不同标本前处理方法对乳汁HBVDNA检测的影响分析

不同标本前处理方法对乳汁HBVDNA检测的影响分析

丁庚才

广西灵山县妇幼保健院535400

【中图分类号】Ｒ４４６．６２【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１６）０４

【摘要】：目的探究分析不同标本前处理方法对乳汁HBVDNA检测的影响。方法回顾性分析于我院分娩的95例产妇，所有产妇均为血清乙型肝炎e抗原、乙型肝炎核心抗体阳性、乙型肝炎表明抗原阳性，标本选为产妇乳汁，置于冰箱，在4℃条件下过夜，取中间层乳汁，分别采用沉淀检测、上清液浓缩检测及上清检测法对乳汁HBVDNA水平进行平行检测。结果沉淀检测法在HBVDNA阳性检出率方面均高于其他两种方法，在HBVDNA对数浓度方面检测，沉淀检测法平均值均高于其他两种方法，以上差异均有统计学意义，P＜0.05。结论乳汁在冰箱内4℃条件下过夜后，离心中间层乳汁，采用沉淀法检测的准确率最高，且操作简便。

【关键词】：乳汁；HBVDNA；标准前处理方法

乙型肝炎携带者在孕妇中所占比例较多，约为10%～20%，这些患者在产后实施母乳喂养，能否直接导致新生儿乙型肝炎感染，尚无准确定论。因此，要定量检测乳汁HBVDNA。关于HBVDNA检测文献有很多，但未详细阐明标本检测方法。现回顾性分析于我院分娩的95例产妇，用三种方法对其乳汁标本进行检测，现具体报道如下：

1资料与方法

1.1一般资料

选取2015年3月～2016年3月于我院分娩产妇95例，所有患者均为血清乙型肝炎e抗原、乙型肝炎核心抗体阳性及乙型肝炎表面抗原阳性。年龄23～33岁，平均年龄（26.72±3.57）岁。产妇分娩2～3d后，取3～4ml初乳，取前要清洗产妇乳头，置于干燥、无菌试管内，放入温度条件为4℃的冰箱内，过夜，以备后用。

1.2方法

1.2.1沉淀检测

去除过夜后标本的上层乳酪，取中层乳汁100Μl，置于无菌Ep管，温度4℃条件下离心处理，转速15000r/min，时间10min，将上清液去除，将100μLDNA提取液置入。

1.2.2上清液浓缩检测

取100μL中间层上清液，将试剂盒内自带浓缩液100μL注入，温度4℃条件下混合离心，转速15000r/min，时间10min，将上清液去除，将100μLDNA提取液置入。

1.2.3上清液检测

取过夜后的乳汁800μL，置入无菌EP离心管，温度4℃条件下离心，转速15000r/min，时间10min，将脂肪层去除，抽取100μL中间层上清液，将100μLDNA提取液置入。

检测仪器选用ABI9700荧光定量PCR仪（美国公司生产，北京代理），对三种处理方法的HBVDNA水平进行观察比较。检测试剂盒（上海纪宁生物科技有限公司），5×102copy/ml为检出限度，室内质控血清由卫生部临床检验中心提供，参照试剂说明书，检测提取后的DNA样本。

1.3观察指标

对三种标本前处理方法的HBVDNA对数浓度平均值与阳性率进行观察和比较。

1.4统计学分析

对本组研究的数据采用SPSS11.0统计学软件进行分析，正态计量资料采用“±s”表示，组间比较用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较用χ2检验；以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2结果

三种不同处理法对数浓度平均值与阳性检出率方面的比较，沉淀检测法的对数浓度平均值与阳性检出率均高于其他两组，差异有统计学意义，P＜0.05，见表1。

表1三种标本前处理方法的检测结果对比分析

3讨论

血清是检测HBVDNA水平的重要标本[1]。就血清标本处理来看，试剂说明书均配有详细的说明。然而，在现阶段尚未有统一的关于乳汁标本处理方法，不同标本处理方法的检测结果存在的差异性较为显著。

有研究[2]指出，乳汁标本处理方法与血清标本处理方法类似，操作流程为现将乳汁标本离心，然后去除上层脂肪，抽取中间层乳清液，最后进行检测。本文用沉淀法、上清液压缩法及上清液三种不同标本前处理法对乳汁标本进行处理，并进行检测，结果发现，三种方法中沉淀法的阳性检出率最高为89.47%，与蒋雪纷[3]研究的90.00%基本一致。存在差异的主要原因，可能与选取产妇的例数有关。且沉淀法检测对数浓度平均值均高于其他两种方法，结果提示沉淀法的精确度高。

总之，在三种不同标本前处理方法中，采用沉淀法可准确的检出乳汁HBVDNA水平，操作简单，具有临床推广和应用价值。

【参考文献】：

[1]杨国庆.标本前处理方法对乳汁HBVDNA检测的影响[J].世界最新医学信息文摘，2015，15（28）：138.

[2]刘晓，许琳婧，花艳艳，等.标本的处理对乳汁HBV-DNA检测结果的影响[J].中外健康文摘，2014（11）：760.

[3]蒋雪纷.标准前处理方法对乳汁HBVDNA检测的影响[J].世界最新医学信息文摘，2015，15（7）：137-138.