P53在人卵巢癌组织中的表达及临床意义

P53在人卵巢癌组织中的表达及临床意义

曾玉华1蒋静1周洪贵1唐良蓞2

曾玉华1蒋静1周洪贵1唐良蓞2

（1川北医学院附属医院妇产科四川南充637000）

（2重庆医科大学附属第一医院妇产科400016）

【中图分类号】R737.31【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)13-0059-02

【摘要】目的检测抑癌基因P53（突变型）在卵巢癌中的表达，并结合卵巢癌临床参数如临床分期、病理类型等进行比较，了解P53在卵巢癌中的表达及其生物学行为的关系；方法采用SP免疫组化法检测60例不同性质卵巢组织中P53蛋白的表达水平。结果上皮性卵巢癌，良性上皮性肿瘤，正常卵巢组织中三种指标的表达情况：P53蛋白为14/22、0/20、0/18，在上皮性卵巢癌中的表达率显著增高；P53表达与肿瘤分期和组织分化程度相关。结论1.P53在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢癌中表达逐渐增强，提示P53参与卵巢癌的形成，并与耐药有关。2.P53蛋白表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性、肿瘤细胞的分化程度、患者的临床分期有关，与恶性肿瘤的病理类型无关。

【关键词】卵巢癌p53免疫组织化学

Expressionandsignificanceofp53proteininovarianadenocarcinoma.

ZengYuhua1,JiangJing1,ZhouHonggui1,TangLiangdan2.1.DepartmentofObstetricsandGynecology,theaffiliatedhospitalofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong637000;2.DepartmentofObstetricsandGynecology,theFirstaffiliatedhospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016

【Abstract】Objective:Toinvestigatetheexpressionofp53(Mtp53)inepithelialovariancarcinomaandtherelationshipbetweentheexpressionandtheclinicalstage、pathologicaltypeofepithelialovariancancerandtoevaluatetheroleofp53ontheoriginandprogressionofepithelialovariancancer.Methods:1.Toexaminetheexpressionofp53in22casesofovariancarcinoma,20casesofbenignovariantumorand18casesofnormalovariantissuebySPimmunohistochemicaltechnique.Results:Innormalovary、benigntumorandovariancancer，thepositiveofp53proteinwas0/18、0/20、14/22.Theratiosofp53expressioninovariancancerweremuchhigherthanthatinbenignovariantumorandnormalovarytissue.Theexpressionofp53proteinrevealedsignificantrelationshiptotheclinicalstageandthehistologicaldifferentiation.Conclusion:1.Theexpressionofp53inovariancancerwasmuchhigherthanthatinbenignovariantumorandnormalovarytissue.2.P53proteinexpressionrelatedwiththehistologicalgrade、clinicalstagesandthemalignantdegreeofovariancancer，butnotwiththehistologicaltype．

【Keywords】Ovariancarcinomap53Immunohistochemistry

卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，迄今由于其缺乏完善的早期诊断方法，其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位，5年生存率仅30％[1]，成为妇科恶性肿瘤威胁最大的疾病。卵巢癌的癌变过程中相关基因的改变具有重要的诊断和预后价值。P53蛋白表达是肿瘤发生发展中的重要机制,是肿瘤分化及恶性程度的早期指标[2]。

研究表明，肿瘤发病的过程不仅包括细胞增殖加速，还包括细胞凋亡减弱，凋亡失败是导致肿瘤生长失控的主要原因。p53基因是目前已知的最佳肿瘤抑制基因。当DNA损伤轻微时，p53会促进细胞修复；而当DNA严重损伤时，p53则会诱导细胞发生凋亡[3]。本文通过免疫组织化学方法，探讨凋亡调节基因p53在上皮性卵巢癌中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。

1材料与方法

1.1实验材料

卵巢组织标本共60例，来自于重庆医科大学附属第一医院及川北医学院附属医院2004年11月～2005年11月住院的卵巢肿瘤患者，年龄23～75岁，平均53.6岁；其中恶性上皮性肿瘤22例，良性上皮性肿瘤20例，正常卵巢组织18例，以上标本的诊断均经病理科医师核实，全部标本均在手术时收集。留取新鲜卵巢组织标本，液氮冷冻后存于-80℃低温冰箱保存备用，余下的均送病理科石蜡包埋切片。恶性上皮性肿瘤包括浆液性癌12例，粘液性癌6例，子宫内膜样癌4例。临床分期Ⅰ期4例，Ⅱ期3例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。良性上皮性肿瘤包括浆液性肿瘤13例，粘液性肿瘤7例。

