急性脑梗死与6个miniSTR基因座多态性的相关研究

急性脑梗死与6个miniSTR基因座多态性的相关研究

李楠于晓敏王璐

李楠于晓敏王璐(大连市中心医院神经内科辽宁大连116033)

【摘要】目的：探讨急性脑梗死与6个miniSTR基因座的相关性。方法：选取急性脑梗死患者120例，正常对照150例，应用荧光标记多重PCR扩增技术扩增6个基因座。用直接计数法计算等位基因频率，应用SPSS统计软件对病例组和对照组的各基因座的各个等位基因间进行卡方检验，计算OR值，并对有意义的OR值进行假设检验。结果：基因座D10S1248和D22S1045的各个等位基因频率病例组与对照组间均无显著性差异。基因座D14S1434在病例组中的等位基因14、基因座D1S1677的等位基因11、基因座D2S441病例组的等位基因14和基因座D4S2346的等位基因7的基因频率在病例组和对照组间有显著性差异，并且OR值分别为0.433、28.71、2.303和6.828。结论：基因座D14S1434的等位基因14可能是急性脑梗死发病的一个保护基因。D1S1677的等位基因11、基因座D2S441的等位基因14和基因座D4S2346的等位基因7可能是急性脑梗死发病的危险基因，与其他基因连锁致病。

【关键词】急性脑梗死miniSTR基因多态性相关

【中图分类号】R39【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）24-0092-02

许多证据表明遗传因素和免疫因素在脑梗死的发病中有显著作用，普遍认为脑梗死是由多个基因和环境因素共同作用导致的一类极其复杂的疾病[1,2]。MiniSTR是一种新的STR分型技术，它重新设计引物，使引物更接近核心重复序列，扩增的聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)产物比STR分型短一些，其长度在50~150bp[3]。本研究选择了6个具有较高多态性的miniSTR基因座应用于急性脑梗死易感基因的研究，对脑梗死的易感基因和保护基因进行探索，为研究脑梗死的发病机制提供一定的线索。

1对象与方法

1.1对象

1.1.1病例组：大连市中心医院神经内科住院患者，全部病例诊断按照全国第四届脑血管病学术会议制定的标准确诊，共计120例。均系无血缘关系的大连汉族个体，年龄在45-78岁，并除外糖尿病、原发高血压和脑肿瘤患者，性别不限。

1.1.2对照组：随机选取大连地区无偿献血志愿者150名，身体健康，体检标准符合“全国采供血管理规范”。家族无遗传病史，年龄在45-70周岁，均无血缘关系。

留取病例组与对照组个体外周静脉血3～5ml，EDTA抗凝，-20℃保存备用。

1.2实验方法

1.2.1基因组DNA的提取和定量：采用Chelex-100方法[6]提取DNA，使用紫外分光光度仪测得DNA浓度和纯度。

1.2.2PCR复合扩增：miniSTR基因座D10S1248、D14S1434、D22S1045和D1S1677、D2S441、D4S2364的引物序列[4]，由大连宝生物公司合成。PCR反应体系为10μl，各溶液组成为PCR缓冲液1.0μl，MgCl20.6μl，引物混合物2.0μl，dNTPs1.0μl，金牌TaqDNA聚合酶0.2μl，dH2O4.2μl，配制后将混合液分装到n个PCR管，各9.0μl。每个PCR管中分别加入相应的模板DNA1.0μl,按照一定条件扩增。

1.3统计学分析：等位基因频率采用直接计数法；病例组与对照组之间的差异采用SPSS10.0进行X2检验，以P<0.05为有统计学显著差异。计算和检验病例组和对照组暴露的优势比（oddsratio,OR）[5]。在病例对照研究中OR值可以近似的估计疾病发生的相对危险度（relativerisk,RR），即带有特定基因的人与不带此基因的人对患有某种疾病危险性的比值。

