ω-3鱼油脂肪乳对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的保护作用

ω-3鱼油脂肪乳对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的保护作用

赵武波武华

赵武波武华（山西太原医科大学第一医院普外科山西太原030001）

【中图分类号】R657.5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)13-0052-02

【摘要】目的探讨ω-3鱼油脂肪乳对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的保护作用。方法将48只SD大鼠随机分为等渗盐水组(A组)，对照组(B组)和鱼油治疗组(C组)。重症急性胰腺炎造模成功后，腹主动脉采血测定血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)及C-反应蛋白(CRP)浓度并进行统计学分析。结果C组大鼠TNF-a及CRP浓度明显低于A组和B组(P<0.05)。结论重症急性胰腺炎大鼠经ω-3鱼油脂肪乳治疗后炎症反应明显减弱，肠粘膜屏障功能有所改善。

【关键词】ω-3鱼油脂肪酸重症急性胰腺炎肠粘膜屏障

Protectionofω-3fishoilemulsionforsevereacutepancreatitisinintestinalbarrierfunctionofrats

ZhaoWuboWuHua（DepartmentofGeneralSurgery,theFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,ShanxiTaiyuan030001,China）

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprotectionoftheω-3fishoilemulsionforSAPintestinalbarrierinrats.Methods48SDratswererandomlypidedintonormalsalinegroup(Agroup),thecontrolgroup(Bgroup)andfishoiltreatmentgroup(Cgroup).AfterSAPmodelwassuccessfully,theabdominalaortaforbloodserumtumornecrosis-a(TNF-a)andC-reactiveprotein(CRP)concentrationswereanalyzedstatistically.ResultsTNF-aCgroup,CRPlevelsweresignificantlylowerthantheAandBgroup(P<0.05).ConclusionTheinflammatoryresponsewassignificantlyreducedaftertreatmentbyω-3fishoilemulsionofSAPrats,intestinalmucosalbarrierfunctionwasimproved.

【Keywords】ω-3fishoilfattyacidsSevereacutepancreatitisMucosalbarrier

重症急性胰腺炎(severeacutepancreatitis,SAP)是一种严重的腹部疾病,发病机制复杂，病程进展迅速，死亡率极高。发病期间患者肠粘膜屏障功能受损，通透性增高，易导致细胞因子和炎症介质入血，进一步诱发和加重全身炎症反应综合征(SIRS)，对肠粘膜造成二次打击。鱼油是一种重要的免疫调理性营养素，富含大量ω-3多不饱和脂肪酸，能显著降低血循环中TNF-a、CRP的水平，减轻SIRS。本实验旨在通过给予SAP大鼠ω-3鱼油脂肪乳支持治疗，就其对SAP大鼠肠粘膜屏障功能的影响进行进一步研究。

1材料及实验方法

1.1药品和试剂5%牛黄胆酸钠购自Sigma公司。鱼油(尤文)购自无锡华瑞制药有限公司。TNF-α试剂盒购自美国ADL公司。CRP试剂盒购自南京建成生物有限公司。

1.2动物实验

1.2.1动物分组及造模过程SD雄性大鼠48只，体重215～245g（购自山西医科大学实验动物中心），随机分为等渗盐水组(A组)、对照组(B组)和鱼油治疗组(C组)，每组16只。术前12h禁食，自由饮水。称重后麻醉、固定,经上腹正中切口进腹，游离胆胰管肝门端，确认胆胰管走向及开口位置后，用一枚显微动脉夹将其出肝门端阻断。用1ml注射器穿过肠壁向胆胰管穿刺，确认穿刺成功后用另一枚显微动脉夹夹住胆胰管远端，然后向胆胰管内匀速注射5%牛磺胆酸钠2ml/kg，速度为0.2ml/min。注射完毕继续阻断胆胰管上下端，5min后取掉2枚显微动脉夹，缝合穿刺口，术毕关腹[1]。B组仅用一钝头1ml注射器穿刺肠壁并深入胆胰管1cm，不作其他处理，即拔除穿刺针，缝合穿刺孔，关腹。

1.2.2给药方法及剂量在SAP诱发或假手术后，经尾静脉注射，A组给予等渗盐水2ml/(kg·d)；C组给予鱼油2ml/(kg·d)；B组大鼠不作处理。

1.3取样及检测分别于给药4、8、12、24小时后，再次开腹，确认SAP造模成功。用一次性无菌套管针穿刺腹主动脉采血2～3ml后处死大鼠。采集血液经抗凝，4℃、3000转/分离心20min，取上清液各1ml，-80℃保存。采用ELISA法测定血清TNF-α水平，放射免疫法测定血清CRP水平，测定时严格执行试剂盒操作步骤。

