血清肝纤维化四项放射免疫分析检测中的Hook现象

血清肝纤维化四项放射免疫分析检测中的Hook现象

贾晓娟1许泽清1韩军2（通讯作者）姜萍1唐彩华

贾晓娟1许泽清1韩军2（通讯作者）姜萍1唐彩华1

（1广东省珠海市中山大学附属第五医院核医学科广东珠海519000）

（2广东省珠海市中山大学附属第五医院肿瘤内科广东珠海519000）

【摘要】对慢性乙肝血清肝纤维化四项检测过程中出现的钩状效应（Hook现象），进行分析总结，提示临床注意强阳性患者检测的假阴性问题。方法：应用放射免疫方法对2011-2012年186例慢性乙肝患者进行血清肝纤维化四项检测，必要时进行稀释法检测，结果：有7例患者放射免疫分析方法检测肝纤维化四项中血清LN含量低于正常参考值，而肝纤维化四项中PⅢ、CⅣ、HA含量均高于正常参考值；采用稀释法后，放射免疫分析方法检测LN均高于正常参考值。结论：放射免疫方法检测血清LN存在Hook现象，在临床工作中需要注意。

【关键词】放射免疫分析肝纤四项血清LNHook现象

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）09-0181-02

1959年美国学者Yalow和Berson发表了放射免疫分析（RIA）方面的开创性工作，把免疫学和放射化学巧妙地结合起来,使该方法具有很高的特异性和灵敏度，成为生物、医学研究和临床诊断的重要工具。作者在临床肝纤维化四项检测中发现，当抗原量过大时，血清LN含量存在着钩状效应，即Hook现象，希望临床相关检测人员能给以关注。

1资料与方法

1.1研究对象2011-2012年，在我院就诊的186例慢性乙肝患者，年龄16～77岁，平均年龄51岁。进行血清肝纤维化四项检测，必要时进行稀释法检测。

1.2方法

标本采集：空腹抽取被测者静脉血3ml，分离血清备用。肝纤维化四项试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，检测按照说明书操作进行。仪器采用中国科大创新股份有限公司中佳分公司生产的GC-2010型10探头γ放射免疫计数器。

1.3正常参考值

HA正常参考值<100ng/ml；LN正常参考值40-135ng/ml；PⅢ正常参考值<120ng/ml；CⅣ正常参考值<90ng/ml。

2结果

有7例患者放射免疫分析方法检测肝纤四项中血清LN含量低于正常参考值，分别为14.12、19.20、25.28、17.47、28.32、31.54、29.17ng/ml；而肝纤维化四项中PⅢ、CⅣ、HA含量均高于正常参考值数倍；采用稀释法后，放射免疫分析方法检测LN均高于正常参考值。

3讨论

慢性乙型肝炎肝纤维化生成是指肝脏细胞外基质成分的合成和沉积，是纤维生成增强，降解减少的动态结果[1]。乙肝病毒可以导致肝脏组织发生炎性反应，从而引起肝脏损害。在组织修复中，细胞外基质可以异常增高，可以表现为血清中透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢ-NP）、Ⅳ型胶原（CⅣ）明显升高[2-4]。LN（层粘蛋白）在正常肝组织含量极微，肝纤维化时，肝窦中LN合成，沉积大量增加，作者在乙肝患者血清LN临床放射免疫分析检测工作中，发现其钩状效应（Hook现象）的存在。

HOOK，直译为钩子或镰刀。Miles最初用它来描述在用二步夹心IRMA测定铁蛋白的实验过程中的剂量反应曲线，发现该剂量反应曲线的形状很特殊，在抗原浓度不断增加时,线型上场,达到峰值后,迅速向下弯落，对这种在高剂量区段的、既象钩又似镰的异常线型,当时又无法解释,Miles忠实于实验结果,按其线型的状态,提出了“HD-HOOK”效应这一新的学术名词[5,6]。

目前临床放射免疫测定法可以通过一步法或两步法完成检测。报道认为一步法出现Hook显像主要是由于抗原抗体比例失衡，而两步法则能有效的避免Hook显像[7,8]，也有报道认为两者均可导致Hook显像，只是机制不同，一步法可能是抗原抗体比例过大，两步法可能是由于抗体结构结合抗原后发生改变，导致Hook现象[5,6]。

本研究所使用的肝纤四项放射免疫药盒，采用将限量标记抗原和可变量的待测非标记抗原与定量的特异抗体发生竞争结合反应，通过测定复合物的放射性来计算出待测非标记抗原的量，利用标准曲线完成定量分析。在本次研究中，有7例患者免疫放射分析方法检测血清LN含量较低，分别为14.12、19.20、25.28、17.47、28.32、31.54、29.17ng/ml；而肝纤四项中PⅢ、CⅣ、HA含量均高于正常参考值数倍；LN检测值与临床资料矛盾，因此采用10倍稀释法后，放射免疫分析方法检测发现7例LN均高于正常参考值。说明Hook现象确实需要重视。

由于HOOK效应的发生具有不可预见性,减少和克服HOOK效应是较为棘手的问题。稀释法是其有效的解决方法，另外不同检测方法的出现Hook现象的界值不同，所以也可以利用不同检测方法进行对比验证。总之，还是需要临床提高认识，包括对临床疾病可能出现的血液抗原高值和检验中可能出现的Hook现象，才能有效的避免漏诊、误诊。

参考文献

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[2]于强.肝纤四项检测对肝硬化患者肝纤维化程度的水平观察.中国实验诊断学2011,15(5期):917.

[3]梁健,唐艳芳,邓鑫,等.肝纤维化无创性诊断研究进展.2011,226(11)：799-802.

[4]李晓霞,李彬,李林,等.肝纤维化血清标志物的临床应用评.2012,50(25):75-78.

[5]王金行,王月,刘柏新,等.血清PSA、FPSA/TPSA与ACP联合检测对前列腺癌诊断的意义.现代肿瘤医学.2012,20(5):999-1001.

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[7]吴人光.血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策.湖南师范大学学报（医学版.2010,7(2):43-44.

[8]张锋.血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策分析.实用心脑肺血管病杂志.2012,20(11):1836-1837.