Stathmin、βⅢ-tubulin及LRP在非小细胞肺癌

Stathmin、βⅢ-tubulin及LRP在非小细胞肺癌

潘鑫焱李志民霍伟高羽

潘鑫焱李志民霍伟高羽（大连市中心医院辽宁大连116033）

【摘要】目的探讨非stathmin、βⅢ-tubulin及LRP在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学技术（ElivisionTMplus法），检测NSCLC组织中stathmin、βⅢ-tubulin及LRP的表达情况。结果非小细胞肺癌肺癌（NSCLC）组织中stathmin、βⅢ-tubulin及LRP的阳性表达率较癌旁组织表达明显升高(P<0.05)，且三种蛋白的阳性表达率具有一定的相关性。结论联合检测stathmin、βⅢ-tubulin及LRP蛋白对预测肿瘤的发生、发展以及预后有着重要的意义。

【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）39-0149-02

肺癌目前是人类最常见的恶性肿瘤之一，亦是病死率最高的恶性肿瘤之一，肺癌是一种以烟草为主要病因的独特疾病，美国85%-90%以上的肺癌是由于主动吸烟或被动吸“二手”烟所致，而在中国为87%，其中大约有80%为非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC），且5年生存率很低，不足15%[1]。化疗在肺癌的治疗中扮演着举足轻重的角色，由于化疗药物与肿瘤组织之间存在着多种相互作用，故即使是相同的化疗药物，用在病理类型、临床期别相同的患者身上，也常会产生截然不同的疗效。药物基因组学（pharmacogenomics）和药物遗传学（pharmacogenetics）的飞速发展已经证明：肿瘤组织的基因表达情况与NSCLC化疗的疗效有着密切关系。因此，根据患者肿瘤组织的基因表达情况选用特异的对其最佳的化疗药物，以提高化疗的敏感性及延长生存期，并将毒副反应降到最低成为可能[2]。本研究应用免疫组织化学技术，检测手术切除、肺穿刺及纤维支气管镜活检取得的非小细胞肺癌组织中的stathmin蛋白、肺耐药蛋白（Lungresistance-associatedprotein,LRP）以及β-微管蛋白（β-tubulin）表达情况，并探讨其相关性。

研究对象

收集大连市中心医院肿瘤内科及胸外科2010年1月至2013年1月经手术切除、支气管镜下及穿刺肺组织活检病例，共103例，其中包括非小细胞肺癌63例，癌旁组织40例，分析蛋白的表达水平及其临床意义。

研究方法

本试验采用ElivisionTMplus法，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而来确定组织细胞内抗原，借助显微镜观察其颜色变化，并对其进行定位、定性及定量的研究，从而确定抗原的存在。

结果

一、stathmin、βⅢ-tubulin及LRP蛋白在非小细胞肺癌组织和正常对照组中的表达

在63例NSCLC患者中stathmin阳性表达率为52.38%，βⅢ-tubulin阳性表达率为38.09%，LRP蛋白阳性表达率为60.31%，三者表达均显著高于对照组（P<0.05），见表1。

表1stathmin、βⅢ-tubulin及LRP蛋白在NSCLC与癌旁组织中的表达（例，%）

组别例数stathmin表达βⅢ-tubulin表达LRP蛋白表达NSCLC6333（52.38）*24（38.09）*38（60.31）*癌旁组织405（12.50）3（7.50）4（10.00）P值<0.05<0.05<0.05*为与对照组比较P<0.01

二、βⅢ-tubulin、LRP及stathmin蛋白表达的相关性

将βⅢ-tubulin、LRP与stathmin蛋白阳性表达试验结果采用spearman相关性分析，结果显示βⅢ-tubulin、LRP与stathmin蛋白表达间呈正相关,经统计学检验有显著差异（P<0.05），即随着βⅢ-tubulin表达水平的增高，LRP及stathmin表达水平亦呈明显升高趋势。见表2。

表2βⅢ-tubulin、LRP及stathmin蛋白表达相关性分析

Stathminχ²PβⅢ-tubulin阳阴阳21319.1700.000阴1227LRPχ²PβⅢ-tubulin阳阴阳22220.2300.000阴1623Stathminχ²PLRP阳阴阳281024.3600.000阴520