1.2SP免疫组化法测定P53在卵巢癌中的表达

鼠抗人P53抗体购自北京北方同正生物技术发展公司；SP（链霉素抗生物素-过氧化物酶连接法）免疫组化染色试剂盒购自中山生物技术有限公司。以已知p53阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。实验操作按试剂盒说明书进行。

实验结果判定：以已知p53阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。p53阳性呈胞核着染。以阳性率判断结果。

统计学分析用SAS8.1系统进行统计学处理。采用x2检验、Fisher精确概率法，P＜0.05代表统计学显著性差异，P＜0.01表示差异非常显著。

2结果

2.1p53在不同性质卵巢组织的表达情况（见表1及附图1）

表1p53在不同性质卵巢组织中的阳性表达情况类型

n

p53

P

正常卵巢

18

0

良性上皮性肿瘤

20

0

上皮性卵巢癌

22

14*

<0.01

注:*与正常卵巢及良性上皮性肿瘤相比P<0.01

由表1.1可见，p53在正常卵巢及良性上皮性肿瘤中无表达，在卵巢癌显著表达。p53在恶性肿瘤中阳性率显著高于正常卵巢和良性肿瘤(P<0.01)。

2.2p53与肿瘤分化程度、组织类型及临床分期的关系

p53表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期相关(P<0.05)。临床分期Ⅰ、Ⅱ期病人P53蛋白阳性表达率低于Ⅲ、Ⅳ期病人；低分化病人P53蛋白阳性表达率高于高分化病人；p53蛋白表达强度与患者的年龄、肿瘤细胞类型无关。(见表2)

表2卵巢癌组织p53与患者年龄、肿瘤分化程度、组织类型及临床分期的关系

p53

n

+

阳性率

年龄

<50岁

6

4

66.7%

>50岁

16

10

62.5%*

临床分期

Ⅰ期

4

1

25.0%

Ⅱ期

3

1

33.3%

Ⅲ期

9

7

77.7%**

Ⅳ期

6

5

83.3%**

病理分级

高分化

6

2

33.3%

中分化

7

4

57.1%

低分化

9

8

88.9%***

组织学类型

浆液性癌

12

8

75.0%

黏液性癌

6

4

66.7%

子宫内膜样癌

4

2

50.0%****

注:*与小于50岁年龄组比较P>0.05;**与临床Ⅰ、Ⅱ期比较P<0.05;***与高分化比较P<0.05;****与浆液性及粘液性癌比较P>0.05

3讨论

3.1P53的结构与功能

P53基因定位于人染色体17P13.1，全长约16-20Kb，基因组由11个外显子和10个内含子组成，编码含393个氨基酸组成的分子量为53KD的核磷酸蛋白，具有转录因子的作用。P53基因分为野生型（wildtypeP53，Wtp53）和突变型（mutanttypep53，Mtp53）[4]。几乎所有的人体组织都有P53的表达，但由于其含量少，表达水平低，半衰期短，只有20分钟-30分钟，且极不稳定，故在正常人体组织中无法查到P53表达，若能查到P53表达则说明已发生突变。野生型P53不仅作为抑癌基因发挥作用，还参与基因转录、DNA损伤与修复、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞增殖及细胞分化等多个过程，具有“分子警察”的功能[5]。Wtp53对于维持细胞基因组的稳定性、调节细胞的分化、保证细胞周期的正常运行起重要作用，对细胞的增殖起负性调控作用[6]。

当Wtp53发生突变时，Mtp53蛋白失去抑癌功能，不能诱导细胞凋亡，从而引起细胞恶性增殖，导致肿瘤发生。MtP53蛋白构象发生变化，与病毒蛋白结合很弱或不结合，而与热休克蛋白可形成稳定结合而使其半衰期延长，同时又能与WtP53蛋白结合而使其负调控细胞生长作用丧失，使受损细胞得以生存，往往引起肿瘤对放化疗的不敏感，从而间接参与肿瘤细胞耐药复发。

