Survivin、caspase3蛋白在颊粘膜癌前病变中的表达及意义

Survivin、caspase3蛋白在颊粘膜癌前病变中的表达及意义

杨军成杨晋平何兴状刘广毅牟辉吴应轩何福江

杨军成杨晋平何兴状刘广毅牟辉吴应轩何福江(四川省广元市第一人民医院628017)

【中图分类号】R739.8【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）23-0132-02

【摘要】目的研究生存素survivin和半光酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cysteinyaspiratespecificprotease-3,caspase-3）在颊粘膜癌前病变中的表达情况，探讨凋亡抑制蛋白survivin和caspase-3在颊粘膜癌前病变中的表达特点及其相互关系。方法采用免疫组织化学SP法检测随机抽取的8例颊部正常组织、8例癌前病变石蜡切片中survivin和caspase3的表达。结果颊部癌前病变组中survivin表达阳性7例，阳性率为87.5%，Caspase3阳性表达7例，阳性率为87.5%，8例正常组织中survivin0表达，Caspase3完全表达，survivin在颊粘膜正常组织和癌前病变中表达的差异有显著性统计学意义（p<0.05），Caspase3的表达无显著性差异。结论口腔颊颊粘膜正常组织和癌前病变中survivin过度表达，抑制细胞的凋亡可能导致癌前病变的发生。

【关键词】survivin/caspase3/癌前病变/凋亡

近年来，口腔癌的发病率在许多国家有上升趋势，而颊粘膜癌变的可能性更大。白斑、扁平苔藓等属于口腔黏膜癌前病变，白斑癌变率为7％-15％，非均质性白斑的癌变率高达14％-50％，而扁平苔藓的癌变率为2%-3%。因此，准确判断口腔癌前病变的预后及阻断口腔癌前病变的发展是预防口腔癌的重要措施。目前，中外学者多提倡将癌变过程中的生物学标志物作为替代性终点生物标记(surrogateendpointbiomarker)。这些生物标记的改变多发生在癌变早期，但又和浸润性癌的发生密切相关，这些生物标记精确性高、个体差异低，可用于判断癌变的预后和转归[1]。Survivin是IAP家族的一个独特的成员，它与多种亚细胞构件相结合，其表达也受多种信号途径调控，Kren[2]等研究表明survivin在正常组织中不表达，而在多种恶性肿瘤中呈阳性表达，且与肿瘤病理分级与预后有明显的关系。Caspases蛋白是凋亡的执行蛋白，在其家族中Caspase3处于蛋白酶级联反应的核心位置，它的失活或表达异常与多种肿瘤的发生发展有关。本研究应用免疫组化技术联合检测颊粘膜正常组织、癌前病变组织中Caspase3、Survivin蛋白的表达，探讨其生物学意义。

1材料与方法

1.1标本：颊部鳞状细胞癌组织标本收集自广元市第一人民医院口腔颌面外科2001年至2010年诊治的所有病变中随机抽取的颊部癌前病例8例，其中扁平苔藓2例，白斑6例，患者年龄41-75岁，平均58岁；颊部正常组织8例，均取自前颊部粘液腺囊肿切除的边缘正常粘膜。

1.2试剂：一抗为稀释浓度为和1：200的多克隆兔抗人Caspase3，即用型鼠抗人单克隆抗体Survivin，SP试剂盒均购自福建迈新生物公司产品。

1.3方法：应用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)SP法检测8例口腔颊部正常组织、8例颊部癌前病变中Caspase3、Survivin蛋白的表达。

1.4结果判定：参考有关文献判断标准如下：根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评定：0分为细胞无显色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色。着色细胞占计数细胞的百分率：每张切片随机选取5个高倍视野，按阳性细胞数占同类细胞数的百分比，≦5％为0分，6％-25％为1分，26％一50％为2分，51％一75％为3分，>75％为4分；将每张切片染色程度与染色细胞百分率得分相乘的积为其最后得分，0分为阴性(一)，1—4分为弱阳性(+)，5—8分为中等阳性(++)，>9—12分为强阳性(+++)。为方便统计分析，结果（一）处理为（一），（+）(++)和(+++)处理为(+)

