验条件摸索,以甲醇-水-磷酸(62:38:0.5)为流动相,分离效果较好,达到药典要求。

测定结果表明，选用欧前胡素作为定量检测指标以及建立的色谱条件，方法灵敏度高、专属性强、重现性好，并通过对6批样品含量进行考察，可作为清眩丸质量控制指标[6-12]。

3.3提取方法的选择

选取甲醇为溶媒，以欧前胡素提取量为考察指标，考察方法为：取本品适量，研碎，取本品粉末（过五号筛）0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率50kHZ）40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液5ml和供试品溶液10ml，注入液相色谱仪中，按前述色谱条件进行分析。（表8）

根据以上试验结果，样品中欧前胡素含量转移率为96.0%（大于95%）,基本提取完全，因此本品的提取溶剂和提取方法可行。

参考文献

[1]中华人民共和国药典（一部）2010版.

[2]刘文，韩笑，王学勇。超临界CO2萃取白芷中欧前胡素的研究[J].中国药学杂志.2003，38（2）：99.

[3]黄玉伟，陈晓辉，霍艳双，毕开顺.白芷提取物欧前胡素在大鼠体内的药物动力学[J].沈阳药科大学学报.2008.25(3):215-218.

[4]阴建，郭力弓.中药现代研究与临床应用.第一卷.北京：学苑出版社，1995.259.

[5]黄志兵，李来生.色谱技术进展及应用[J].江西化工，2002，（3）：14.

[6]贾敏如，王梦月，金曲嫫.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志，2003，18（5）：361.

[7]彭菲，张胜，刘塔斯，等.四倍体白芷药材中欧前胡素的含量测定[J].中国中药杂志，2002，27（6）：426.

[8]邓捷圆，高广慧，赵春杰，等.HPLC法同时测定不同产地白芷中2种香豆素的含量[J].沈阳药科大学报，2004，21（5）：354.

[9]刘萍.HPLC法测定白芷提取挥发油前后欧前胡素含量[J].实用中医药杂志.2004，20（8）：470.

[10]肖永庆，李丽，游小琳，等.白芷质量标准研究[J].中国中药杂志，2004，29（7）:654

[11]张翠英,朱宝珠,李振国,王青晓,崔援军.白芷饮片质量研究[J].中国药品标准.2007.8(6):58-61.

[12]魏玉平，刘俊.白芷治疗头痛的提取工艺评判指标的研究[J].中草药，2001，32（4）：318.