3.2P53与卵巢癌的关系

P53基因是一种典型的抑癌基因，也是目前发现的突变频率最高的肿瘤相关基因之一[7]，其突变或缺失在多种肿瘤的形成和发展过程中起重要作用。近年研究表明，在卵巢癌中，可能存在P53等位基因的丢失，或P53基因的突变，或两者并存。与妇科其它恶性肿瘤如宫颈癌、子宫内膜癌相比，P53基因在卵巢癌中的突变率最高，为30%～80%，Otsuka等[8]报道其突变率高达81%。P53基因在卵巢癌各个时期均发现有突变，其突变类型达4000余种，其中大多为点突变。

研究发现，卵巢癌中p53蛋白过度表达与p53基因突变密切相关，良性卵巢肿瘤中一般不存在p53基因突变，p53蛋白也为阴性或低表达水平。早期交界性卵巢肿瘤的p53蛋白表达多正常，而晚期可见过度表达。本研究显示，在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤中未见P53蛋白表达，22例卵巢癌患者中，P53蛋白阳性表达率为63.6%，P53在卵巢癌中高表达，提示p53基因改变是卵巢癌中常见的重要事件，它的突变或缺失与卵巢癌的发生密切相关。在不同组织病理分级研究中，发现分化程度与p53阳性率相关，高分化患者p53蛋白阳性表达率低于低分化患者(p<0.05)；p53表达与临床分期亦有关，临床分期Ⅰ/Ⅱ期患者p53蛋白阳性表达率低于Ⅲ/Ⅳ期患者，差异有显著性(P<0.05)；p53蛋白表达强度与患者的年龄、肿瘤细胞类型无关(P>0.05)，与戴[9]的研究结果相似。本实验中p53蛋白在分化程度低以及临床晚期肿瘤中高表达，提示p53不仅参与卵巢癌的发生，而且在其发展过程中可能也具有一定作用。

P53蛋白表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性、肿瘤细胞的分化程度、患者的临床分期有关，与恶性肿瘤的病理类型无关。P53蛋白表达可作为卵巢癌预后的一个指标，为以后进一步研究卵巢癌的治疗提供基础理论依据。

参考文献

[1]RoseSL,GoodheartMJ,DeYoungBR,etal.P21expressionpredictsoutcomeinp53-nullovariancarcinoma[J].ClinicalCancerResearch，2003,9:1028-1032.

[2]PorterPL,GonwAM,krampSG,etal.WidespreadP53overexpressioninhumanmalignanttumors.AmJPathol1992;140(1):145.

[3]BarJ,SobanskaE,PopielaA,eta1．EvaluationofexpressionandcorrelationbetweenP53、BCL-2andBAXproteinsinovarianneoplasma[J]．GinekolPo1,2002;73(2):102-109.

[4]GuL,FlemingtonC,ChittendenT,etal.P53responsegeneinvolvedisgrowthsuppressionandapoptosis[J].NolCellBiol,2000;20(1):233-241.

[5]KuwashimaY，UeharaT，KishiK．Immunohistoehemiealcharaeterizationofundifferentiatedcarcinomasoftheovary[J].JCancerResC1inOncol，1994,120(11):672.

[6]LeeCW,LaThangueNB.Promoterspecificityandstabilitycontrolofthep53relatedproteinp73[J].Oncogene,1999;18(29):4171-4181.

[7]GreenblattMS,BennettWP,HollsteinM,etal.Mutationsinthep53tumorsuppressorgene:cluestocanceretiologyandmolecularpathogenesis[J].CancerRes,1994;54:4855-4878.

[8]OtsukaJ,OkudaT,SekizawaA,etal.Detectionofp53mutationsintheplasmaDNAofpatientswithovariancancer[J].IntJGynecolCancer,2004;14:459-464.

[9]戴志远,蒋创,谢芳.p53蛋白在卵巢上皮肿瘤组织中的表达及其临床意义.苏州大学学报(医学版)2008;28(1)：68-69.

图1P53在OC中阳性表达（SPX400）

Fig1Thepositiveexpressionofp53inovariancancer(SPx400)