1.4统计学方法所得资料用均数±标准差(x-±s)表示，所有数据均通过SPSS13.0软件处理。血清学指标比较采用单因素方差分析及LSD法两两比较，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1肿瘤坏死因子-a浓度变化给药后4小时三组大鼠间浓度差异无统计学意义(P>0.05)，8小时后各时间点血清TNF-α浓度较A组明显降低(P<0.05)，C组明显低于B组(P<0.05)。见表1。

表1不同时间点各组大鼠血清TNF-α浓度（x-±s,pg/ml）组别

4h

8h

12h

24h

A组

213.29±9.04

207.31±7.37

206.23±8.16

195.41±6.05

B组

211.19±10.36

182.26±9.50*

162.67±9.9*

145.02±6.67*

C组

206.45±9.74

171.09±7.18

138.79±6.59*#

128.02±7.37*#

与A组比较，*P<0.05；与B组比较，#P<0.05。

2.2C反应蛋白浓度变化给药后4小时三组大鼠浓度差异无统计学意义(P>0.05)，8小时后各时间点血清CRP浓度B、C组较A组明显降低(P<0.05)，C组明显低于B组(P<0.05)。见表2。

表2不同时间点各组大鼠血清CRP浓度（x-±s,mg/L）组别

4h

8h

12h

24h

A组

83.93±8.06

80.70±4.54

85.84±5.71

81.66±6.05

B组

78.77±16.44

68.31±4.05*

59.10±6.07*

42.68±5.36*

C组

80.39±5.94

52.10±5.63*#

45.12±4.12*#

34.71±4.55*#

与A组比较，*P<0.05；与B组比较，#P<0.05。

3讨论

肠粘膜屏障是机体防御功能的一道重要防线，由机械屏障、化学屏障、免疫屏障与生物屏障共同构成。研究表明，SAP患者都存在不同程度的肠屏障功能障碍(intestinebarrierfunctionaldisturbance，IBFD)，IBFD易使肠道菌群易位，细菌及内毒素入血，加重SAP感染，诱发全身炎症反应SIRS，甚至并发脓毒症和多器官衰竭(multipleorganfailure,MOF)。而SIRS的实质是炎症介质过度释放的结果。CRP及TNF-a在健康人血清中含量甚微，但在炎症时合成倍增，二者在血清中的浓度与炎症反应和肠粘膜损伤程度呈正相关[2]。

炎症介质和细胞因子是机体对各种有害因子作出保护性应答反应的产物，正常对机体具有保护作用。但过多产生除加重SIRS、引发MODS外，可对肠粘膜屏障造成进一步打击。此外，肠粘膜具有绒毛微血管结构及高代谢的特征，对灌注不足特别敏感。SAP早期患者常处于低血容量状态，导致肠缺血缺氧，进而损害肠粘膜屏障。ω-3鱼油脂肪乳富含ω-3多不饱和脂肪酸，即二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。静脉给予后，二者可迅速渗入免疫细胞膜，与花生四烯酸竞争环氧化酶和脂氧化酶，减少促炎因子PGE2和LTB4合成，增加EPA代谢产物PGE3和LTB5的合成。而后两者参与白细胞与内皮细胞的相互作用、淋巴细胞的增殖以及细胞因子表达等炎症和免疫过程，大大减轻SIRS，改善机体免疫功能，从而更好地保护SAP时肠粘膜等重要靶器官。Mayer等[3]研究提示，脓毒血症患者用含鱼油制剂肠外营养5d后，血中C-反应蛋白浓度明显低，TNF-α、IL-1、IL-6无明显升高，与我们研究结果相一致。

本研究我们发现，给予SAP大鼠ω-3鱼油脂肪乳8小时后其血清TNF-α及CRP浓度均较A组明显降低，炎症反应大大减弱，肠屏障功能得到进一步改善，进一步验证了以上结论。提示ω-3鱼油脂肪乳能够改善SAP时肠粘膜的结构和通透性，对肠粘膜屏障起到保护作用，在SAP的治疗中有广泛的临床应用前景，但给药的最佳时机和周期及最适剂量还有待进一步的深入研究。

参考文献

[1]张明钧，姚玮艳，乔敏敏.肠壁穿刺逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠重症急性胰腺炎造模[J].上海交通大学学报（医学版），2006，5(26)：488-490.

[2]王新颖，黎介寿.ω-3多不饱和脂肪酸影响炎症和免疫功能的基础研究[J].肠外与肠内营养，2007，14(1)：54-58.

[3]MayerK,FegbeutelC,HattarK,etal.Omega-3vsomega-6lipidemulsionsexertdifferentialinfluenceonneutron-philsinsepticshockpatients:impactonplasmafattyacidsandlipidmediatorgeneration[J].IntensCareMed,2003,29(9):14722-14811.