2结果

病例组基因座D14S1434的等位基因14基因频率（28.75%）明显低于对照组（40.6%），P=0.020有显著性差异。OR值等于0.433，并对OR值进行假设检验，得到卡方值为5.34，大于P=0.05时的临界值3.84，P<0.05，即D14S1434的等位基因14与急性脑梗死有相关性。在发病率很低时，OR近似等于RR，所以相当于RR值等于0.433；病例组基因座D1S1677的等位基因11基因频率（15%）明显高于对照组（0.75%），P=0.000有显著性差异。OR值等于28.71，对OR值进行假设检验，得到卡方值为33.38，大于P=0.05时的临界值3.84，P<0.05，即基因座D1S1677的等位基因11与急性脑梗死有相关性。病例组基因座D2S441的等位基因14基因频率（17.5%）明显高于对照组（9.4%），P=0.038有显著性差异。OR值等于2.303，对OR值进行假设检验，得到卡方值为4.29，大于P=0.05时的临界值3.84，P<0.05，即基因座D2S441的等位基因14与急性脑梗死有相关性。病例组基因座D4S2346的等位基因7基因频率（13.75%）明显高于对照组（2.63%），P=0.000有显著性差异。OR值等于6.828，对OR值进行假设检验，得到卡方值为16.22，大于P=0.05时的临界值3.84，P<0.05，即基因座D4S2346的等位基因7与急性脑梗死有相关性。

3讨论

本研究分别对病例组和对照组的6miniSTR基因座的各个等位基因频率间进行了卡方检验，计算了病例组和对照组间各基因座频率的OR值。基因座D10S1248和D22S1045的各个等位基因病例组与对照组间均无显著性差异（P＞0.05），所以基因座D10S1248和D22S1045的各个等位基因与急性脑梗死间无相关性。基因座D14S1434在病例组中的等位基因14基因频率（28.75%）明显低于对照组（40.6%），两组间有显著性差异。对OR值进行假设检验，P<0.05，即D14S1434的等位基因14与急性脑梗死有相关性。在发病率很低时，OR近似等于RR，所以相当于RR值等于0.433，即两者具有负相关，也就是说基因座D14S1434的等位基因14可能是急性脑梗死发病的一个保护基因。病例组基因座D1S1677的等位基因11基因频率（15%）明显高于对照组（0.75%），两组间有显著性差异。对OR值进行假设检验，P<0.05，即基因座D1S1677的等位基因11与急性脑梗死有相关性，OR值等于28.71，相当于RR值大于1，即两者呈正相关，所以基因座D1S1677的等位基因11可能是急性脑梗死发病的一个危险基因。基因座D2S441病例组的等位基因14基因频率（17.5%）明显高于对照组（9.4%），两组间有显著性差异。对OR值进行假设检验，P<0.05，即基因座D2S441的等位基因14与急性脑梗死有相关性。OR值等于2.303，相当与RR值大于1，即两者呈正相关，所以基因座D2S441的等位基因14也可能是急性脑梗死发病的一个危险基因。病例组基因座D4S2346的等位基因7基因频率（13.75%）明显高于对照组（2.63%），两者间有显著性差异。对OR值进行假设检验，P<0.05，即基因座D4S2346的等位基因7与急性脑梗死有相关性。OR值等于6.828，相当与RR值大于1，即两者呈正相关，所以基因座D4S2346的等位基因7也可能是急性脑梗死发病的一个危险基因。

参考文献

[1]R.Y.Y.Yong,L.S.H.Gan,M.D.Coble,etal.AllelefrequenciesofsixminiSTRlociofthreeethnicpopulationsinSingapore,ForensicScienceInternational,2007,166:240~243.

[2]TsukadaK,TakayanagiK,AsamuraH,etal.MultiplexshorttandemrepeattypingindegradedsamplesusingnewlydesignedprimersfortheTH01,TPOX,CSF1PO,andvWAloci.LegalMed,2002,4:239~245.

[3]M.D.Coble,J.M.Butler.CharacterizationofnewminiSTRlocitoaidanalysisofdegradedDNA.J.ForensicSci.,2005,50:43~53.

[4]DNARecommendations.ReportconcerningfurtherrecommendationsoftheDNACommissionoftheISFHregardingPCR-basedpolymorphismsinSTR(shorttandemrepeat)system.ForensicSci.Int.,1994,69:103~104.

[5]方积乾.卫生统计学[M].第五版.北京：人民卫生出版社,2003,344.