讨论

一、stathmin蛋白与肺癌耐药

stathmin蛋白是近年来发现的在细胞的增殖和分化中十分重要的可溶性蛋白质，其可以通过影响肿瘤细胞内微管蛋白的聚合与解聚而干扰紫杉醇类药物的作用底物，从而影响此类药物的疗效[3-4]。降低stathmin在恶性肿瘤中的表达水平则可以有效地抑制肿瘤细胞的分裂、增殖，同时可以协同增加抗微管类肿瘤药物的疗效。细胞微管由微管蛋白二聚体构成，为真核生物细胞内重要的细胞骨架，是有丝分裂时纺锤体的基本组成单位。stathmin蛋白具有解聚微管的作用，通过调节该蛋白的表达及活性，控制细胞的增殖与分化。Rubin等研究证实，stathmin缺少的细胞中微管聚合增加，而stathmin过表达的细胞中微管聚合减少[5]。本研究结果显示，stathmin蛋白主要表达在细胞浆内，在非小细胞肺癌中高表达，在癌旁组织中呈低表达，提示stathmin阳性表达可能与肺癌的发展有着密不可分的相关性。

二、βⅢ-tubulin与肺癌耐药

β-微管蛋白（β-tubulin）分子量约为55KD，微管蛋白不仅是细胞骨架和纺锤体的主要成分，而且是紫杉醇作用的位点，与紫杉醇的获得性耐药也密切相关[6]。而β-微管蛋白Ⅲ（βⅢ-tubulin）的表达与微管蛋白结合类药物疗效密切相关。β-微管蛋白Ⅲ能降低微管蛋白的聚集速度，改变药物与微管蛋白二聚体连接部位，导致微管动力学特性的改变，对抗紫杉类药物导致的微管蛋白聚集，从而导致紫杉类药物的敏感性降低，产生耐药性[7]。

在本研究中观察到βⅢ-tubulin在非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织中均有表达,而在癌组织中的表达尤为显著,阳性率达72.5%，但在正常组织中的表达强度较低。

三、LRP与肺癌耐药

肺耐药蛋白（LRP）是非ATP依赖性转运蛋白，分子量为110KD，其基因定位于人染色体16p11.2-13.1，其主要参与细胞核与细胞质间的药物转运。LRP具有组织特异性，在人正常组织和肿瘤细胞中均广泛分布。由于肺耐药蛋白主要介导烷化剂与铂类等药物的耐药，而这些药均是以DNA为靶点，故提示LRP主要通过核靶点的屏蔽机制介导MDR。朱春荣等研究发现LRP在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于小细胞肺癌组织，且在腺癌中的表达水平明显高于鳞癌，LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义[8]。

本项研究发现，LRP在正常肺组织中可表现为低表达或者不表达，而在NSCLC癌组织中则为阳性表达，阳性表达率77.5%，这表明在非小细胞肺癌中LRP可能是预测肿瘤发生、发展以及预后的重要指标之一。

四、βⅢ-tubulin、LRP及stathmin蛋白之间的相关性

研究发现，随着βⅢ-tubulin表达水平的增高，LRP及stathmin的表达水平亦呈明显的增高趋势，且具有统计学意义（P<0.05），这提示βⅢ-tubulin、LRP及stathmin表达之间有一定的相关性。

多项研究提示单个基因的研究并不能准确判断预后，联合基因检测能提高预测的准确性。目前需要进行更多的前瞻性随机临床研究，有助于选择合适的分子基因指标组合，进而提高化疗药物敏感性，提高病人生存期，为NSCLC患者的个体化化疗方案的制定提供重要参考依据。

参考文献

[1].RinaldiM,CauchiC,GridelliC.FirstlinechemotherapyinadvancedormetastaticNSCLC[J].AnnOnc,2006,17(Suppl5):64-67.

[2].SarriesC,HauraEB,RoigB,etal.Pharmacogenomicstrategiesfordevelopingcustomizedchemotherapyinnon-small-celllungcancer[J].Pharmacogenomics,2003,3(6):763-780.

[3].JingXR,LiuL,ZhaoH,etal.RelationshipbetweenexpressionofStathmingeneincancercellsanditssensitivitytochemotherapeuticdrugs[J].FourthMilitMediUniv,2005,26(9):784-788.

[4].AlliE,BashBabulaJ,YangJM,etal.Effectofstathminonthesensitivitytoantimicrotubuledrugsinhumanbreastcancer[J].CancerRes,2002,62(23):6864-6869.

[5].RubinCI,AtwehGF.Theroleofstathminintheregulationofthecellcycle[J].JCellBiochem,2004,93(2):242-250.

[6].XiaoH,VerdierP,FernandezN,etal.Insightsintothemechanismofmicrotubulestabilizationbytaxol[J].ProcNatlAcadSci,2006,103(27):10166-10173.

[7].HaftM，YangH，ZengC，eta1．ExpressionofclassIIIbeta—tubulinreducesmicrotubuleassemblyandconfersresistancetopaclitaxel．CellMotilCytoskeleton，2003,56:45-56．

[8].朱春荣,夏学鸣,王庆才,等.肺癌患者FLK211、LRP和MDR1的表达与临床研究[J].中国癌症杂志,2005,15(1):29.