1.5统计学处理：利用SPSS13.0软件，两样本率的比较采用四格表资料的x2检验和成组设计两样本比较的秩和检验及等级资料的多个样本比较的秩和检验。

2结果（见下表1）

表1颊部组织中Survivin和Caspase3表达结果

2.1survivin在颊粘膜癌前病变和正常组织中的表达

在颊部癌前病变中survivin阳性表达率为87.5%（7/8），在正常颊部组织中阳性表达率为0%（0/8）。应用等级资料的多个样本比较的秩和检验，H值为97.19，按ɑ=0.05水准认为survivin颊部癌前病变和正常颊部组织中表达的差异有显著性统计学意义。

2.2Caspase3在颊粘膜癌前病变和正常组织中的表达

在颊部癌前病变中Caspase3阳性表达率为87.5%（7/8），在正常颊部组织中阳性表达率为100%（8/8）。Caspase3在颊部癌前病变和正常颊部组织中表达的差异无显著性统计学意义。

3结论

3.1survivin在口腔颊粘膜癌前组织和正常组织中的表达差异有显著性意义，survivin在颊部癌前组织中的高表达提示其可以作为判断颊部癌前病变是否发展成为鳞状细胞癌的一个有力工具，具有早期诊断的意义。

3.2Caspase3在颊粘膜癌前病变和正常组织中表达差异无显著性意义。

4讨论

Survivin是一种新近描述的凋亡抑制蛋白，在实体肿瘤和血液肿瘤中大量表达，但在大多数成人正常分化组织中未见表达。Survivin除了参与细胞凋亡途径外，有丝分裂过程中的突变以及线粒体诱导的细胞死亡可干扰Survivin的表达。LoMuzio等[3]研究发现，正常口腔黏膜无Survivin表达，在随访期间无癌变的口腔异常增生病变中33％有Survivin的表达，在发展为癌的口腔异常增生病变中，94％有Survivin的表达，而在癌组织中，Survivin的表达为100％。但Survivin的表达与异常增生程度无明显相关性。认为细胞质或细胞核Survivin的高度表达是口腔癌变的早期事件，可作为判断癌前病损预后的一个有用标志。

Caspase3的活化是凋亡级联反应中的关键步骤。一旦Caspase3被激活，则细胞凋亡不可避免：CaN)ase一3作用途径：Caspase3裂解后，即形成活化的酶复合体，可切断DNA修复蛋白(如PARP)、细胞骨架蛋白和iCAD(inhibitorofCaspase—ActivatedI)eoxyt‘i—bonuclease)，从而使DNA断裂，成为碎片、Caspase3的下游活性标志：DNA依赖的蛋白激酶(DNA—PK)，iCAD，DNA碎裂(TUNEL(+))。可以认为，若细胞中检出活化的Caspase3和／或细胞TUNEL染色(+)，则存在细胞凋亡。在本研究中Caspase3的表达无显著性差异，但是基本都能检测出Caspase3，说明凋亡是存在的，还不能证实已经发展到癌症阶段，对于判断是否是癌症有一定的价值。

参考文献

[1]江锦岗，严振球.口腔癌前病变标志物的研究现状[J].临床军医杂志，2006,34（2）：224—227.

[2]Kren,Lees,Brazdil.Prognosticsignificanceofanti-apoptosisproteinssurvivinandbcl2innon-smallcelllungcarcinomas:Aclinicopathologicstudyof102cases[J].ApplImmunohistochemMolMor-phol,2004,12:44-49.

[3]LoNuzioL，Pannonec.Leonardi1t，eta／.Survivin，apotentialearlypredictoroftumorprogressionintheoralmUl3088[J].JDentRes，2003.82：923—928.